生脈注射液對糖尿病酮癥酸中毒家兔腎功能及MMP、TIMP的影響*

岑 冰 王素莉 沈繼春 葛海燕 丁 悅

（天津市武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院，天津 300162）

糖尿病酮癥酸中毒（DKA）是由于胰島素嚴(yán)重缺乏引起糖尿病患者血液中酮體含量升高，導(dǎo)致酸中毒的一種常見急性并發(fā)癥，多發(fā)生于1型糖尿病患者。流行病學(xué)研究表明，約15%左右糖尿病住院患者可并發(fā)DKA［1］。DKA具有疾病發(fā)生急、進(jìn)展速度快、病情嚴(yán)重等特征，可引起患者發(fā)生酸中毒、電解質(zhì)紊亂、周圍循環(huán)衰竭等，危及腎臟、腦等多個(gè)臟器，其中DKA導(dǎo)致的急性腎功能障礙是威脅糖尿病患者生命的并發(fā)癥之一［2］。如果不能及時(shí)診斷或未及時(shí)給予合理治療，嚴(yán)重者可導(dǎo)致DKA患者死亡［3］。因此，尋找可有效改善DKA患者腎功能損傷的藥物對改善DKA患者預(yù)后，提高生存質(zhì)量具有重要意義。生脈注射液的主要成分是紅參、麥冬和五味子，三者均具有益氣生津、復(fù)脈攝血等功效，臨床上已應(yīng)用于治療氣血閉阻所致急性心肌梗死、心力衰竭及糖尿病等疾?。?］。研究表明，生脈注射液可顯著提高氣陰兩虛型糖尿病患者治療效果，改善患者血糖水平和胰島素指標(biāo)［5］，但其對DKA所致腎損傷中的作用尚不清楚，目前國內(nèi)多采用鹽酸二甲雙胍治療DKA患者，尚未出現(xiàn)生脈注射液治療DKA相關(guān)研究報(bào)道。本研究通過構(gòu)建DKA家兔模型，觀察生脈注射液對DKA家兔腎損傷的保護(hù)作用，并初步探究其作用機(jī)制，旨在探究其應(yīng)用于治療DKA疾病的潛在作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 60只3月齡左右的健康新西蘭兔，許可證號：SCXK-（京）2014-0013，SPF 級，體質(zhì)量 2.1～2.3 kg，購自北京醫(yī)科院動(dòng)物養(yǎng)殖中心。本研究實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均在天津醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水/食，術(shù)前12 h進(jìn)行禁食處理、不禁水。所有實(shí)驗(yàn)均通過天津醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 試劑與儀器 生脈注射液（批號：Z31020241），購自上海和黃藥業(yè)公司；鹽酸二甲雙胍（規(guī)格：0.25 g，批號：H22023147），購自江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司；右旋糖酐40氯化鈉注射液（規(guī)格：100 mL∶6 g右旋糖酐40與0.9 g氯化鈉，貨號：H53020836），購自昆明宇斯藥業(yè)有限公司；鏈脲佐菌素（貨號：18883-66-4）、四氧嘧啶（貨號：A7413-10G），美國Sigma公司，戊巴比妥鈉、BCA試劑盒、4%多聚甲醛，購自上海生工生物技術(shù)公司；戊二醛、蘇木素-伊紅（HE）染色試劑盒、蛋白提取試劑盒，購自碧云天公司；一抗兔源Anti-MMP2（貨號：ab97779）、Anti-MMP9（貨號：ab76003）、Anti-TIMP1 （貨號：ab109125）、Anti-TIMP2 （貨號：ab1828）、Anti-GAPDH（貨號：ab8245）、二抗羊抗兔（貨號：ab6728）、DAB 顯色試劑盒（貨號：ab675），購自美國abcam公司；全自動(dòng)生化檢測儀（AU5800），購自美國BeC公司；蛋白電泳儀、全能型蛋白轉(zhuǎn)印系統(tǒng)，購自美國Bio-Rad公司；光學(xué)顯微鏡 （CX23），購自日本Olympus公司；石蠟切片機(jī)（SDSGA9000）等，購自上?？茀R生物公司等。

