2侯鳳香2

(1.溫州科技職業(yè)學(xué)院，浙江 溫州 325006；2.溫州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院)

大腸桿菌為環(huán)境常在菌，經(jīng)口進(jìn)入消化道，繁殖定居、終生伴隨，通過糞便散播于周圍環(huán)境，是一類能夠引起人和動物共同感染的重要人獸共患病病原[1]。隨著生豬大規(guī)模集約化生產(chǎn)養(yǎng)殖，豬大腸桿菌病的防治難度越來越大，特別是該病的防治主要依賴于抗生素，隨著抗菌藥物的大量使用，耐藥菌株不斷增加，并且呈現(xiàn)多重耐藥，增加養(yǎng)殖成本，居高的病死率更是造成巨大經(jīng)濟(jì)損失；殘留的藥物、耐藥菌不僅污染環(huán)境與食品，造成公共衛(wèi)生安全隱患，更是對人類身心健康造成巨大威脅。因此加強(qiáng)對該病的診斷與檢測，通過“少用藥”“用好藥”，是確保生豬產(chǎn)品安全，促進(jìn)養(yǎng)豬業(yè)的綠色化、生態(tài)化發(fā)展重要途徑[2-3]。

1 病原

大腸桿菌為原核生物，需氧或兼性厭氧菌，革蘭氏染色為紅色、陰性、短桿菌，無芽孢、常無莢膜、一般有數(shù)根鞭毛。大腸桿菌抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，菌體抗原主要為O抗原、H抗原、K抗原，通常以O(shè)∶K∶H的排列來表示其血清型，目前已知的O抗原173種、K抗原103種、H抗原60種，因此大腸桿菌血清型眾多，且相互之間交叉缺乏保護(hù)，疫苗預(yù)防效果不佳[4]。該菌對營養(yǎng)要求不高，在血瓊脂平板和普通瓊脂平板上生長良好，對外界溫度的抵抗力不強(qiáng)，通常60℃經(jīng)過15 min即可滅活，常見的普通消毒劑如：百毒殺、過氧乙酸、優(yōu)氯凈等均可迅速將其殺死。

該病一年四季均可發(fā)生，寒冷多雨潮濕的季節(jié)發(fā)病嚴(yán)重，溫暖干燥的季節(jié)發(fā)病少，天氣突然變化、陰冷潮濕、飼料或是飼養(yǎng)條件的改變、衛(wèi)生狀況差等都可導(dǎo)致該病的發(fā)生。在任何豬場均有可能造成流行，難以根治。患病和攜帶病菌的動物為主要傳染源，通過糞便排出病原體，污染外界環(huán)境如：飼料、水源、空氣、器具以及母豬的皮膚、乳頭等，分散于周邊，長時(shí)間存在。新生仔豬通過飲食接觸被污染的母豬及周邊環(huán)境，從而感染致病性大腸桿菌引起腹瀉[5]。

2 臨床表現(xiàn)

大腸桿菌病在生豬養(yǎng)殖行業(yè)對仔豬生長階段危害最為嚴(yán)重，主要體現(xiàn)在仔豬黃痢、白痢病和仔豬水腫病。

2.1仔豬黃痢 仔豬黃痢被稱為早發(fā)性的大腸桿菌病，是由于仔豬感染病原性大腸桿菌而引起的一種急性且致死性高的疾病。主要表現(xiàn)以急性腹瀉、排黃色水樣稀便、迅速消瘦，終因脫水而死亡。1-3日齡的仔豬患病率高，但隨著豬日齡的增加豬體患病率逐漸降低。

該病患病范圍廣，季節(jié)和氣候變化對仔豬患黃痢的概率存在影響，降水量高的季節(jié)發(fā)病率高，干燥的季節(jié)發(fā)病率低。且密集養(yǎng)殖的發(fā)病率較分散養(yǎng)殖的發(fā)病率高。

2.1.1臨床特征 病原性大腸桿菌的潛伏期短，一般在1-3 d，有少數(shù)會在7日齡左右發(fā)病。傳染快，如豬窩內(nèi)出現(xiàn)一頭病豬，該窩其余豬會在1-2 d內(nèi)相繼患病，死亡率高達(dá)100%。發(fā)病特征最初為急性腹瀉，排出黃灰色帶有腥臭氣味稀薄如水樣的糞便，腹瀉頻率高，每隔數(shù)分鐘就會發(fā)生1次腹瀉，病體出現(xiàn)迅速脫水，導(dǎo)致短時(shí)間內(nèi)器官功能衰竭，最后昏迷死亡。

