周京華，萬(wàn) 淵，簡(jiǎn)火仔

（江西省新余市果業(yè)局 338000）

新余蜜桔是新余市老一輩科技工作者1977年從原新余縣姚圩公社彭家大隊(duì)本地早群體中選育的優(yōu)變單株，該品種早結(jié)、豐產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、抗病、耐瘠、耐寒，果實(shí)整齊，表皮光滑細(xì)膩，商品性狀好，平均單果重70g左右，味甜肉嫩，汁多化渣，有微香，是鮮食和制罐的極好品種。經(jīng)過(guò)40余年的發(fā)展壯大，產(chǎn)業(yè)已初具規(guī)模，2018年栽培面積1.07萬(wàn)hm2，總產(chǎn)17萬(wàn)t，產(chǎn)值超4億元，品牌價(jià)值7.25億元，產(chǎn)品穩(wěn)定銷(xiāo)售到國(guó)內(nèi)20多個(gè)大中城市，并出口到一帶一路多個(gè)國(guó)家，新余蜜桔已經(jīng)成為新余市鄉(xiāng)村振興、農(nóng)民致富的重點(diǎn)支柱產(chǎn)業(yè)。但美中不足的是，新余蜜桔單果平均含種子6.4粒，其“有核”的缺憾已成為制約著產(chǎn)業(yè)進(jìn)一步發(fā)展的瓶頸。針對(duì)這一問(wèn)題，我們開(kāi)展了新余蜜桔少核、無(wú)核新品系的選育工作。

1 選育方法

1.1 輻射誘變

采用合理輻射劑量的60C0-r對(duì)新余蜜桔接穗進(jìn)行輻射誘變，將輻射后的接穗高接到幼年溫州蜜柑上，合理栽培管理，掛果后進(jìn)行無(wú)核化篩選。

1.2 田間篩選

輻射接穗高接成活并開(kāi)始結(jié)果后，果實(shí)成熟前對(duì)結(jié)果枝條全部標(biāo)記掛牌，采摘果實(shí)重點(diǎn)檢測(cè)單果種子粒數(shù)，對(duì)平均單果種子數(shù)2粒以下的枝條進(jìn)行重點(diǎn)持續(xù)篩查和品質(zhì)分析。

1.3 檢測(cè)方法

優(yōu)株基因檢測(cè)分析采取SRAP分子標(biāo)記分析或SSR基因檢測(cè)分析；橫縱徑、果皮厚度采用精確度為0.02mm的游標(biāo)卡尺測(cè)量，可溶性固形物采用PAL-1的數(shù)顯糖度計(jì)測(cè)量。

1.4 選育技術(shù)路線(xiàn)如圖1。

圖1 選育技術(shù)路線(xiàn)

2 選育過(guò)程

2.1 多途徑探索

新余蜜桔無(wú)核化選育工作早在1986年就已經(jīng)開(kāi)始，當(dāng)年在子代樹(shù)上采取接穗1kg，用 4000倫琴60C0-r射線(xiàn)輻射接穗，培育了苗木100多株，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)變異；1997年開(kāi)始進(jìn)行自然群體變異選種，由于群體過(guò)少，工作沒(méi)有進(jìn)展；1998年和2002年先后在浙江黃巖和中柑所引進(jìn)少核本地早和脫毒少核本地早接穗，高接溫柑和嫁接枳砧上。1998年引種的少核本地早均表現(xiàn)樹(shù)勢(shì)衰弱，葉片黃化，說(shuō)明帶有碎葉病病毒。2002年引進(jìn)的脫毒少核本地早接穗，高接樹(shù)上長(zhǎng)勢(shì)很好，但嫁接在枳砧上的28株苗木，有1株出現(xiàn)黃化現(xiàn)象，可能帶有病毒，27株無(wú)黃花苗已隔離建園；2002年在東邊園藝場(chǎng)通過(guò)920化控產(chǎn)生了少核，2003年繼續(xù)進(jìn)行化控試驗(yàn)，沒(méi)有達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。

2.2 適量60C0-r輻射劑量試驗(yàn)

