方磊涵,王 振,王 留,畢玉霞

（1.商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院,河南 商丘 476100;2.河南省中獸醫(yī)藥研究院 ,河南 鄭州 450011）

近年來,由于養(yǎng)雞業(yè)的集約化飼養(yǎng)和各種抗生素藥物的濫用以及全球性動(dòng)物疫病的大規(guī)模暴發(fā),導(dǎo)致畜產(chǎn)品安全和質(zhì)量問題越來越受到人們的關(guān)注。尋找安全、高效、無毒、無污染的綠色添加劑逐步替代抗生素和化學(xué)藥物在養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用,已成為畜牧業(yè)行業(yè)的發(fā)展趨勢。中藥,其中補(bǔ)益類中藥具有健脾開胃,抗菌促生長,增強(qiáng)動(dòng)物免疫機(jī)能等功能,與化藥相比,具有資源豐富,副作用小,低毒低殘留等優(yōu)點(diǎn),近年來已成為國內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)。

多糖是主要的生命物質(zhì)成分之一,具有廣泛的生物活性,特別是在免疫調(diào)節(jié)方面的表現(xiàn)更為突出。大多數(shù)中藥都含有多糖活性成分,在免疫調(diào)節(jié)和免疫細(xì)胞激活及免疫功能改善等方面都發(fā)揮了很好的作用[1]。另有報(bào)道,植物多糖還具有提高動(dòng)物生長性能、提高飼料的利用率和降低料重比的作用[2]。,因此,中藥多糖的開發(fā),在提高機(jī)體免疫力、提高動(dòng)物生產(chǎn)性能、提高機(jī)體抗病力和抗感染及預(yù)防疾病等方面具有廣闊的前景。本試驗(yàn)是在肉雞的日糧中添加中藥復(fù)方多糖,觀察其對雞生長性能和免疫指標(biāo)的影響。深入探討中藥復(fù)方多糖來作為抗生素的替代品,以確定最佳劑量,為肉雞的安全生產(chǎn)提供有效的防制措施。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 中藥復(fù)方多糖:選用黃芪、黨參、山楂、丹參、白術(shù)、茯苓、淫羊藿、補(bǔ)骨脂、生地、熟地、馬齒莧、甘草等12味具有補(bǔ)氣生津、活血化瘀、健脾和胃、溫腎壯陽的中藥（購于商丘市天倫大藥房）,由商丘華康動(dòng)物藥業(yè)有限公司提取其中的多糖,多糖含量為69.80%。

絞股藍(lán)多糖:實(shí)驗(yàn)室自制,其方法參見習(xí)南等[3]多糖的制備,制得多糖含量為47.86%。

免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）檢測試劑盒,購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)雞的分組及處理 將1日齡健康A(chǔ)A肉雛雞（由商丘科豐禽業(yè)公司提供）300只,隨機(jī)分為5個(gè)處理組,每組5個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)12只。各組雛雞初始體重組間差異不顯著。其中對照組飼喂基礎(chǔ)日糧;試驗(yàn)Ⅰ組飼喂基礎(chǔ)日糧+絞股藍(lán)多糖400 mg/kg;試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組分別給予基礎(chǔ)日糧+中藥復(fù)方多糖200 mg/kg、400 mg/kg、600 mg/kg（見表1）。試驗(yàn)期42 d,分為1～21 d和22～42 d兩個(gè)階段。

1.2.2 飼養(yǎng)管理 飼料為單縣六合飼料有限公司生產(chǎn)。飼養(yǎng)管理方法和飼養(yǎng)條件及雞舍消毒均相同。試驗(yàn)雞采用疊層式籠養(yǎng),自由采食和飲水,7日齡時(shí),雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗（La Sota株+H120株）滴鼻免疫;14日齡時(shí),雞傳染性腔上囊中等毒力活疫苗點(diǎn)眼、滴鼻免疫。第一周雞舍溫度控制在32℃ ～35℃,第二周30℃ ～32℃,以后每周降2℃。4周后為室溫下飼養(yǎng),24 h光照。