2.1.2剖檢結(jié)果 尸體表面因皮膚干燥而發(fā)生皺縮，口腔內(nèi)壁粘膜發(fā)白，胃部膨大，其內(nèi)容物為不完全消化物。病灶主要位于腸道部位，腸道剖檢可觀察到顯著的腸道急性卡他性炎癥，其中十二指腸部位最為嚴(yán)重，且周圍黏膜有充血腫脹和出血現(xiàn)象，心臟，肝腎和腎臟存在出血與局部壞死[6]。

2.2仔豬白痢 是10-30日齡左右的仔豬養(yǎng)殖過程中較為常見的疾病。仔豬白痢特征為排乳白色或灰白色粥樣稀便，該病具有較高的發(fā)病率，但致死率較低。造成該病的原因與養(yǎng)殖場當(dāng)?shù)氐臍夂蜃兓?、仔豬飼養(yǎng)環(huán)境、衛(wèi)生管理狀況有關(guān)。

2.2.1臨床特征 一般患病仔豬無明顯的體溫變化。病豬以排乳白色或灰白色帶特殊腥臭的粥樣稀便。病豬出現(xiàn)畏寒，體表消瘦，皮膚脫水干燥，發(fā)育遲緩等癥狀。日齡較小的仔豬較易夭折，一般病豬可自愈，該病在痊愈后的豬身上還有可能復(fù)發(fā)。

2.2.2剖檢結(jié)果 部分腸壁黏膜存在充血現(xiàn)象，腸壁較薄有的呈半透明，腸系膜淋巴結(jié)存在輕微腫脹，腸道存在卡他性炎癥。

2.3仔豬水腫病 仔豬水腫疾病是由溶血性的大腸桿菌引起的，該病在仔豬斷奶后1-2周較為常見，主要特征是仔豬身體部位水腫，發(fā)病突然、出現(xiàn)癲癇、麻痹、僵直之類的神經(jīng)癥狀，通常發(fā)病率在5%～30%左右且營養(yǎng)越好，長得越壯的豬發(fā)病率越高，一旦患病病死率高達(dá)90%。該病在春、秋兩季常發(fā)，在缺乏某些維生素(VB和VE)和礦物質(zhì)(硒)時(shí)發(fā)病率較高。

2.3.1臨床特征 仔豬水腫病發(fā)病率低，但具有發(fā)病突然的特點(diǎn)，發(fā)病初期，病豬會出現(xiàn)伏地抽搐、流涎、呼吸衰竭、癲癇、共濟(jì)失調(diào)、行動不自然(倒退，沖撞舍欄，轉(zhuǎn)圈)等癥狀。病豬體表顏色與正常豬無明顯差別，但在部分體表可觀察到有充血現(xiàn)象，體溫在正常值左右，有時(shí)會超過正常值?；疾∝i會表現(xiàn)出厭食或絕食行為。如若不及時(shí)治療，隨著病程延長，在患病豬的眼瞼及頸部，頭部發(fā)生水腫現(xiàn)象，繼而死亡。

2.3.2剖檢結(jié)果 在患病豬胃壁和腸系膜可見明顯成半固體樣水腫，水腫部位變厚且在肌層和黏膜間存在半固體樣水腫液。心包，胸腹腔存在較多積液，肝臟腫大，腎臟存在淤血和水腫，在小腸部分(十二指腸、空腸)黏膜存在彌漫性出血。大腸處存在卡他性腸炎。

3 診斷

通過仔豬發(fā)病后的臨床癥狀和解剖后的病理變化作出初步診斷，然后采集病料，用滅菌棉采集病死豬的直腸糞便或是腸內(nèi)容物，接種于麥康凱培養(yǎng)基，37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24 h，挑取粉紅色菌落接種至伊紅美藍(lán)平板，37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24 h，然后挑取扁平、深紫黑色、濕潤、光滑，帶金屬光澤的菌落，接種至營養(yǎng)瓊脂平板進(jìn)行純培養(yǎng)，37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24 h進(jìn)行細(xì)菌的鑒定。

3.1革蘭氏染色 挑取單菌落，經(jīng)過涂片-干燥-固定-染色等步驟，進(jìn)行鏡檢為：紅色，兩端頓圓中等大小桿菌、單個(gè)或是兩三個(gè)連在一起，無芽孢[7]。

3.2生化實(shí)驗(yàn)

3.2.1氫氧化鉀拉絲試驗(yàn)(0.4 g/10 mL KOH應(yīng)新鮮配制) 取1小滴氫氧化鉀溶液于潔凈玻片上，用接種環(huán)刮取1～2個(gè)新鮮菌落，于溶液中研磨混勻，并每隔幾秒上提接種環(huán)，觀察能否拉出粘絲。能拉出絲者為革蘭氏陰性菌。大多數(shù)革蘭氏陰性菌于5-10 s內(nèi)出現(xiàn)陽性反應(yīng)，有的需要30-60 s，革蘭氏陽性菌在60 s以后仍為陰性。

