賈修歧 楊新宇 王喜偉 徐春雨 金志民

摘要：為給黑線姬鼠（Apodemus agrarius）和大林姬鼠（Apodemus peninsulae）實驗動物化及農(nóng)林害鼠防治等研究提供基礎(chǔ)生化數(shù)據(jù)，采用PAGE方法比較分析2種鼠消化系統(tǒng)中過氧化物酶的分布和活性并建立電泳譜圖。結(jié)果表明，黑線姬鼠和大林姬鼠消化系統(tǒng)中過氧化物酶均有表達(dá)，同種個體間以及2種鼠間消化系統(tǒng)中過氧化物酶的活性和分布存在明顯差別。

關(guān)鍵詞：黑線姬鼠（Apodemus agrarius）;大林姬鼠（Apodemus peninsulae）;消化系統(tǒng);過氧化物酶;電泳

中圖分類號：Q956? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）23-0148-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.23.036? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Comparative analysis of peroxidase in digestive system of

Apodemus agrarius and A. peninsulae

JIA Xiu-qi，YANG Xin-yu，WANG Xi-wei，XU Chun-yu，JIN Zhi-min

（College of Life Science and Technology，Mudanjiang Normal University，Mudanjiang 157011，Heilongjiang，China）

Abstract： In order to provide basic biochemical data for the experimental animalization of Apodemus agrarius and A. peninsulae and the prevention and control of agro-forest and rats， the distribution and activity of peroxidase in the digestive system of two kinds of mice were compared and analyzed by PAGE method. The results showed that the peroxidases in the digestive system of A. agrarius and A. peninsulae were all expressed， and there were significant differences in the activity and distribution of peroxidase between the same individuals and the digestive system of the two species.

Key words： Apodemus agrarius; A. peninsulae; digestive system; peroxidase; electrophoresis

黑線姬鼠（Apodemus agrarius）和大林姬鼠（Apodemus peninsulae）同屬姬鼠屬，均為中國東北地區(qū)農(nóng)林害鼠優(yōu)勢種[1]。

過氧化物酶（Peroxidase，POD）是生物體內(nèi)重要的自由基清除劑，主要功能是清除氨基酸分解代謝及糖醛酸合成代謝等過程中形成的過氧化物，在肝細(xì)胞中數(shù)量較多。過氧化物酶的標(biāo)志酶是過氧化氫酶，主要是將過氧化氫水解，對細(xì)胞起保護(hù)作用[2]。隨著生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的發(fā)展， 對實驗動物品種的需求也越來越多， 將野生動物培育并開發(fā)為實驗動物是實驗動物工作發(fā)展的重要方向[3]。黑線姬鼠和大林姬鼠作為實驗動物具備易野外易捕捉，飼養(yǎng)成本低等優(yōu)良特點，了解2種鼠消化系統(tǒng)中POD的分布及活性對其作為實驗動物具有重要意義。

關(guān)于黑線姬鼠和大林姬鼠的相關(guān)研究報道較多[4-10]，但鮮見關(guān)于其消化系統(tǒng)中POD研究的相關(guān)報道。通過PAGE方法對黑線姬鼠和大林姬鼠消化系統(tǒng)（胃、小腸、大腸、肝臟）中POD進(jìn)行比較分析，為2種鼠實驗動物化和農(nóng)林害鼠的防治提供基礎(chǔ)生化數(shù)據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 動物來源

黑線姬鼠和大林姬鼠為2019年4—6月采用籠捕法捕自黑龍江省牡丹江市牡丹峰國家自然保護(hù)區(qū)的健康成年個體，各3只。

1.2? 儀器試劑

主要儀器有DYY-III2穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀（北京市六一儀器廠）、高速冷凍離心機(jī)（Beckman Coultar）、微量移液槍（Eppendorf）、凝膠成像系統(tǒng)（美國Alpha公司AlphaImager Mini）。主要試劑有Tris、HCl、TEMED、過硫酸銨、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、甘氨酸、溴酚藍(lán)、蔗糖、瓊脂糖、丙三醇、冰乙酸、乙酸鈉、過氧化氫、核黃素、聯(lián)苯胺等，均為天津市大茂化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)的分析純或生化試劑。