1.3 分組與造模 參照文獻(xiàn)中方法制備DKA模型家兔［6］。 造模前，常規(guī)檢測各家兔尿酮體（正常值：0.8～1.4 mmol/L）和血糖（正常值：2.8～5.2 mmol/L），入選家兔兩項(xiàng)指標(biāo)均正常。禁食12 h后，給予家兔150 mg/kg鏈脲佐菌素和150 mg/kg四氧嘧啶（均以0.1 mol/L檸檬酸鈉緩沖液為溶劑，現(xiàn)配現(xiàn)用）耳靜脈注射；對照組家兔注射等劑量0.1 mol/L檸檬酸鈉緩沖液。注射后24 h內(nèi)，每6小時(shí)檢測家兔血糖，若出現(xiàn)低血糖，則適當(dāng)給予葡萄糖溶液靜脈滴注。24 h后，給予家兔100 mL/kg右旋糖酐40氯化鈉注射液注射處理，術(shù)后均常規(guī)飼養(yǎng)。72 h后，檢測各家兔空腹血糖水平，以禁食4 h后血糖≥16.67 mmol/L且血液中酮體≥3.00 mmol/L作為DKA模型制備成功標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)檢測證實(shí)，本研究共制備50只家兔模型成功。按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為DKA組、鹽酸二甲雙胍組、生脈注射液低、中、高劑量組，每組10只，另設(shè)對照組10只。生脈注射液低、中、高劑量組每日按時(shí)予生脈注射液3、9、27 mg/kg灌胃治療（分別按人用藥量的3、9、27倍）；鹽酸二甲雙胍組給予鹽酸二甲雙胍85 mg/（kg·d）灌胃治療（按人用藥量的3倍）；對照組及DKA組給予等體積0.9%氯化鈉注射液灌胃，連續(xù)7 d，每日記錄家兔體質(zhì)量、血糖及血酮體水平。

1.4 標(biāo)本采集與檢測 給藥7 d后，麻醉各組家兔，腹主動(dòng)脈采血5 mL，加入終濃度為50 U/mL的肝素，用于血?dú)夥治黾澳I功能檢測；處死家兔，迅速取出腎臟組織，洗凈后對稱切半，一半固定于4%多聚甲醛中，制備石蠟組織切片；一半切碎后速凍于液氮中，轉(zhuǎn)入-80℃保存。1）動(dòng)脈血?dú)鈾z測：采用低溫離心機(jī)將血液標(biāo)本以3000 r/min轉(zhuǎn)速，離心10 min，取部分上清液，采用全自動(dòng)生化檢測儀進(jìn)行常規(guī)血?dú)夥治觥?）腎功能檢測：將上述血清樣品，采用全自動(dòng)生化檢測儀測定血尿素氮（BUN）和血清肌酐（Scr）含量。3）C 反應(yīng)蛋白（CRP）檢測：采用免疫比濁法測定血清中CRP水平。4）家兔腎組織病變：對家兔腎組織石蠟切片進(jìn)行脫蠟、水化處理，采用HE試劑對切片進(jìn)行染色，中性膠封片，光學(xué)顯微鏡觀察家兔腎組織形態(tài)并采用病理評估法對家兔腎小管損傷程度進(jìn)行半定量評價(jià)。5）蛋白印記（WB）檢測 MMP2、TIMP2、MMP9、TIMP1 蛋白表達(dá)水平：將家兔冷凍腎組織制備勻漿液，加入適量蛋白酶抑制劑，采用蛋白提取試劑盒提取腎組織總蛋白。BCA試劑盒測定蛋白總量后，采用SDS-凝膠電泳分離不同大小分子量的蛋白，采用全能型蛋白轉(zhuǎn)印系統(tǒng)將蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF膜；加入5%脫脂奶粉，封閉1 h；PBS沖洗后分別加入兔源一抗 Anti-MMP2、Anti-MMP9、Anti-TIMP1、Anti-TIMP2、Anti-GAPDH（1∶500）進(jìn)行孵育，4 ℃過夜；加入羊抗兔二抗（1∶4000）孵育，室溫 1 h。經(jīng)化學(xué)發(fā)光試劑增強(qiáng)發(fā)光后，采用Tanon軟件檢測、分析并拍攝圖像。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量數(shù)據(jù)以（±s）表示，行單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組家兔體質(zhì)量、血糖及血酮體水平比較 見表1。與對照組比較，DKA組家兔血糖、血酮水平均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與DKA組比較，生脈注射液低、中、高劑量組家兔血糖、血酮水平均明顯降低（P＜0.05）。生脈注射液低劑量組與鹽酸二甲雙胍組比較體質(zhì)量降低，血糖、血酮增加（P＜0.05），生脈注射液中劑量組與低劑量組比較，體質(zhì)量降低，血糖、血酮水平升高（P＜0.05），生脈注射液高劑量組與中劑量組比較，體質(zhì)量增加，血糖、血酮水平降低（P＜0.05）。

