胡偉光

（山東省禹城市辛店鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院 山東禹城 251206）

1 前言

氨曲南是一種特殊類型的抗生素藥物，其對(duì)需氧革蘭陰性菌感染有較好的應(yīng)用效果，但對(duì)革蘭陽(yáng)性菌感染治療效果較差，即氨曲南的抗菌譜較窄[1]。通過(guò)對(duì)藥物以及生物樣品中氨曲南水平進(jìn)行檢測(cè)，能夠進(jìn)一步規(guī)范氨曲南的臨床使用，保證患者的用藥安全[2]。目前，可用于氨曲南檢測(cè)的方法較多，如原子吸收法、液質(zhì)聯(lián)用法、紫外可見(jiàn)分光光度法，不同方法在具體應(yīng)用方面均有一定的局限性[3]。本文通過(guò)羅丹明B和氨曲南建立新的熒光分析方法，取得了較好的實(shí)驗(yàn)效果。

2 儀器設(shè)備與相關(guān)試劑

上海雷磁精密酸度計(jì)pHS-3C；日立F-7000熒光分光光度計(jì)；氨曲南（中國(guó)食品藥品檢定研究院），質(zhì)量分?jǐn)?shù)為96.9%，簡(jiǎn)寫(xiě)為ATN，批號(hào)為：130507-201303；樣品：市面上出售的氨曲南藥物（無(wú)片劑型）；尿液。

標(biāo)準(zhǔn)溶液為435.4mg/L的貯備液，選取氨曲南對(duì)照品并完成準(zhǔn)確稱量，稱量后在樣品中加入少許甲醇，對(duì)照品完成溶解后，將其倒入100 mL容量瓶中，完成定容，并在4℃條件下保存?zhèn)溆?，最終操作液質(zhì)量濃度：43.54mg/L。羅丹明B（成都貝斯特試劑有限公司）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99%，具體濃度：1.00×10-4mol/L。三羥甲基氨基甲烷-鹽酸溶液：其中，三羥甲基氨基甲烷（Tris）濃度為 0.20mol/L，鹽酸濃度為 0.10mol/L，鹽酸與Tris混合后通過(guò)酸度計(jì)使其形成pH3.0～9.5的一系列溶液。選擇二次蒸餾水作為實(shí)驗(yàn)用水。

3 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

3.1 樣品預(yù)處理

分別購(gòu)買市面上銷售且不同規(guī)格的1支注射用氨曲南，記作1#和2#。不同燒杯中放置樣品，加少量甲醇，溶解氨曲南，轉(zhuǎn)入1 000 mL容量瓶中，用水稀釋達(dá)到刻度位置，選擇10 mL 1#稀釋液與5mL 2#稀釋液，均通過(guò)水定容達(dá)到100 mL，分別記作1#待測(cè)液、2#待測(cè)液。

3.2 實(shí)驗(yàn)方法

于10 mL具塞比色管中移入2 mL羅丹明B溶液，然后加入Trip-鹽酸溶液，pH=6.55，再加入適量標(biāo)準(zhǔn)液，通過(guò)蒸餾水完成定容，充分混合，在（20±2）℃條件下放置15 min，通過(guò)熒光光度計(jì)在激發(fā)波長(zhǎng)/發(fā)射波長(zhǎng)=556 nm/583 nm下對(duì)體系、空白試劑以及相關(guān)樣品的熒光強(qiáng)度F和F0進(jìn)行檢驗(yàn)。所有操作均由經(jīng)驗(yàn)豐富人員完成，并記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