1.3? 樣品制備

將黑線姬鼠和大林姬鼠的消化系統(tǒng)（胃、小腸、大腸、肝臟）在無菌條件下取出，分別置于研缽中，加入pH 7.6的磷酸緩沖液冰浴研磨，分裝離心管離心（5 000 r/min，4 ℃，30 min），取上清液即為POD提取液。

1.4? 電泳分析

采用PAGE不連續(xù)體系電泳方法[11]進(jìn)行黑線姬鼠和大林姬鼠的胃、小腸、大腸、肝臟中POD分離，POD染色和比較分析方法參照文獻(xiàn)[12]。

2? 結(jié)果與分析

黑線姬鼠和大林姬鼠的胃、小腸、大腸、肝臟中POD電泳照片和具體情況見圖1、表1。分離出POD1至POD17共計17條電泳譜帶，遷移率為0.14～0.97，其中，黑線姬鼠的胃、小腸、大腸、肝臟分別分離出8、7、6、7條電泳譜帶，大林姬鼠的胃、小腸、大腸、肝臟分別分離出10、6、6、9條電泳譜帶，POD3、POD17為黑線姬鼠特有譜帶，POD1、POD2、POD8、POD14為大林姬鼠特有譜帶，其余為2種鼠共有譜帶。

POD2為大林姬鼠胃和小腸所共有，其活性一致;POD4、POD6是2種鼠消化系統(tǒng)中共有譜帶，其中POD4表現(xiàn)為2種鼠各消化系統(tǒng)POD活性一致，POD6則表現(xiàn)為黑線姬鼠強(qiáng)于大林姬鼠;POD5為黑線姬鼠肝臟和大林姬鼠胃共有譜帶，其活性比較為黑線姬鼠（肝臟）強(qiáng)于大林姬鼠（胃）;POD7為黑線姬鼠的大腸和小腸以及大林姬鼠的胃、小腸、大腸、肝臟共有譜帶，其中，黑線姬鼠的大腸和小腸POD活性一致，大林姬鼠的消化系統(tǒng)POD活性比較為肝臟強(qiáng)于胃強(qiáng)于小腸等于大腸;POD9為黑線姬鼠和大林姬鼠小腸、大腸、肝臟共有譜帶，其活性比較為肝臟強(qiáng)于小腸強(qiáng)于大腸，其中，肝臟表現(xiàn)為大林姬鼠強(qiáng)于黑線姬鼠，小腸表現(xiàn)為黑線姬鼠強(qiáng)于大林姬鼠;POD10是黑線姬鼠胃、小腸、大腸和大林姬鼠的胃和小腸所共有，其中黑線姬鼠的胃、大腸POD活性一致，大林姬鼠小腸POD活性強(qiáng)于胃，黑線姬鼠和大林姬鼠胃部POD活性一致，黑線姬鼠小腸POD活性則弱于大林姬鼠;POD11為黑線姬鼠和大林姬鼠的胃、大腸、肝臟共有譜帶，其中黑線姬鼠POD活性為肝臟強(qiáng)于大腸強(qiáng)于胃，大林姬鼠POD活性為肝臟強(qiáng)于胃強(qiáng)于大腸，2種鼠肝臟POD活性一致，黑線姬鼠大腸POD活性強(qiáng)于大林姬鼠，胃部POD活性則弱于大林姬鼠;POD12為2種鼠胃特有譜帶且活性一致;POD13為2種鼠肝臟和大林姬鼠的胃所共有，其中2種鼠肝臟活性一致，大林姬鼠胃POD活性強(qiáng)于肝臟;POD15為2種鼠大腸、肝臟共有譜帶，其中2種鼠肝臟POD活性均強(qiáng)于大腸，2種鼠大腸POD活性一致，黑線姬鼠肝臟部位POD活性則弱于大林姬鼠;POD16為黑線姬鼠胃和小腸共有譜帶且活性一致。