表1 各組家兔體質(zhì)量、血糖及血酮體水平比較（±s）

表1 各組家兔體質(zhì)量、血糖及血酮體水平比較（±s）

與對照組比較，*P＜0.05；與DKA組比較，#P＜0.05；與鹽酸二甲雙胍組比較，◆P＜0.05；與生脈注射液低劑量組比較，※P＜0.05；與生脈注射液中劑量組比較，◇P＜0.05。下同

組 別 n 血酮（m m o l/L）對照組 1 0 1.2 4±0.2 4 D K A 組 1 0 5.1 2±1.0 2*鹽酸二甲雙胍組 1 0 2.0 3±0.2 8*#體質(zhì)量（k g） 血糖（m m o l/L）3.4 9±0.3 6 4.9 5±0.5 8 2.0 3±0.2 3* 2 4.8 9±2.9 8*2.8 9±0.2 4*# 1 3.5 3±1.7 6*#生脈注射液低劑量組 1 0 4.0 9±0.3 1*#◆2.1 6±0.2 7*#◆ 1 9.4 7±1.5 6*#◆生脈注射液中劑量組 1 0 2.4 7±0.3 4*#※◆ 1 4.6 8±1.7 4*#※ 2.2 7±0.2 6*#※生脈注射液高劑量組 1 0 3.0 8±0.5 1*#※◇ 1 2.0 5±1.5 5*#※◇ 1.9 6±0.1 9*#※◇

2.2 各組家兔動(dòng)脈血?dú)庵笜?biāo)比較 見表2。與對照組比較，DKA組家兔氧分壓、氧合指數(shù)、碳酸氫根、pH值均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與DKA組比較，生脈注射液低、中、高劑量組家兔二氧化碳分壓、乳酸水平均明顯下降（P＜0.05），與鹽酸二甲雙胍組比較，生脈注射液低劑量組碳酸氫根降低，氧分壓、二氧化碳分壓、乳酸增加（P＜0.05），與低劑量組比較，生脈注射液中劑量組氧分壓、二氧化碳分壓和乳酸水平降低，氧合指數(shù)、碳酸氫根和pH值水平升高（P＜0.05），與中劑量組比較，生脈注射液高劑量組氧合指數(shù)、碳酸氫根、pH值增加，氧分壓、二氧化碳分壓、乳酸水平降低（P＜0.05），呈劑量依賴性。

2.3 各組家兔腎功能指標(biāo)比較 見表3。與對照組比較，DKA組家兔血清BUN和Scr含量均明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與DKA組比較，生脈注射液低、中、高劑量組家兔血清BUN和Scr含量明顯降低（P＜0.05），與鹽酸二甲雙胍組比較，生脈注射液低、中劑量組BUN及Scr含量均升高（P＜0.05），生脈注射液中劑量組與低劑量組比較，中劑量組BUN及Scr含量降低（P＜0.05）；與中劑量組比較，生脈注射液高劑量組BUN及Scr含量均降低（P＜0.05）。

