高 瑩

(湖北省武漢市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科 430000)

呼吸道感染是一種最常見的感染性疾病，根據(jù)其感染部位可將其分為上呼吸道感染及下呼吸道感染[1]。呼吸道感染患者多有咳嗽、咳痰等呼吸道癥狀，但患者臨床表現(xiàn)仍具有個(gè)體差異性，且不同病原體感染的患者臨床表現(xiàn)亦不同。目前研究表明，呼吸道感染主要以病毒感染為主，支原體和細(xì)菌感染亦可導(dǎo)致其發(fā)生感染[2-3]。因此，感染病原體多樣性導(dǎo)致該病的臨床治療具有難度，及早有效地診斷將為患者的治療贏取時(shí)間，降低患者疾病進(jìn)展的可能性。且近年來不斷有文獻(xiàn)報(bào)道[4-6]，我國(guó)抗菌藥物濫用情況嚴(yán)重，耐藥情況嚴(yán)峻，臨床治療中須提高抗感染用藥的針對(duì)性。有研究表明，呼吸道感染病原體主要有：腺病毒(ADV)、肺炎衣原體(CPn)、甲型流感病毒(IFVA)、乙型流感病毒(IFVB)、肺軍團(tuán)菌(LP1)、肺炎支原體(MP)、副流感病毒(PIVs)、Q熱立克次體(QFR)及呼吸道合胞病毒(RSV)[7-8]。本研究采用間接免疫熒光法(IFA)進(jìn)行病原體IgM聯(lián)合檢測(cè)，旨在探討其在成人呼吸道感染診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2014年7月至2017年8月在本院檢驗(yàn)科行呼吸道感染全套檢查的成年患者594例。其中男260例，女334例；年齡19～98歲，平均(59.39±7.84)歲；患者送檢前均進(jìn)行抗菌及抗病原體治療，且本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)進(jìn)行。

1.2方法 所有研究對(duì)象均抽肘靜脈血2～3 mL，常規(guī)離心后取血清25 μL，并用25 μL磷酸鹽緩沖液(PBS)進(jìn)行稀釋待用。檢測(cè)前先將取150 μL吸附劑于離心管，加入30 μL稀釋后的血清后用移液槍吹打混勻，而后進(jìn)行高速離心后待用，13 000 r/min，離心10 min。取高速離心后血清15 μL于載玻片孔中，而后將其放入濕盒中固定90 min，溫度控制為37 ℃。固定完成后將玻片放入PBS浸潤(rùn)的容器中，并放于搖床搖動(dòng)10 min。而后用蒸餾水緩慢沖洗并風(fēng)干，加入異硫氰酸熒光素(FITC)15 μL后再次放入濕盒中，濕盒條件不變，時(shí)間控制為30 min。再次重復(fù)PBS沖洗操作后風(fēng)干并封閉玻片，用熒光顯微鏡觀察染色情況，視野調(diào)至400倍。記錄每個(gè)患者感染病原體類型并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.3觀察指標(biāo) 所有患者呼吸道病原體檢測(cè)結(jié)果；呼吸道病原體合并感染發(fā)生情況；易感染病原體在不同年齡段患者中的感染情況。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS23.0軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料采用百分?jǐn)?shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1呼吸道病原體檢測(cè)結(jié)果 呼吸道病原體檢測(cè)顯示，594例研究對(duì)象中共有208例呼吸道病原體陽性表達(dá)，總陽性率為35.02%。MP、IFVB、PIVs和IFVA的陽性率明顯較高，分別為16.16%(96/594)、13.13%(78/594)、9.60%(57/594)、7.07%(42/594)，其他病原體感染率由高到低分別為RSV[2.36%(14/594)]、ADV[1.35%(8/594)]、LP1[0.67%(4/594)]、CPn[0.17%(1/594)]、QFR[0.00%(0/594)]。

2.2兩種呼吸道病原體合并感染發(fā)生情況 對(duì)伴有兩種呼吸道病原體感染的患者數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)顯示，合并兩種呼吸道病原體感染共53例，陽性率為8.92%，在所有研究對(duì)象中所占比例為25.48%；其中“IFA+IFB”“IFB+PIV”“IFB+MP”和“MP+PIV”陽性率明顯高于合并其他兩種呼吸道病原體感染率，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.33種呼吸道病原體合并感染發(fā)生情況 對(duì)合并有3種呼吸道病原體感染的患者數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)顯示，合并3種呼吸道病原體感染共25例，陽性率為4.21%，在所有研究對(duì)象中所占比例為12.02%；其中“IFA+IFB+MP”“IFA+IF+PIV”“IFB+MP+PIV”陽性率明顯高于合并其他3種呼吸道病原體感染陽性率，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.4易感染病原體在不同年齡組患者中的感染情況 通過對(duì)各年齡段主要呼吸道病原體IFVA、IFVB、MP及PIVs的統(tǒng)計(jì)分析顯示，隨著年齡的增長(zhǎng)，這4種病原體的感染率增加，且>18～30、>30～40歲年齡組的患者IFVB、MP及PIVs的感染率明顯更高，>18～30歲年齡組患者IFVA感染率高于其他各組感染率，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表1 兩種呼吸道病原體合并感染發(fā)生情況(%)

注：與IFVA+IFVB比較，*P<0.05；與IFVB+PIV比較，#P<0.05；與IFVB+MP比較，&P<0.05；與MP+PIV比較，△P<0.05

表2 3種呼吸道病原體合并感染發(fā)生情況(%)

