血小板抗體檢測(cè)的意義及檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展

付謙

摘要 長(zhǎng)期多次輸血維持治療的患者極易產(chǎn)生血小板相關(guān)抗體，從而導(dǎo)致許多嚴(yán)重并發(fā)癥的發(fā)生。文章對(duì)血小板抗體檢測(cè)在輸血中的重要意義、血小板杭體檢測(cè)技術(shù)兩個(gè)方面作一綜述。

關(guān)鍵詞 血小板抗體;檢測(cè);輸血

隨著輸血醫(yī)學(xué)研究的不斷深入，成分輸血越來(lái)越廣泛地應(yīng)用于臨床，輸注血小板成為一種重要的臨床輸血治療手段，尤其是對(duì)治療血小板缺乏引起的出血傾向、血小板功能性障礙具有重要價(jià)值。但臨床上常面臨的問(wèn)題是血小板輸注無(wú)效或效果欠佳，其主要原因可能為患者體內(nèi)產(chǎn)生了大量血小板抗體，對(duì)外來(lái)血小板造成破壞m，特別是長(zhǎng)期多次輸血維持治療的患者極易產(chǎn)生血小板相關(guān)抗體，從而導(dǎo)致許多嚴(yán)重并發(fā)癥的發(fā)生，如血小板輸血性紫癜、血小板輸注無(wú)效、重度出血等，給臨床治療帶來(lái)了難度，并且對(duì)血液資源造成了嚴(yán)重浪費(fèi)。因此，輸血前進(jìn)行血小板抗體檢測(cè)對(duì)于有效改善輸血效果，特別是提高血小板輸注效果顯得尤為重要。本文對(duì)血小板抗體檢測(cè)在臨床輸血中的重要意義及國(guó)內(nèi)幾種常用檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展作一綜述。

血小板抗體檢測(cè)在輸血中的重要意義

血小板抗原、抗體：人類血小板表面的抗原系統(tǒng)較復(fù)雜，可以分為兩類：①血小板自身特有的抗原，如GP、HPA等;②與其他機(jī)體組織或細(xì)胞共有的抗原，如HLA-Ⅰ、ABH等。無(wú)論是共有抗原或自身抗原，都能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生異常免疫反應(yīng)，產(chǎn)生大量血小板抗體，這是血小板輸注無(wú)效的首要原因。致使外來(lái)血小板破壞增多、功能減低、壽命縮短，特別是在多次輸血患者中，55%的患者會(huì)出現(xiàn)PTR或（和）PTP[2]。血小板抗體的產(chǎn)生是由血小板表面不同的相關(guān)抗原決定簇引起的一組復(fù)雜的免疫性疾病。血小板抗體包括針對(duì)GP抗原的血小板特異性抗體（PB IgG）和針對(duì)HLA-Ⅰ類抗原的血小板表面相關(guān)抗體（PA IgG）兩類。隨著患者輸注血小板次數(shù)或輸注量的不斷增加，體內(nèi)血小板抗原被不斷刺激，導(dǎo)致體內(nèi)血小板抗體水平上升，引起輸注無(wú)效及非溶血性輸血的可能性也相應(yīng)增高。

開展血小板抗體檢測(cè)的重要性：輸血科醫(yī)務(wù)工作者必須高度重視多次輸血患者出現(xiàn)PTR和（或）PTP的情況，并及時(shí)明確PTR和（或）PTP是否由機(jī)體免疫反應(yīng)引起，因此，必須做血小板抗體檢測(cè)。若檢驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，則提示PTR和（或）PTP是由免疫因素引起，應(yīng)給予相應(yīng)抗原陰性的血小板樣品，否則將導(dǎo)致嚴(yán)重的輸血反應(yīng)。輕者不能達(dá)到臨床治療的目的，重者出現(xiàn)血小板水平快速降低，引起顱內(nèi)出血或DIC等嚴(yán)重并發(fā)癥。

血小板抗體檢測(cè)技術(shù)

近年來(lái)，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，血小板抗體檢測(cè)技術(shù)開始廣泛應(yīng)用于臨床輸血前檢查中，國(guó)內(nèi)臨床使用比較多的主要包括免疫細(xì)胞化學(xué)法、微柱凝膠技術(shù)以及固相凝集法3類。本文就3類常用檢測(cè)技術(shù)的檢測(cè)原理及優(yōu)劣勢(shì)進(jìn)行簡(jiǎn)要介紹。

微柱凝膠免疫法（MGIA）：這是近年來(lái)發(fā)展的一項(xiàng)快速檢測(cè)技術(shù)，MGIA技術(shù)利用傳統(tǒng)抗原一抗體反應(yīng)，若血小板上結(jié)合了抗血小板抗體，則紅細(xì)胞上抗IgG結(jié)心血小板抗體，導(dǎo)致凝膠介質(zhì)中央有明顯滯留，反之則在離心后沉降于凝膠介質(zhì)底部。MGIA技術(shù)用于臨床具有方便、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)勢(shì)，但血小板本身又有易活化、自身凝集的特點(diǎn)，且實(shí)驗(yàn)所需血小板懸液是隨機(jī)采用的多人份O型機(jī)采血小板，其抗原譜不明[3，4]，因此在實(shí)際臨床工作中容易造成結(jié)果判讀誤差。