表2 各組家兔動(dòng)脈血?dú)庵笜?biāo)比較（±s）

表2 各組家兔動(dòng)脈血?dú)庵笜?biāo)比較（±s）

氧分壓組別 n對照組 1 0 D K A組 1 0鹽酸二甲雙胍組 1 0 p H值 乳酸（m m o l/L）7.5 2±1.2 8 1.2 5±0.2 1 6.4 7±1.1 1* 7.5 8±1.0 9*7.3 1±0.9 7*# 2.3 2±0.4 1*#生脈注射液低劑量組 1 0 9 0.1 4±1 1.2 7*#◆ 3 7 9.4 7±5 1.6 5*# 4.0 9±0.3 1*#◆ 9.6 4±1.9 7*#◆ 6.8 9±1.0 9*# 6.7 5±1.1 2*#◆生脈注射液中劑量組 1 0 8 0.4 6±1 0.3 2*#※ 4 1 4.6 8±6 1.7 4*#※ 2.2 7±0.2 6*#※ 1 3.1 9±2.0 1*#※ 7.0 5±1.1 7*#※ 3.7 6±0.6 2*#※◆生脈注射液高劑量組 1 0 7 6.0 8±9.5 3*#※◇ 4 3 5.0 5±4 9.7 3*#※◇ 1.9 6±0.1 9*#※◇ 1 4.8 7±2.1 3*#※◇ 7.4 4±1.2 4*#※◇ 2.0 7±0.3 9*#※◇（m m H g） 氧合指數(shù) 二氧化碳分壓（m m H g）9 6.8 4±1 1.3 6 4 5 7.9 4±7 5.5 7 1.2 4±0.2 4 7 2.0 5±1 0.2 3*3 4 4.8 6±5 2.9 5* 5.1 2±1.0 2*7 9.5 8±9.2 4*# 4 1 9.5 1±6 1.7 6*# 2.0 3±0.2 8*#碳酸氫根（m m o l/L）1 5.8±2.9 7 8.1 5±1.9 8*1 3.4 5±2.2 2*#

表3 各組家兔腎功能指標(biāo)比較（±s）

表3 各組家兔腎功能指標(biāo)比較（±s）

組 別 n對照組 1 0 D K A組 1 0鹽酸二甲雙胍組 1 0 B U N（m m o l/L） S c r（μ m o l/L）8.0 4±1.5 3 2 8.2 6±5.3 7 3 8.4 2±6.5 8* 2 0 2.6 7±3 8.5 7*1 5.0 8±2.7 4*# 1 0 4.1 9±1 8.8 9*#生脈注射液低劑量組 1 0 3 0.0 1±5.8 6*#◆ 1 8 5.4 6±3 4.0 7*#◆生脈注射液中劑量組 1 0 1 9.3 5±3.9 7*#※◆ 1 3 4.5 8±2 4.7 8*#※◆生脈注射液高劑量組 1 0 1 3.1 6±2.3 8*#※◇ 9 9.0 5±1 8.7 4*#※◇

圖1 各組家兔腎組織結(jié)構(gòu)（HE染色，200倍）

2.4 各組家兔腎組織結(jié)構(gòu)比較 見圖1和表4。對照組家兔腎小管結(jié)構(gòu)清晰可見、腎皮質(zhì)組織結(jié)構(gòu)完整、細(xì)胞排列緊致；與對照組比較，DKA組家兔腎組織出現(xiàn)間質(zhì)單核細(xì)胞浸潤（箭頭處），伴有纖維化、壞死、萎縮、擴(kuò)張和腎小管上皮變性等病變；生脈注射液低、中、高劑量干預(yù)后家兔腎組織病理損傷減輕。與對照組比較，DKA組家兔腎組織病理評分顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與DKA組比較，生脈注射液低、中、高劑量干預(yù)后家兔腎組織病理評分明顯降低（P＜0.05），與鹽酸二甲雙胍組比較，生脈注射液低、中劑量組腎組織病理評分均升高（P＜0.05），生脈注射液中劑量組與低劑量組比較、生脈注射液高劑量組與中劑量組比較，腎組織病理評分均降低（P＜0.05）。

表4 各組家兔腎組織病理評分比較（分，±s）

表4 各組家兔腎組織病理評分比較（分，±s）

組 別 n對照組 1 0 D K A組 1 0鹽酸二甲雙胍組 1 0腎組織0.5 1±0.0 9 5.0 7±1.0 2*2.8 4±0.5 3*#生脈注射液低劑量組 1 0 4.5 1±0.7 2*#◆生脈注射液中劑量組 1 0 3.4 9±0.5 8*#※◆生脈注射液高劑量組 1 0 2.6 7±0.4 9*#※◇

2.5 各組家兔血清CRP水平比較 見表5。與對照組比較，DKA組家兔血清CRP含量明顯上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與DKA組比較，生脈注射液低、中、高劑量組家兔血清CRP含量明顯降低（P＜0.05），與鹽酸二甲雙胍組比較，生脈注射液低、中劑量組CRP水平均升高（P＜0.05），與低劑量組比較，中劑量組CRP水平降低；與中劑量組比較，高劑量組CRP水平降低（P＜0.05）。

