劉國　王博　李勁松　司傳平

[摘要]目的 探討慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者中外周血中CD163和sCD163的臨床表達(dá)水平。方法 選取2015年2月1日～2018年2月10日濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院收治的100例慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者作為觀察組，選取同期100例健康體檢者作為對照組。比較兩組的CD163、sCD163、CD163 mRNA表達(dá)水平及外周血單個核細(xì)胞表面的熒光強(qiáng)度，并分析sCD163與肝損傷關(guān)系。結(jié)果 觀察組的CD163[（47.15±16.11）%]、sCD163水平[（33.45±10.25）%]均高于對照組[（16.11±6.23）、（15.11±6.17）%]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。觀察組的熒光強(qiáng)度[（28.01±8.15）%]高于對照組的[（20.11±1.25）%]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;觀察組的CD163 mRNA表達(dá)量高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。血漿sCD163水平與終末期肝病模型（MELD）評分成正相關(guān)關(guān)系（r=4.652，P<0.05）;與乙型肝炎病毒核酸（HBV-DNA）水平成正相關(guān)關(guān)系（r=5.521，P<0.05）;與人體膽紅素數(shù)值無相關(guān)性（r=6.558，P>0.05）。結(jié)論 CD163和sCD163的臨床表達(dá)在慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者中具有十分重要的作用，其檢測方法簡單直接，與疾病進(jìn)展具有密切的相關(guān)性，值得在臨床中應(yīng)用推廣。

[關(guān)鍵詞]慢加急性乙型肝炎肝衰竭;表達(dá)差異;免疫組化P16蛋白

[中圖分類號] R575.3 ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）11（c）-0070-04

Clinical expression of CD163 and sCD163 in patients with chronic and acute hepatitis B hepatic failure

LIU Guo1，2? ?WANG Bo3? ?LI Jin-song4? ?SI Chuan-ping2▲

1. School of Medicine and Life Sciences， Shandong Academy of Medical Sciences， Ji′nan University， Shandong Provinec， Jinan? ?250062， China; 2. Institute of Immunology and Molecular Medicine， Jining Medical College， Shandong Province， Jining? ?272067， China; 3. College of Forensic Medicine and Medical Laboratory， Jining Medical College， Shandong Province， Jining? ?272067， China; 4. Jining No.2 People′s Hospital， Shandong Province， Jining? ?272000， China

[Abstract] Objective To investigate the clinical expression levels of CD163 and sCD163 in peripheral blood of patients with chronic and acute hepatitis B hepatic failure. Methods One hundred patients with chronic and acute hepatitis B hepatic failure who were admitted to the School of Medicine and Life Sciences of Shandong Academy of Medical Sciences from February 1st， 2015 to February 10th， 2018， were selected as observation group. One hundred healthy people who underwent medical examinations at the same time were selected as control group. The expression levels of CD163， sCD163 and CD163 mRNA and the fluorescence intensity on the surface of peripheral blood mononuclear cells in the two groups were compared， and the relationship between sCD163 and liver injury was analyzed. Results The levels of CD163 （[47.15±16.11]%） and scd 163 （[33.45±10.25]%） in the observation group were higher than those in the control group （[16.11±6.23]， [15.11±6.17]%）， the differences were statistically significant （P<0.05）. The fluorescence intensity of the observation group （[28.01±8.15]%） was higher than that of the control group （[20.11±1.25]%）， the difference was statistically significant （P<0.05）. The expression of CD163 mRNA in the observation group was higher than that in the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. There was a positive correlation between plasma sCD163 level and mode for end-stage liver disease （MELD） score （r=4.652， P<0.05）. There was a positive correlation with the level of hepatitis B virus nucleic acid （HBV-DNA） （r=5.521， P<0.05）. There was no correlation with bilirubin （r=6.558， P>0.05）. Conclusion The clinical expression of CD163 and sCD163 plays an very important role in patients with chronic and acute hepatitis B hepatic failure， its detection method is simple and direct， has close correlation with disease progression， and is worthy of clinical application and promotion.