3.2.2氧化酶試驗(yàn) 用棉簽蘸取細(xì)菌少許，滴加Kovac試劑，呈深紫色為陽性(10～15 s內(nèi)呈紫色)，不變色為陰性。

3.2.3腸桿菌科微量生化反管 可以購買整套腸桿菌科微量生化反應(yīng)管，依據(jù)說明書進(jìn)行操作判定。

3.3PCR鑒定 根據(jù)GenBank 數(shù)據(jù)庫，設(shè)計(jì)通用引物，用純培養(yǎng)的細(xì)菌做底物，進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，然后將擴(kuò)增的產(chǎn)物純化后送生物公司進(jìn)行測序分析，將測序結(jié)果進(jìn)行BLAST 分析，鑒定細(xì)菌[8]。

3.4血清型鑒定 利用微量平板凝集試驗(yàn)鑒定分離株的O 抗原血清型，所有細(xì)菌分離株嚴(yán)格按照試劑產(chǎn)品使用說明書進(jìn)行操作檢測大腸桿菌血清型。

3.5藥敏試驗(yàn) 采用藥敏紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)[3]，貼藥敏紙片,在15 min內(nèi)將紙片貼于平板表面，各紙片中心距離不小于24 mm，通常90 mm平皿可貼6～7個(gè)紙片，孵育16-18 h疊放平板不超過3個(gè)。通過上述操作可以確診本病。

4 綜合防治措施

4.1預(yù)防 豬大腸桿菌病的防制措施主要是以預(yù)防為主，大腸桿菌病發(fā)病原因與豬舍環(huán)境衛(wèi)生好壞和季節(jié)氣候的變化等有關(guān)，要做好該病的預(yù)防工作首先是要改善豬舍環(huán)境及衛(wèi)生條件，豬舍勤消毒，勤打掃，可用生石灰對豬舍進(jìn)行消毒，有條件可使用紫外燈照射消毒。及時(shí)對仔豬進(jìn)行免疫接種，可選用腸桿菌k88、K99、987p 三價(jià)滅活菌苗或是K88、K99 雙價(jià)基因工程菌苗對母豬進(jìn)行免疫接種使新生仔豬對豬大腸桿菌病具有相應(yīng)抗體以減少患病率，有過大腸桿菌病史的養(yǎng)殖場要特別注意免疫接種這一點(diǎn)[9]。

其次在春季、秋季、冬季這些溫度較低的時(shí)候?yàn)樨i舍做好保暖手段，仔豬成長階段對外界季節(jié)氣候變化的適應(yīng)能力較低，若不及時(shí)做好保溫措施會增加仔豬患病的概率，因此豬舍要做好防風(fēng)保暖的措施。豬舍溫度濕度調(diào)控要根據(jù)仔豬不同的生長階段而定1～10日齡左右仔豬：溫度控制在28～32℃左右，相對濕度控制在70%左右；11-30日齡左右仔豬：溫度控制在25～28℃左右，相對濕度控制在65%～70%左右；31-60日齡左右仔豬：溫度控制在22～25℃左右，相對濕度控制在65%左右。

從外面引進(jìn)的仔豬要盡量保持其在原產(chǎn)地的飼養(yǎng)管理方法一周以上，等待仔豬適應(yīng)當(dāng)?shù)厍闆r，再逐漸改用本地豬場飼料配方，且平時(shí)增加仔豬的運(yùn)動量增強(qiáng)抵抗力。對懷孕母豬的管理措施也要加強(qiáng)，保證母豬營養(yǎng)攝取，按照標(biāo)準(zhǔn)配比適用于不同階段懷孕母豬的飼料方案。加強(qiáng)對母豬的待產(chǎn)護(hù)理，生產(chǎn)前用消毒液擦拭母豬乳頭、陰部，時(shí)時(shí)關(guān)注母豬健康，留意母豬有無患乳房或子宮疾病，注意保持產(chǎn)房的衛(wèi)生干凈，切勿使產(chǎn)房受糞污污染。

若是發(fā)生大腸桿菌病時(shí)對豬群中未患病的豬及時(shí)進(jìn)行隔離，對未患病豬投放適量的抗菌藥物，對已經(jīng)病死豬進(jìn)行無害化處理，對豬舍進(jìn)行全面消毒，切斷病菌傳播途徑。