表5 各組家兔血清CRP水平比較（mg/L，±s）

表5 各組家兔血清CRP水平比較（mg/L，±s）

組 別 n對照組 1 0 D K A組 1 0鹽酸二甲雙胍組 1 0 C R P 7.0 6±1.4 7 1 0 8.4 3±1 9.0 6*2 5.0 8±5.1 4*#生脈注射液低劑量組 1 0 9 1.1 2±1 5.7 5*#◆生脈注射液中劑量組 1 0 5 2.3 6±1 1.8 6*#※◆生脈注射液高劑量組 1 0 2 3.1 5±4.4 9*#※◇

2.6 各組家兔腎組織 MMP2、TIMP2、MMP9、TIMP1蛋白表達(dá)比較 見圖2和表6。與對照組比較，DKA組家兔腎組織TIMP1、TIMP2蛋白表達(dá)顯著增多、MMP2、MMP9蛋白表達(dá)顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；與DKA組比較，生脈注射液低、中、高劑量組家兔腎組織TIMP1、TIMP2蛋白顯著減少，MMP2、MMP9蛋白表達(dá)顯著（P＜0.05）；與鹽酸二甲雙胍組比較，生脈注射液低劑量組 MMP2、MMP9蛋白表達(dá)降低，TIMP1、TIMP2蛋白表達(dá)增加；與低劑量組比較，中劑量組 MMP2、MMP9 蛋白表達(dá)均增加，TIMP1、TIMP2 蛋白表達(dá)均降低；與中劑量組比較，高劑量組MMP2、MMP9 表達(dá)增加，TIMP1、TIMP2 表達(dá)降低（P＜0.05）。

3 討 論

糖尿病是一種以高血糖為主要特征的代謝性疾病，當(dāng)患者體內(nèi)缺乏胰島素時(shí)，機(jī)體會加速脂肪等的代謝，導(dǎo)致血糖水平增高，酮體的大量積累，發(fā)生酮癥酸中毒，影響循環(huán)系統(tǒng)功能，導(dǎo)致腎功能障礙［7］。本研究通過聯(lián)合注射鏈脲佐菌素和四氧嘧啶復(fù)制DKA家兔模型，制備成功后HE染色顯示，DKA組家兔腎組織出現(xiàn)間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤，伴有纖維化、壞死、萎縮等病變，且DKA組家兔血清BUN含量和Scr含量明顯增高，表明DKA可導(dǎo)致家兔腎組織損傷。

圖2 各組家兔腎組織MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2蛋白表達(dá)

表6 各組家兔腎組織 MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2蛋白表達(dá)的比較（±s）

表6 各組家兔腎組織 MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2蛋白表達(dá)的比較（±s）

組 別 n對照組 1 0 D K A組 1 0鹽酸二甲雙胍組 1 0 T I M P 2/G A P D H 0.4 7±0.0 6 2.1 6±0.2 3*0.2 9±0.0 5*#生脈注射液低劑量組 1 0 0.6 3±0.1 4*◆ 0.1 9±0.0 3*#◆ 1.9 2±0.2 1*#◆ 1.1 3±0.1 9*#◆生脈注射液中劑量組 1 0 1.7 5±0.3 4*#※◆ 0.4 1±0.0 7*#※◆ 1.1 1±0.2 0*#※◆ 0.6 3±0.1 1*#※◆生脈注射液高劑量組 1 0 2.1 1±0.3 9*#※◇◆ 0.8 3±0.1 5*#※◇◆ 0.5 5±0.0 9*#※◇◆ 0.1 7±0.0 3*#※◇◆M M P 2/G A P D H M M P 9/G A P D H T I M P 1/G A P D H 1.3 9±0.4 1 1.1 7±0.1 8 0.3 2±0.0 5 0.2 1±0.0 4* 0.2 4±0.0 4* 2.1 3±0.2 2*1.5 4±0.1 8*# 1.1 1±0.1 6*# 0.7 6±0.1 3*#