3? 小結(jié)與討論

通過PAGE方法對2種鼠消化系統(tǒng)中胃、小腸、大腸、肝臟中POD進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，在2種鼠消化系統(tǒng)中POD均有表達(dá)，且2種鼠POD譜帶分布以及主帶區(qū)大致相同，但也存在明顯差別，2種鼠消化系統(tǒng)中POD活性最強(qiáng)的是肝臟，胃次之;黑線姬鼠小腸POD的活性強(qiáng)于大腸，大林姬鼠小腸、大腸POD活性一致，大林姬鼠消化系統(tǒng)中POD整體上強(qiáng)于黑線姬鼠，說明在野外生存環(huán)境中大林姬鼠的抗逆性要優(yōu)于黑線姬鼠。黑線姬鼠和大林姬鼠作為實驗動物具有諸多優(yōu)點，且2種鼠都為東北農(nóng)林主要害鼠，研究2種鼠消化系統(tǒng)中POD，能為其作為實驗動物和解決農(nóng)林害鼠問題提供基礎(chǔ)生化數(shù)據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 夏武平.大林姬鼠種羣數(shù)量與巢區(qū)的研究[J].動物學(xué)報，1961（Z1）：171-180.

[2] 陳曉虹，王林嵩，瞿文元.河南省小鯢科兩種動物酯酶、過氧化物酶同工酶的比較研究[J].動物學(xué)雜志，2000，35（5）：19-23.

[3] 賀爭鳴.我國資源動物的實驗動物化潛力與展望[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2010，20（3）：1-7.

[4] 黃廣傳，司俊杰，蒙? 新，等.不同生境和季節(jié)社鼠與大林姬鼠的微生境選擇比較[J].獸類學(xué)報，2019，39（3）：242-251.

[5] L？魣SZL？魷 EGYED，VIKTOR Z？魻LDI，LEVENTE SZEREDI. Subclinical Tick-Borne encephalitis virus in experimentally infected Apodemus agrarius[J].Intervirology，2016，58（6）：369-372.

[6] BRIAN J. PERRI，THOMAS E. JOHNSON. Determination of whole-body and lens dose conversion factors for Japanese field mice，Apodemus Speciosus[J].Health physics，2019，116（5）：577-581.

[7] KIM JUNHYUNG，KIM WOOHYUN，AN JAE-UK，et al. Complete genome sequencing and comparative genomic analysis of helicobacter Apodemus isolated from the wild Korean striped field mouse （Apodemus agrarius） for potential pathogenicity[J].Frontiers in pharmacology，2018，9：838.

[8] 李殿偉，姚旭，金志民，等.張廣才嶺東部山地嚙齒動物群落多樣性調(diào)查[J].中國森林病蟲，2019，38（05）：28-33+37.

[9] 廖? 勇，黃仁發(fā)，胡曉軍，等.江西省贛州市恙蟲病宿主動物及傳播媒介調(diào)查[J].中國媒介生物學(xué)及控制雜志，2019，30（03）：252-254.

[10] JI MIN LEE，BYOUNG-HEE LEE，SEO-NA CHANG，et al. Establishment，characterization，and toxicological application of a spontaneous immortalized cell line from the striped field mouse，Apodemus agrarius[J].In vitro cellular & developmental biology，2018，54（10）：779-787.

[11] 陳毓荃.生物化學(xué)實驗方法和技術(shù)[M].北京：科學(xué)出版社，2002.

[12] 易? 誠，楊春文，金建麗，等.棕黑錦蛇雌雄個體不同器官/組織同工酶比較分析[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2016（11）：218-221.