表1 試驗(yàn)雞的分組及處理

1.2.3 指標(biāo)測定

1.2.3.1 生產(chǎn)性能指標(biāo)的測定 試驗(yàn)前將所有雛雞以重復(fù)為單位稱重計(jì)算出初始平均體重。記錄各階段補(bǔ)料量,分別在21和42日齡晚斷料,在禁食12 h后進(jìn)行空腹稱重。試驗(yàn)期間及時(shí)記錄死雞重和死雞時(shí)剩料重,準(zhǔn)確記錄試驗(yàn)期內(nèi)的給料量和撒料量。計(jì)算其平均日增重和日采食量及料肉比。

1.2.3.2 免疫器官指數(shù)（脾臟、胸腺、腔上囊）的測定于試驗(yàn)第21天和42天每重復(fù)組各隨機(jī)選取2只肉雞,頸部放血處死,取脾臟、胸腺、腔上囊,清理干凈后稱重,分別計(jì)算出脾臟、胸腺及腔上囊指數(shù)。

1.2.3.3 血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM含量的測定 分別于試驗(yàn)第21天、42天,每個(gè)重復(fù)組各隨機(jī)選取2只肉雞,禁食2 h后經(jīng)翅靜脈采血,靜置10 min,3 000 r/min離心10 min,制備血清。操作時(shí)嚴(yán)格按照ELISA檢測試劑盒說明書進(jìn)行,,用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,通過計(jì)算分別得到免疫球蛋白IgA、IgG、IgM的含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行處理分析,各組數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示,采用方差分析進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 中藥復(fù)方多糖對雛肉雞生產(chǎn)性能的影響 由表2可見,與對照組相比,1～21 d階段,試驗(yàn)各組的日增重均有明顯的提高,試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各組顯著高于對照組（P＜0.05）;試驗(yàn)Ⅰ組與對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）;日采食量沒有明顯的變化;試驗(yàn)各組的料重比均有降低,但差異均不顯著（P＞0.05）。22～42 d階段,試驗(yàn)四個(gè)組日增重均顯著高于對照組（P＜0.05）;試驗(yàn)四個(gè)組日采食量也均高于對照組,但無顯著性差異（P＞0.05）;試驗(yàn)各組之間料重比與對照組比較有下降趨勢,但無顯著性差異。兩個(gè)階段的平均日增重,中藥復(fù)方多糖三個(gè)組均好于絞股藍(lán)組,料重比圴低于絞股藍(lán)組。

表2 中藥復(fù)方多糖對肉雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 中藥復(fù)方多糖對肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響 由表3可見,21 d時(shí),與對照組相比,4個(gè)試驗(yàn)組的胸腺指數(shù)和腔上囊指數(shù)均有提高,脾臟指數(shù)均有降低,但均無顯著差異（P＞0.05）。42 d時(shí),4個(gè)試驗(yàn)組的胸腺指數(shù)比對照組有顯著或極顯著提高（P＜0.05或P＜0.01）;腔上囊指數(shù)與21 d時(shí)相比呈上升趨勢,試驗(yàn)Ⅲ組、Ⅳ組比對照組提高明顯（P＜0.05）;脾臟指數(shù)較對照組也有了明顯的提高（P＜0.05）。第二階段與第一階段相比,免疫器官指數(shù)均呈上升趨勢。中藥復(fù)方多糖3個(gè)組的免疫器官指數(shù)除22～42 d試驗(yàn)Ⅱ組的胸腺指數(shù)外,其余各組之間沒有顯著性差異。

2.3 中藥復(fù)方多糖對血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）的影響 由表4可見,21 d時(shí),各試驗(yàn)組IgA、IgG、IgM的含量均高于對照組,IgA的含量各組間無顯性差異（P＞0.05）,與對照組相比,試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組的IgG含量顯著提高（P＜0.05）;IgM含量,除試驗(yàn)Ⅰ組外,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組都有明顯提高（P＜0.05）;中藥復(fù)方多糖三個(gè)組間差異不顯著（P＞0.05）。42 d時(shí),與對照組相比,試驗(yàn)4個(gè)組IgA、IgG的水平有顯著提高（P＜0.05）,試驗(yàn)各組間沒有顯著性差異（P＞0.05）,IgM的含量比對照組略有提高,但沒有顯著性差異（P＞0.05）。