中醫(yī)認(rèn)為，DKA屬于“陰津虧竭”“陽氣欲絕”的范疇，因此采用回陽固脫、益氣補(bǔ)陰的藥物進(jìn)行治療［8］。生脈注射液主要成分為紅參、麥冬和五味子，具有益血補(bǔ)氣、養(yǎng)陰生津、寧心潤肺等功效［9-10］。本研究采用生脈注射液對DKA家兔進(jìn)行治療，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，生脈注射液治療后家兔血糖、血酮體水平及血液二氧化碳分壓、乳酸均低于DKA組，且血清BUN和Scr水平明顯下降，腎組織病變程度顯著減輕，表明生脈注射液可有效改善DKA家兔酸中毒程度，保護(hù)家兔腎功能，但其機(jī)制尚不清楚。DKA患者體內(nèi)有機(jī)酸含量急劇升高，導(dǎo)致代謝性酸中毒，進(jìn)而引起循環(huán)系統(tǒng)功能障礙，導(dǎo)致腎臟灌注不足，影響腎功能，導(dǎo)致腎臟對酸性代謝物的排出減少，進(jìn)一步加重機(jī)體酸中毒［11］。該過程伴隨腎臟組織細(xì)胞損傷，本研究發(fā)現(xiàn)DKA家兔腎組織出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤、壞死等病變，提示KDA造成的腎損傷可能與炎癥反應(yīng)有關(guān)。Latchoumycandane等發(fā)現(xiàn)，?；撬峥梢种凭凭阅I損傷大鼠腎脂質(zhì)氧化，減輕腎組織中炎性細(xì)胞浸潤，改善酒精所致腎損傷［12］。CRP是一種炎癥因子，在機(jī)體發(fā)生組織損傷時(shí)，其血清含量會出現(xiàn)急劇升高，激活機(jī)體一系列免疫反應(yīng)，清除機(jī)體壞死、損傷的組織細(xì)胞，可作為機(jī)體發(fā)生損傷的標(biāo)志之一［13］。本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，DKA組家兔血清CRP水平顯著升高；與DKA組比較，生脈注射液低、中、高劑量組家兔血清CRP水平明顯下降，且呈劑量依賴性，且生脈注射液高劑量組效果與鹽酸二甲雙胍組效果相當(dāng)，表明生脈注射液可降低DKA家兔血清CRP水平，提示生脈注射液可能通過抑制機(jī)體炎癥反應(yīng)保護(hù)DKA所致家兔腎損傷。

腎小管損傷狀態(tài)下，細(xì)胞外基質(zhì)異常改變，細(xì)胞排列雜亂，甚至纖維化，通透性降低，致腎小管功能損傷，引發(fā)腎功能障礙。本研究中DKA家兔腎組織出現(xiàn)纖維化、肥厚等病變，推測DKA造成的腎損傷可能與細(xì)胞外基質(zhì)堆積有關(guān)。Mazanowska等發(fā)現(xiàn)，腎移植受者血漿MMP-2及尿MMP-2濃度升高，與患者出現(xiàn)蛋白尿有關(guān)，提示MMP-2水平異?？赡茏鳛槟I損傷的生物指標(biāo)［14］。Charitaki等研究提示，腎淀粉樣病變患者腎組織中MMP1、MMP2、MMP9蛋白表達(dá)降低，與疾病嚴(yán)重程度有關(guān)［15］。本研究發(fā)現(xiàn)，DKA家兔腎組織MMP2、MMP9蛋白表達(dá)明顯降低，IMP-1、TIMP-2蛋白表達(dá)明顯升高；生脈注射液低、中、高劑量干預(yù)后，DKA家兔腎組織 MMP2、MMP9蛋白表達(dá)明顯增高，TIMP-1、TIMP-2蛋白表達(dá)明顯降低，且生脈注射液高劑量組MMP2、TIMP1、TIMP2蛋白表達(dá)水平優(yōu)于鹽酸二甲雙胍組，表明生脈注射液通過促進(jìn)MMP2、MMP9，抑制TIMP-1、TIMP-2蛋白表達(dá)，從而改善DKA家兔腎組織纖維化程度，保護(hù)DKA所致腎損傷，且生脈注射液高劑量組效果優(yōu)于鹽酸二甲雙胍組，與EI Hajj等在心肌纖維化大鼠中研究結(jié)果一致［16］。

綜上所述，生脈注射液可能通過抑制炎癥反應(yīng)、促進(jìn) MMP2、MMP9 表達(dá)、抑制 TIMP-1、TIMP-2 表達(dá)，實(shí)現(xiàn)對DKA所致家兔腎損傷的保護(hù)作用。