[Key words] Chronic and acute hepatitis B hepatic failure; Differential expression; Immunohistochemical P16 protein

肝衰竭近年來發(fā)病率呈上升趨勢，主要是指人體肝臟細(xì)胞受到破壞，從而引起人體代謝功能紊亂[1]。肝臟是人體十分重要器官，具有免疫防御、生物轉(zhuǎn)化、合成、解毒等多種功能，當(dāng)受到藥物、乙醇、病毒等各項因素影響后，導(dǎo)致肝細(xì)胞發(fā)生大量壞死，從而引起患者發(fā)生失代償或者自身嚴(yán)重障礙情況。隨著我國人們經(jīng)濟(jì)水平的提高，進(jìn)而導(dǎo)致其飲食習(xí)慣發(fā)生改變，增加我國肝衰竭的發(fā)生風(fēng)險，若治療不及時，將嚴(yán)重影響患者身心健康。而早期對其實施有效診斷十分必要，能夠為其后期治療提供準(zhǔn)確依據(jù)，從而使其臨床治愈率得到提高。目前臨床常用的診斷方法較多，其中以凝血功能檢測最為常見，但該方式存在較多不足，例如：操作十分復(fù)雜、對機(jī)體創(chuàng)傷大等，導(dǎo)致其應(yīng)用受到限制[2-3]。CD163為特異性巨噬細(xì)胞標(biāo)志物，通過清除人體游離血紅蛋白，具有抗氧化損傷以及調(diào)節(jié)人體免疫作用，在人體炎癥反應(yīng)刺激下，其能和配體進(jìn)行結(jié)合，促進(jìn)上皮細(xì)胞黏附和單核細(xì)胞黏附，誘導(dǎo)人體炎性釋放。sCD163主要是由人體膜細(xì)胞表面CD163脫落而來，其具有抑制T細(xì)胞增殖作用，在人體免疫調(diào)節(jié)方面也具有十分重要的作用。因此，本研究選取濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院收治的100例慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者作為觀察組，選取同期100例健康體檢者作為對照組，對慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者中CD163和sCD163的臨床表達(dá)進(jìn)行分析，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2015年2月1日～2018年2月10日濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院收治的100例慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者作為觀察組，同期選取100例健康體檢者作為對照組。觀察組中，年齡40～70歲，平均（55.21±1.05）歲;男50例，女50例。對照組中，年齡41～70歲，平均（56.21±1.15）歲;男51例，女49例。兩組研究對象的年齡、性別等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者和家屬均知情同意研究;②能夠進(jìn)行良好溝通者;③臨床各項資料完善，符合研究需求;④無嚴(yán)重器質(zhì)性疾病以及慢性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有嚴(yán)重臟器疾病者;②嚴(yán)重智力障礙或精神障礙者;③存在其他嚴(yán)重疾病者，如惡性腫瘤疾病、造血系統(tǒng)異常以及血液系統(tǒng)疾病等;④配合度較差，導(dǎo)致無法順利完成研究者。

1.2方法

對兩組研究對象分別進(jìn)行CD163和sCD163的檢測：收集患者血液，將其放置在肝素抗凝管中，上述血液離心分離出血漿后，放置在-20℃溫度下進(jìn)行保存，所有試劑檢測方式均嚴(yán)格按照無菌操作進(jìn)行，然后對CD163、sCD163、CD163 mRNA表達(dá)情況[4-5]進(jìn)行檢測。