注：與IFVA+IFVB+MP比較，★P<0.05；與IFVA+IFVB+PIV比較，◆P<0.05；與IFVB+MP+PIV比較，□P<0.05

表3 易感染病原體在不同年齡段患者中的感染情況[n(%)]

注：與>18～30歲年齡組比較，☆P<0.05；與>30～40歲年齡組比較，◎P<0.05

3 討 論

呼吸道作為人體與外界進(jìn)行氣體交換的重要場(chǎng)所，是人體生命活動(dòng)的基本保證，當(dāng)其發(fā)生炎癥時(shí)可刺激炎癥部位組織分泌炎性介質(zhì)而產(chǎn)生咳痰等相應(yīng)癥狀，且患者呼吸功能可受到顯著影響，若不能得到及時(shí)治療患者病情可進(jìn)一步加重[9-10]。呼吸道感染的主要病原體為病毒和支原體，其主要傳播途徑為飛沫傳播或污染物接觸傳播。有文獻(xiàn)報(bào)道，隨著我國(guó)人口的不斷增加和城市人口的密集化，呼吸道感染疾病的發(fā)病率呈明顯上升的趨勢(shì)[11-12]。由于其傳播速度較快，及早預(yù)防和有效地診斷治療對(duì)疾病傳播情況的控制和患者疾病治療均有重要意義。且近年來不斷有文獻(xiàn)報(bào)道，MP、CPn等非典型性病原體引起的呼吸道感染發(fā)病率逐年上升，患者可在無明顯誘因情況下出現(xiàn)高熱[13-15]。既往我國(guó)對(duì)抗菌藥物用藥限制較小，臨床對(duì)非典型性呼吸道感染患者的用藥主要是多種藥物聯(lián)合治療，使得抗菌藥物使用頻率大大增加，加劇了病原體耐藥的發(fā)展。因此，及早診斷呼吸道感染患者的病原體類型將有利于對(duì)患者進(jìn)行針對(duì)性的抗感染治療，一方面降低了抗菌藥物耐藥發(fā)生的可能性，另一方面也減少了患者經(jīng)濟(jì)壓力，提高患者臨床治療效果。

目前，臨床上主要診斷呼吸道感染病原體的方法有病原體分離培養(yǎng)、電鏡檢測(cè)、PCR及免疫熒光檢測(cè)，其中病原體分離培養(yǎng)是既往診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但是其檢測(cè)時(shí)間過長(zhǎng)且檢測(cè)率較低；電鏡檢查的準(zhǔn)確度較高，但是其檢測(cè)條件較高，且檢測(cè)費(fèi)用昂貴；PCR檢測(cè)是一種新型的檢測(cè)方式，但是由于其對(duì)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室具有較高要求，且目前尚不能全部檢測(cè)常見的幾種病原體。免疫熒光檢測(cè)是一種借助熒光顯微鏡對(duì)病原體進(jìn)行觀察檢測(cè)方法，免疫熒光技術(shù)最早在臨床上應(yīng)用是直接在鏡下觀察病原體形態(tài)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行診斷，但此種方法與常規(guī)鏡下觀察的區(qū)別度不大，對(duì)呼吸道病毒的診斷具有較大難度。采用IFA法進(jìn)行病原體IgM檢測(cè)是將病原體抗體IgM進(jìn)行熒光素分子偶聯(lián)后再進(jìn)行細(xì)胞孵育，當(dāng)檢測(cè)物中含有某病原體時(shí)，熒光標(biāo)記的IgM抗體可特異性結(jié)合抗原，利用熒光顯微鏡進(jìn)行鏡下觀察即可通過其偶聯(lián)熒光蛋白的顏色進(jìn)行病原體類型的判斷。由于抗原抗體的反應(yīng)具有特異性，IFA法檢測(cè)病原體IgM的準(zhǔn)確度可大大提升，通過聯(lián)合多種病原體IgM進(jìn)行檢測(cè)即可有效診斷呼吸道病原體的類型。

本研究利用IFA法進(jìn)行病原體聯(lián)合檢測(cè)，對(duì)呼吸道感染最常見的ADV、CPn、IFVA、IFVB、LP1、MP、PIVs、QFR及RSV共9種病原體進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，研究結(jié)果顯示，594例檢查對(duì)象中呼吸道病原體陽性表達(dá)率高達(dá)35.02%，且MP、IFVA、IFVB和PIVs的陽性率明顯較高。合并兩種呼吸道病原體感染共53例，陽性率為8.92%，在所有陽性患者中占比25.48%；“IFA+IFB”“IFB+PIV”“IFB+MP”及“MP+PIV”陽性率明顯高于合并其他兩種呼吸道病原體的陽性率，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。合并3種呼吸道病原體感染共25例，陽性率為4.21%，在所有陽性患者中占比12.02%；其中“IFA+IFB+MP”“IFA+IFB+PIV”及“IFB+MP+PIV”陽性率明顯高于合并其他3種呼吸道病原體感染的陽性率，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。通過對(duì)患者臨床資料分析顯示，隨著年齡的增長(zhǎng)，IFVA、IFVB、MP及PIVs 4種病原體的感染率增加，且IFVB、MP及PIVs的感染率在>18～30、>30～40歲年齡組患者中較高，IFVA感染率在>18～30年齡段患者中最高，與既往成人呼吸道感染診斷情況相符[16-17]。

綜上所述，采用IFA法對(duì)病原體IgM進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)能有效診斷成人呼吸道感染類型，有利于臨床對(duì)成人呼吸道感染病原體的分析，值得在臨床推廣應(yīng)用。