4.2治療

4.2.1仔豬黃痢 仔豬黃痢具有急性且致死性高的特點(diǎn)，一旦發(fā)現(xiàn)有豬患上該病應(yīng)立即與豬群隔離并定期對豬舍進(jìn)行全面消毒以防止病原性大腸桿菌擴(kuò)散并對其余仔豬進(jìn)行藥物預(yù)防，該病可以用抗生素進(jìn)行治療，可選用慶大霉素、新霉素、氨基糖苷類或氟喹諾酮類等抗生素進(jìn)行治療，但大腸桿菌極易對抗生素產(chǎn)生耐藥性，建議使用兩種或多種抗生素交替用藥。使用生物制劑“促菌生”調(diào)節(jié)腸道氧含量來改善腸道內(nèi)菌群平衡。給妊娠期間母豬注射免疫疫苗為新生仔豬提供相應(yīng)抗體。適當(dāng)提高圈內(nèi)溫度，保持圈內(nèi)相對干燥。除此之外還可以用生態(tài)制劑如促菌生與藥用酵母合用，用以調(diào)節(jié)腸道內(nèi)菌群的平衡但要注意生態(tài)制劑不能與抗菌藥物同時(shí)使用，以免抗菌藥物抑制生態(tài)制劑的效果降低藥效。

4.2.2仔豬白痢 仔豬白痢在養(yǎng)殖過程中較為常見，該病危險(xiǎn)性遠(yuǎn)低于黃痢病，對于該病首選藥物有硫酸鏈霉素、硫酸慶大霉素、鹽酸黃霉素等。硫酸慶大霉素控制量應(yīng)在每頭豬2 mL左右，一日注射或是投喂兩次，持續(xù)一周投喂或是注射。鹽酸黃霉素劑量控制在每頭豬5 mg左右，肌注，每日兩次，連續(xù)注射三天。期間也需要注意豬舍內(nèi)部衛(wèi)生以及舍內(nèi)溫度，做到勤打掃，勤消毒。做好仔豬及母豬的飼養(yǎng)管理工作，保證仔豬及母豬的營養(yǎng)攝入，增強(qiáng)生豬體質(zhì)，這樣有助于降低白痢發(fā)病率。還可選用黃連素，大蒜，甘草切碎與白酒混合的浸泡液同時(shí)輔以活性炭、矽炭銀、鞣酸蛋白用于收斂止瀉。

4.2.3仔豬水腫病 仔豬水腫病的治療藥物有硫酸新霉素、硫酸鏈霉素、卡那霉素等，治療時(shí)可以先向病患豬的食料中適量添加鹽類瀉劑，再用硫酸新霉素、硫酸鏈霉素、卡那霉素注射，每天兩次，連續(xù)使用2-3 d。對暫時(shí)未發(fā)病仔豬食料中適當(dāng)添加抗菌藥物或是添加適量的大蒜(每頭10 g )、磺胺嘧啶等。引起仔豬水腫病的其中一個(gè)原因是由于仔豬缺乏相應(yīng)的礦物質(zhì)(硒，鐵)和維生素(VB和VE)所以對仔豬適當(dāng)補(bǔ)充硒和VE、VB有助于治療。有效補(bǔ)硒措施：一周齡仔豬肌注0.5 mL 0.1%亞硒酸鈉。補(bǔ)鐵可選用右旋糖酐鐵劑。

仔豬水腫病發(fā)病突然，一旦發(fā)病死亡率極高，所以要做好應(yīng)對該病的預(yù)防措施，保持良好的豬舍環(huán)境衛(wèi)生，勤消毒。加強(qiáng)斷奶后仔豬的飼養(yǎng)管理，逐漸減少仔豬的吃奶量，使其有過程的斷奶，切不可突然斷奶使其不適應(yīng)，也不能突然改變飼料配方，要注意飼料不能太過單一，對哺乳期仔豬飼料中適當(dāng)添加維生素及礦物質(zhì)增強(qiáng)其抗病能力。

5 小結(jié)

在動物疫病的防治過程中，防重于治的理念一定要落于實(shí)處，同時(shí)要改變傳統(tǒng)的“用好藥，好得快”錯(cuò)誤概念，要加強(qiáng)疫病的診斷與檢測，最好通過藥敏試驗(yàn)選擇廉價(jià)的效果好的藥物，同時(shí)要注意聯(lián)合用藥、輪換用藥，延緩耐藥菌的產(chǎn)生，同時(shí)通過血清型的鑒定，在預(yù)防時(shí)依據(jù)本場的細(xì)菌流行株進(jìn)行疫苗的選擇，做到有的放矢，起到事半功倍的效果。

仔豬大腸桿菌病難以根治，易傳播，隨著規(guī)模化集約化養(yǎng)殖場的建成，豬群密集程度越來越高，仔豬大腸桿菌病的發(fā)病率也在逐漸增加，因此生豬養(yǎng)殖過程中要重點(diǎn)關(guān)注大腸桿菌病的發(fā)生，并做到早發(fā)現(xiàn)，早診斷，早隔離，早治療，切勿延誤最佳治療時(shí)期以免造成無可挽回的經(jīng)濟(jì)損失。