所有的慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者核細(xì)胞表面石蠟標(biāo)本均進(jìn)行連續(xù)切片，切片厚度約為4 μm，采用蘇木素伊紅對石蠟切片進(jìn)行染色，由此明確病變的存在，采用免疫組化P16對剩余切片進(jìn)行染色，切片材料為：APES溶液制作的膠片，并進(jìn)行二甲苯脫蠟操作，在預(yù)熱溫度為98℃的抗原修復(fù)液中將切片置入，并采用微波爐進(jìn)行抗原修復(fù)操作，時間約為15 min，直至其呈冷卻狀態(tài)，應(yīng)用PBS液實施沖洗，沖洗時間為5 min，后加入單克隆抗體，將其置于室溫35 min，選擇DAB顯色，以蘇木素復(fù)染，數(shù)秒鐘后沖洗，梯度乙醇脫水，最后封片操作[6]。免疫組織化學(xué)判定：主要分為2個方面，即表達(dá)強(qiáng)度部位以及細(xì)胞中表達(dá)部位，以黃色或棕黃色染色作為陽性結(jié)果，且表達(dá)部位在人體細(xì)胞漿或細(xì)胞核位置，參照臨床半定量標(biāo)準(zhǔn)判定表達(dá)強(qiáng)度，與患者陽性分布情況以及陽性細(xì)胞比例相結(jié)合，詳細(xì)記錄判讀結(jié)果。

1.3觀察指標(biāo)

比較兩組研究對象中的CD163、sCD163、CD163 mRNA表達(dá)水平及外周血單個核細(xì)胞表面的熒光強(qiáng)度，并分析sCD163與肝損傷關(guān)系。使用RT-PCR檢測人體外周血單個核細(xì)胞中CD163 mRNA表達(dá)。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗;相關(guān)性分析采用Pearson檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組研究對象中CD163、sCD163水平的比較

觀察組的CD163、sCD163水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.2兩組外周血單個核細(xì)胞表面的熒光強(qiáng)度的比較

觀察組的熒光強(qiáng)度[（28.01±8.15）%]高于對照組[（20.11±1.25）%]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.3兩組CD163 mRNA表達(dá)情況的比較

觀察組患者的CD163 mRNA表達(dá)量[（0.054±0.001）%]低于對照組[（0.019±0.002）%]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.4血漿sCD163水平與肝損傷程度的相關(guān)性分析

血漿sCD163水平與終末期肝病模型（MELD）評分成正相關(guān)關(guān)系（r=4.652，P<0.05）;與乙型肝炎病毒核酸（HBV-DNA）水平成正相關(guān)關(guān)系（r=5.521，P<0.05）;與人體膽紅素數(shù)值無相關(guān)性（r=6.558，P>0.05）。

3討論

有研究提示[7-8]，在人體重要組成部分中，肝臟具有重要地位，若機(jī)體一旦出現(xiàn)受損情況，易影響其各個功能，比如代謝轉(zhuǎn)化、分泌、解毒、合成等。目前臨床上將其分為兩大類，即慢性肝衰竭或者急性肝衰竭。因此，本研究對慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者中CD163和sCD163的臨床表達(dá)進(jìn)行分析。慢加急性乙型肝炎肝衰竭易損傷人體各個臟器，目前臨床對于該疾病的治療方式較多，雖然能夠產(chǎn)生一定效果，但多數(shù)患者仍存在較高死亡率。研究認(rèn)為，慢加急性乙型肝炎肝衰竭的治愈率與自身機(jī)體狀況具有一定關(guān)聯(lián)性，而正是由于該因素，導(dǎo)致該疾病在臨床具有十分高的死亡率，嚴(yán)重威脅患者的生命安全[9]。而由于該疾病在臨床診斷中具有復(fù)雜的臨床表現(xiàn)，因此，需對其采取聯(lián)合方式檢測，如：血液學(xué)檢測、B超診斷、生化檢驗、腦電圖檢測、微生物檢測等，由此獲得良好的診斷效果[10]。