4.1 氨曲南-羅丹明B光譜激發(fā)與發(fā)射

通過(guò)對(duì)氨曲南-羅丹明B激發(fā)光譜、發(fā)射光譜研究與分析，對(duì)最大激發(fā)波長(zhǎng)掃描發(fā)射光譜與最大發(fā)射波長(zhǎng)掃描激發(fā)光譜對(duì)應(yīng)反應(yīng)結(jié)果分析[4]，激發(fā)峰與發(fā)射峰在λex=556nm、λem=583nm的情況下較為穩(wěn)定且有最大值（圖1和圖2），所以將上述參數(shù)作為測(cè)定波長(zhǎng)。通過(guò)對(duì)激發(fā)與發(fā)射光譜分析，氨曲南固有熒光很微弱，羅丹明B在水溶液中能夠發(fā)射出玫瑰紅熒光，通過(guò)在羅丹明B溶液中加入pH=6.55的Tris-鹽酸溶液以及氨曲南溶液，整個(gè)體系出現(xiàn)熒光猝滅現(xiàn)象，即一定濃度的氨曲南同整個(gè)體系熒光猝滅存在較好的相關(guān)性，說(shuō)明整個(gè)新體系能夠用于氨曲南的測(cè)定[4]。

圖1 氨曲南-羅丹明B光譜激發(fā)與發(fā)射

圖2 氨曲南-羅丹明B發(fā)射光譜示意圖

4.2 不同試劑加入順序分析

整個(gè)實(shí)驗(yàn)體系中包括多種試劑，如氨曲南、羅丹明B、Tris-鹽酸，通過(guò)對(duì)不同試劑加入先后順序分析與評(píng)價(jià)，研究證實(shí)最佳順序?yàn)椋海?）羅丹明 B；（2）Tris-鹽酸；（3）氨曲南。根據(jù)上述順序加入試劑，可保證整個(gè)檢測(cè)體系具有較高的靈敏度以及較大的熒光猝滅。

4.3 反應(yīng)時(shí)間分析以及形成締合物的穩(wěn)定性

反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)短也會(huì)影響整個(gè)檢測(cè)體系靈敏度以及熒光反應(yīng)猝滅，按照實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，溶液混合后最初15 min內(nèi)，熒光反應(yīng)并不完全；反應(yīng)超過(guò)15 min后，熒光度變化基本穩(wěn)定，證實(shí)已經(jīng)完成了反應(yīng)，后續(xù)1 h內(nèi)整個(gè)體系締合物基本穩(wěn)定，綜合時(shí)間分析，可在不同溶液混合15 min后實(shí)施測(cè)定。

4.4 共存物質(zhì)影響分析

氨曲南溶液濃度為4.35mg/L時(shí)，分析糖類、陽(yáng)離子、陰離子、氨基酸等對(duì)整個(gè)體系的影響。研究分析顯示，如果相對(duì)誤差不超過(guò)±5.00%，以下分子或離子均不會(huì)影響體系的檢驗(yàn)結(jié)果：（1）200倍的蔗糖、葡萄糖、氯離子、麥芽糖、銨根離子、鈉離子、鉀離子、L-亮氨酸；（2）100倍的碘離子、鎂離子、硫酸根例子、鉛離子；（3）50倍的鐵離子、鈣離子、汞離子、淀粉、尿素；（4）20 倍的銀離子、錫離子；（5）10 倍的三價(jià)鐵離子、鋁離子。證實(shí)整個(gè)體系應(yīng)用范圍較廣。

4.5 檢測(cè)結(jié)果分析

本文將上述構(gòu)建的新體系應(yīng)用到藥物以及人體尿液氨曲南含量檢測(cè)中，研究證實(shí)其加標(biāo)回收率可達(dá)97.7%～103%，1#待測(cè)液、2#待測(cè)液分析后的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.0%～2.8%。

5 結(jié)語(yǔ)

本文通過(guò)構(gòu)建藥物及生物樣品中氨曲南新熒光分析方法，反復(fù)實(shí)驗(yàn)確定出最佳參數(shù)并得出結(jié)果的回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，證實(shí)新熒光分析方法能夠用于藥品以及生物制品中的氨曲南測(cè)定[5]，且檢測(cè)結(jié)果可靠，靈敏度高。