表3 中藥復(fù)方多糖對肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響 （g/kg）

表4 中藥復(fù)方多糖對血清IgA、IgG、IgM的影響 （g/L）

3 討論

3.1 中藥復(fù)方多糖對肉雞生產(chǎn)性能的影響 大量研究表明,中藥多糖作為具有生物免疫活性的物質(zhì),在畜牧業(yè)生產(chǎn)中可促進(jìn)動(dòng)物生長,提高動(dòng)物生產(chǎn)性能,提高機(jī)體的免疫功能,提高飼料利用率,降低飼養(yǎng)成本。謝紅兵等[4]在日糧中添加150 mg/kg、300 mg/kg、450 mg/kg 的香菇多糖 28 d,結(jié)果雞在14、21、28、35日齡時(shí)的體重明顯高于對照組（P＜0.05）。譚本杰等[5]研究表明,酵母多糖添加能顯著提高肉雞生產(chǎn)性能,增強(qiáng)機(jī)體免疫力。岳永波等[6]試驗(yàn)證明,黃芪多糖對肉雞具有促生長作用,添加1g/kg、2g/kg黃芪多糖時(shí),對母雞的促生長作用最明顯（P＜0.05）。伍松陵等[7]在肉雞飼料中添加200 mg/kg的樸菇多糖粉可使雞的日增重提高10.75%,節(jié)約飼料消耗7.18%,單位增重飼料原料成本下降6.45%。王學(xué)斌等[8]、金光明等[9]研究表明,通過給雛雞添加黃芪多糖后,可明顯提高雛雞日增重,降低采食量和料肉比,說明在一定程度上黃芪多糖能提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能。本試驗(yàn)選用黃芪、黨參、山楂、丹參、白術(shù)、茯苓、淫羊藿、補(bǔ)骨脂、生地、熟地、馬齒莧、甘草等12味具有補(bǔ)氣生津、活血化瘀、健脾和胃、溫腎壯陽的中藥組方而制得的多糖可以顯著提高肉雞的平均日增重,日采食量,降低料重比,以400 mg/kg的量添加效果最好。另外,兩個(gè)階段（1～21 d和22～42 d）在提高雞的生產(chǎn)性能上,中藥復(fù)方多糖作用優(yōu)于絞股藍(lán)多糖。

3.2 中藥復(fù)方多糖對免疫機(jī)能的影響

3.2.1 中藥復(fù)方多糖對肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響 大量研究證實(shí),中藥多糖可以通過促進(jìn)免疫器官發(fā)育,提高細(xì)胞免疫和體液免疫水平,增強(qiáng)紅細(xì)胞免疫功能,促進(jìn)吞噬細(xì)胞吞噬等功能而起到免疫增強(qiáng)作用。禽類的主要免疫器官包括胸腺、脾臟、腔上囊,它們參與機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫,免疫器官和免疫球蛋白是衡量動(dòng)物免疫機(jī)能的重要指標(biāo)。雷莉輝等[10]研究表明,在肉仔雞的日糧中添加不同劑量的香菇多糖,肉仔雞的免疫器官指數(shù)均顯著高于對照組（P＜0.05）。于紅梅[11]研究證實(shí),低、中、高劑量的淫羊藿多糖對肉雞的免疫器官指數(shù)、免疫球蛋白、細(xì)胞因子均有增強(qiáng)作用,一些免疫指標(biāo)超過了對照組和免疫抑制組。石念進(jìn)等[2]探討了中藥復(fù)方多糖（黃芪、黨參、茯苓、麥冬等組成）對雞的生長及免疫作用,結(jié)果顯示,在28、35d時(shí),0.04%復(fù)方多糖組和0.08%復(fù)方多糖組的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和腔上囊指數(shù)與對照組之間差異極顯著（P＜0.01）,在一定程度上,中藥復(fù)方多糖可以促進(jìn)雛雞的免疫器官的發(fā)育,增強(qiáng)雛雞的免疫力。張紅英等[12]研究表明,肌肉注射懷山藥多糖溶液高、低劑量各0.3 ml/羽,連用3 d,用藥后第 7、14、21、28、35、42 天雞的免疫器官指數(shù)均高于對照組,具有增強(qiáng)雞的免疫功能。本試驗(yàn)表明,中藥復(fù)方多糖的添加能夠使肉雛雞各免疫器官的相對重量提高,其42 d時(shí)效果好于21 d,這說明中藥復(fù)方多糖的添加效果與飼喂劑量、飼喂時(shí)間有關(guān)。以試驗(yàn)Ⅲ組（400 mg/kg中藥復(fù)方多糖）和Ⅳ組（600 mg/kg中藥復(fù)方多糖）的效果最好,但兩組間無顯著性差異,從節(jié)約成本方面考慮飼料中添加400 mg/kg中藥復(fù)方多糖量最為經(jīng)濟(jì)適用。