研究顯示[10]，CD163是血紅蛋白受體，具有抑制人體炎癥作用，在人體免疫反應(yīng)過程中，CD163在抵抗炎癥過程中具有十分重要的作用，而部分學(xué)者認(rèn)為其與日自身炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。本研究結(jié)果提示，該指標(biāo)在慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者機(jī)體中呈現(xiàn)升高趨勢，從而證明該指標(biāo)在人體免疫反應(yīng)過程中具有十分重要的作用[10-11]。部分研究顯示，在人體中只有小部分單核巨噬細(xì)胞表達(dá)該指標(biāo)，并且CD163表達(dá)十分低，一般見于20%單核巨噬細(xì)胞表面中，但是該指標(biāo)表達(dá)十分依賴人體巨噬細(xì)胞分化程度，在各項炎癥因素影響過程中，人體細(xì)胞分化，CD163表達(dá)也呈現(xiàn)顯著上升趨勢[12]。在部分研究中，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)sCD163表達(dá)和膜CD163表達(dá)則成反比關(guān)系，由于多種促炎因子、內(nèi)毒素誘導(dǎo)下，膜CD163易脫落轉(zhuǎn)化成為CD163，在感染影響下，膜表面的指標(biāo)呈現(xiàn)下降趨勢[13]。另外在人體外周血中CD163單核細(xì)胞十分少，其表達(dá)的量也較少，因此，本研究其表達(dá)量也較少。本研究結(jié)果提示，外周血單個核細(xì)胞中CD163的表達(dá)在慢加急性乙型肝炎肝衰竭中存在明顯升高情況，組間存在統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05），但增高幅度相比血漿sCD163較低（P<0.05）。提示在機(jī)體炎癥反應(yīng)過程中，人體血漿sCD163能夠快速脫落，而升高速度十分快，但CD163表達(dá)升高十分溫和且緩慢。但根據(jù)臨床研究顯示，CD163在機(jī)體炎癥因素的刺激下，其水平呈升高趨勢[13-14]。另外，在人體外周血中表達(dá)CD163的單個核細(xì)胞十分少，其所表達(dá)的mRNA含量也較少，有研究在全身性系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病的皮膚標(biāo)本內(nèi)實施RT-PCR檢測，在慢性炎癥反應(yīng)的表達(dá)中，CD163的表達(dá)呈明顯升高的情況，與健康人群相比存在明顯差異。隨著我國內(nèi)外對慢加急性乙型肝炎肝衰竭的研究不斷深入，明確了CD163在慢加急性乙型肝炎肝衰竭的表達(dá)情況。研究發(fā)現(xiàn)，在急性肝衰竭患者中，sCD163呈明顯升高，且sCD163數(shù)值相比對照組健康人群高達(dá)10倍左右，且與患者凝血指標(biāo)、膽紅素指標(biāo)水平具有一定關(guān)聯(lián)性，現(xiàn)已成為急性肝衰竭患者預(yù)后的重要檢測標(biāo)志物[15]。另外，研究發(fā)現(xiàn)，sCD163在慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者中升高的同時，在慢性乙型肝炎患者中也出現(xiàn)明顯升高情況，提示sCD163在慢性乙型肝炎的發(fā)病中也占據(jù)重要地位。有學(xué)者通過分析肝炎患者的肝組織標(biāo)本，顯示CD163的mRNA水平顯著升高，其升高程度與肝硬化程度成正相關(guān)性，提示其在疾病預(yù)后中占據(jù)重要位置[16]?？傊?，CD163、sCD163在人體肝臟炎性反應(yīng)的免疫過程中具有重要地位，且本研究也明確了該說法，明確CD163、sCD163在慢加急性乙型肝炎肝衰竭中的重要地位[8-16]。本研究結(jié)果提示，觀察組的CD163、sCD163水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。觀察組的熒光強(qiáng)度高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;觀察組的CD163 mRNA表達(dá)高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;血漿sCD163水平和MELD評分成正相關(guān)關(guān)系（r=4.652，P<0.05），和HBV-DNA水平成正相關(guān)（r=5.521，P<0.05），與人體膽紅素水平無相關(guān)性（r=6.558，P>0.05）。

綜上所述，CD163和sCD163的臨床表達(dá)在慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者中具有十分重要的作用，其檢測方法簡單直接，與疾病進(jìn)展具有密切的相關(guān)性，值得在臨床中應(yīng)用推廣。

[參考文獻(xiàn)]

[1]梁敏鋒，周惠玲，鄭雪英，等.MELD評分聯(lián)合Th1/Th2細(xì)胞因子在預(yù)測乙型肝炎肝衰竭短期預(yù)后中的價值[J].包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2018，34（3）：3-4，16.