免疫細(xì)胞化學(xué)法（SABC）：該檢測(cè)方法是利用待測(cè)血清樣本中血小板抗體與機(jī)體巨核細(xì)胞系的Dami細(xì)胞上的Gp Ⅱ b/Ⅲ a等抗原結(jié)合，使其與生物素化抗人IgG發(fā)生反應(yīng)，然后連接鏈親和霉素一堿性磷酸酶復(fù)合物，從而作用于底物Fast-Red顯色。若血小板抗體陽(yáng)性，則在抗原抗體結(jié)合部位出現(xiàn)紅色指示物，提示檢驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。其陽(yáng)性反應(yīng)強(qiáng)度與血清樣本血小板抗體的量呈正相關(guān)[s1。該技術(shù)靈敏度高、特異性強(qiáng)，但實(shí)驗(yàn)要求較高，需要使用專用儀器（分光光度計(jì)等）進(jìn)行結(jié)果測(cè)定，且操作步驟繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，不適于在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展。

固相凝集法（SARC）：該檢測(cè)技術(shù)在1985年由Rachel等提出，其檢測(cè)原理是將待檢血清或血漿加入到已包被抗人血小板單克隆抗體的微量反應(yīng)板上進(jìn)行反應(yīng)，若待檢血清或血漿中含有血小板抗體，則該抗體能夠與檢測(cè)孔中血小板單層結(jié)合，不能與檢測(cè)孔中血小板單層結(jié)合的成分則被洗滌、祛除。加入抗人IgG及人IgG致敏紅細(xì)胞來(lái)指示反應(yīng)結(jié)果。若待檢樣本中含有血小板抗體，則指示細(xì)胞會(huì)平鋪在檢測(cè)孔底部，即提示結(jié)果陽(yáng)性，而陰性反應(yīng)為指示細(xì)胞聚集于檢測(cè)孔底部中央?？乖瓫Q定簇結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定是該檢測(cè)技術(shù)最大的優(yōu)勢(shì)，原因是血小板溶解前抗體與抗原發(fā)生結(jié)合[6]，用于血小板抗體檢測(cè)有較高靈敏度及特異度。趙菲[7]等的研究結(jié)果表明，SABC技術(shù)靈敏度可高達(dá)85%、特異度73%。我院輸血科自2017年引進(jìn)該項(xiàng)技術(shù)以來(lái)（本地區(qū)首家），臨床血小板輸注效果有了顯著改善，血小板輸注有效率由引進(jìn)該技術(shù)前的72.8%提高至90.5%（血小板輸注效果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)181：血小板輸注后24h CCI>4.5為有效，反之為無(wú)效）。這主要得益于SABC技術(shù)的高靈敏度，能夠同時(shí)檢測(cè)HLA抗體和HPA抗體，及時(shí)篩除陽(yáng)性患者并進(jìn)行特殊處理，避免無(wú)效輸血。

前景和展望

隨著血小板抗體檢測(cè)技術(shù)不斷創(chuàng)新以及血小板抗原類型的不斷出現(xiàn)，當(dāng)前擺在我國(guó)臨床輸血科醫(yī)務(wù)工作者面前的問(wèn)題是如何使血小板抗原的分型工作更加深入，如何提高血小板檢測(cè)技術(shù)的可靠性以及探索更為簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)方法，從而使患者盡快獲得合適的血小板。這也是輸血醫(yī)學(xué)今后探索的方向。同時(shí)，筆者結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為在臨床輸血治療中，在如何有效避免PTR、PTP發(fā)生及進(jìn)一步提高血小板輸注效果上，我們輸血科醫(yī)務(wù)工作者至少還有以下3項(xiàng)工作值得開展：①建立同型輸血HLA、HPA已知型患者檔案;②廣泛開展輸血前血小板抗體檢查，提倡輸注交叉配型陰性的單采血小板;③對(duì)血小板抗體檢測(cè)陽(yáng)性者，應(yīng)給予輸注祛除白細(xì)胞活性的血小板或?yàn)V白血小板制品。為防止血小板同種抗體的產(chǎn)生，避免血液資源浪費(fèi)，提高血小板輸注療效，應(yīng)堅(jiān)持輸血前血小板抗體篩選（尤其是有輸血史的患者）。對(duì)血小板抗體檢測(cè)陽(yáng)性的患者進(jìn)行血小板交叉配合試驗(yàn)。同時(shí)充分提供已知HLA、血小板分型的單采血小板制劑和祛除白細(xì)胞的血液制劑。

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