3.2.2 中藥復(fù)方多糖對肉仔雞血清免疫球蛋白含量的影響 免疫球蛋白是具有抗體活性的動(dòng)物蛋白,經(jīng)抗原刺激后轉(zhuǎn)化為抗體。其中IgG是血清中免疫球蛋白含量最高的,占75%,它是動(dòng)物在自然感染和人工主動(dòng)免疫后產(chǎn)生的主要抗體;IgM是一種高效能抗體,其含量僅次于IgG,占血清總Ig的10%～12%具有較強(qiáng)的殺菌溶菌、溶血及凝集作用;IgA是機(jī)體黏膜中主要抗感染免疫的抗體,是抵御病原體入侵的第一道防線,對免疫球蛋白水平的檢測通常是衡量機(jī)體免疫狀況的常用指標(biāo)[13]。王佳麗等[14]研究表明,飼料中添加中藥復(fù)方制劑使肉仔雞血清免疫球蛋白水平均有不同程度提高,可增強(qiáng)肉仔雞的體液免疫機(jī)能。王瑩等[15]試驗(yàn)結(jié)果證明了黃芪多糖飼料添加劑可提高AA肉雞血清免疫球蛋白水平,21日齡時(shí)高劑量組IgM含量顯著提高;42日齡中、高劑量組免疫球蛋白 IgG和 IgA極顯著升高（P＜0.01）。王建東等[16]用枸杞多糖拌料,連用7 d,結(jié)果表明,IgA、IgG、IgM含量在跟蹤飼喂7 d和跟蹤14 d都有增長趨勢。本試驗(yàn)在飼料中添加中藥復(fù)方多糖后,21 d時(shí),高、中、低中藥復(fù)方多糖組IgA、IgG、IgM的含量有了不同程度的提高,IgG含量比對照組分別提高了7.60%、13.78%和10.22%（P＜0.05）,IgM的含量分別提高了18.00%、23.33%和 24.67%（P＜0.05）;42 d時(shí),高、中、低中藥復(fù)方多糖組IgA、IgG的水平與第一階段（1～21 d）相比效果更為明顯,并以高、中劑量添加效果最好。

4 小結(jié)

本研究結(jié)果表明,日糧中添加不同劑量的中藥復(fù)方多糖能顯著提高肉雞的日均采食量和平均日增重,提高免疫器官指數(shù)和血清免疫球蛋白含量,從而提高肉雞的生長性能和免疫功能,尤其以400 mg/kg和600 mg/kg的量添加效果最好,且日糧中添加以400 mg/kg中藥復(fù)方多糖為最佳。因此,中藥復(fù)方多糖在養(yǎng)雞生產(chǎn)上作為免疫增強(qiáng)劑具有很好的應(yīng)用前景。