[2]葉一農(nóng)，趙琦毅，周惠玲，等.慢加急性肝衰竭患者外周血CD8+T細(xì)胞中CXCR3的表達(dá)及意義[J].廣東醫(yī)學(xué)，2015， 36（15）：2356-2361.

[3]翁偉鎮(zhèn)，熊靜，曹會娟，等.不同時相慢加急性乙肝肝衰竭患者外周血NK細(xì)胞及其受體分析[J].中山大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），2018，39（1）：87-92.

[4]羅杰，杜展，湯仕龍，等.HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭患者血清miRNA表達(dá)譜及臨床預(yù)測價值[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2017，14（2）：190-192，197.

[5]李曉玲，施文娟.乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者血清白細(xì)胞介素-15、-17檢測及意義[J].中國老年學(xué)雜志，2016，36（14）：3587-3588.

[6]陳利文，閆蕾，曹竹君，等.RIPK3介導(dǎo)肝細(xì)胞程序性壞死在乙型肝炎相關(guān)慢加急性肝衰竭中的作用[J].肝臟，2018， 23（3）：214-216.

[7]施文娟，賈瑾堂，李彩東，等.Th17/Treg細(xì)胞因子在乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者中的表達(dá)及意義[J].肝臟，2016， 21（2）：92-94.

[8]楊立學(xué)，陳科濟(jì)，尉公田，等.CD163在肝癌術(shù)后肝衰竭患者中的表達(dá)及其與患者預(yù)后的關(guān)系[J].中國臨床研究，2016， 29（8）：1050-1053.

[9]陸炯敏，于冰，胡榜利，等.慢性乙型肝炎與乙型肝炎肝硬化患者外周血誘導(dǎo)型NO合酶、CD206、CD163及精氨酸酶-1的表達(dá)及意義[J].中華傳染病雜志，2018，36（3）：173.

[10]馮麗麗，燕照玲，陳海燕，等.CD163分子對PRRSV感染豬子宮內(nèi)膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，46（12）：130-133.

[11]李珊珊，馬春華，李璐，等.HBV相關(guān)慢加急性肝功能衰竭患者外周血單核細(xì)胞CD163和CD69的表達(dá)及其與病情、預(yù)后的關(guān)系[J].肝臟，2014，19（1）：8-11.

[12]丁婷婷，泮紅飛，張紅，等.M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD163與腫瘤的研究進(jìn)展[J].中國免疫學(xué)雜志，2018，34（7）：1114-1117，封3.

[13]王少華，趙盼盼，劉通，等.利用CRISPR/Cas9n技術(shù)生產(chǎn)抗藍(lán)耳病的基因編輯克隆豬[J].浙江大學(xué)學(xué)報（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），2018，44（2）：157-161.

[14]鐘世茂，覃羽華，黎作茶，等.血清可溶性CD163在心房顫動患者中的水平及臨床意義[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2016，36（10）：1406-1409.

[15]魏書堂，黃祎諾，武利萍，等.肝癌患者癌組織及血清中CD163的表達(dá)水平及意義[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報，2017， 23（17）：2669-2670.

[16]陳容欣，熊熙，崔云，等.CD163對兒童感染相關(guān)性噬血細(xì)胞綜合征的診斷及預(yù)后判斷價值[J].中華實用兒科臨床雜志，2017，32（3）：204-207.

（收稿日期：2019-04-30? ?本文編輯：李二云）