2003年3月在母本園中剪取新余蜜桔接穗75kg，精選到 25kg，分別用 4000、6000、8000 倫琴60C0-r劑量輻射，照射后的接穗在6年生溫柑樹(shù)上高接了2.2萬(wàn)個(gè)芽，嫁接成活率分別為∶71.85%、39.29%和15.84%。2005年春季采用6000倫琴60C0-r輻射新余蜜桔接穗100kg，分別在2個(gè)新余蜜桔幼年樹(shù)果園高接，成活率分別為41.7%和53.6%。嫁接后進(jìn)行正常管理，每年10月中下旬對(duì)結(jié)果枝條全部標(biāo)記掛牌，采下果子調(diào)查單果種子數(shù)和固形物含量，對(duì)平均單果種子數(shù)2粒以下表現(xiàn)較好的優(yōu)株進(jìn)行重點(diǎn)分析和管理，下年進(jìn)一步進(jìn)行穩(wěn)定性觀(guān)察分析和果實(shí)品質(zhì)分析等。

3 田間調(diào)查

輻射后2005年第1次采果，全園海選763個(gè)有果枝條，每個(gè)枝上果實(shí)全部采摘備檢，發(fā)現(xiàn)9個(gè)符合選育標(biāo)準(zhǔn)（見(jiàn)表1）。2006年第2輪海選并對(duì)上年9個(gè)表現(xiàn)優(yōu)的枝條重點(diǎn)分析，發(fā)現(xiàn)只有編號(hào)為A72符合選育標(biāo)準(zhǔn)，另選到A14符合要求（見(jiàn)表2）。2007年第3次海選，A47、A88、AA1（補(bǔ)）符合標(biāo)準(zhǔn)（見(jiàn)表3）。2008年第 4次海選未發(fā)現(xiàn)符合要求目標(biāo)枝條。經(jīng)過(guò)前4輪篩選，發(fā)現(xiàn)經(jīng)原子60C0-r輻射后產(chǎn)生的變異不穩(wěn)定。

表1 2005年新余蜜桔輻照無(wú)核優(yōu)株初選結(jié)果

表2 2006年新余蜜桔輻照無(wú)核優(yōu)株初、復(fù)選結(jié)果

表3 2007年新余蜜桔輻照無(wú)核優(yōu)株初、復(fù)選結(jié)果

表4 2008年新余蜜桔輻照無(wú)核優(yōu)株初、復(fù)選結(jié)果

4 穩(wěn)定性觀(guān)察

2009年在3個(gè)經(jīng)輻射高接后的果園第5次全園海選，發(fā)現(xiàn)2009-3、2009-4兩個(gè)枝條上的果連續(xù)多果無(wú)籽，現(xiàn)場(chǎng)采樣分析，測(cè)得平均單果種子分別為1.6和0.1粒（見(jiàn)表5）。為確定兩單株的遺傳性狀是否在分子水平上發(fā)生了遺傳變異，2010年我們委托華中農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝植物生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室對(duì)2個(gè)單株進(jìn)行了SRAP分子標(biāo)記技術(shù)分析，有8對(duì)引物擴(kuò)增差異片段，結(jié)果表明2009-3、2009-4與對(duì)照存在差異條帶，遺傳物質(zhì)構(gòu)成發(fā)生了變異。

表5 2009年新余蜜桔輻照無(wú)核優(yōu)株初、復(fù)選結(jié)果

但2010～2012年期間其穩(wěn)定性發(fā)生反復(fù)∶2010年再采果發(fā)現(xiàn)2009-3、2009-4超過(guò)選育標(biāo)準(zhǔn)；2011年2009-3平均種子數(shù)為0.57粒/果，2009-4為3.0粒/果；2012年2009-3、2009-4兩株系種子粒數(shù)又超過(guò)選育標(biāo)準(zhǔn)；2013年2009-3、2009-4兩株系種子數(shù)又達(dá)到了標(biāo)準(zhǔn)?？梢?jiàn)2009-3、2009-4，表現(xiàn)為種子數(shù)較少，綜合品質(zhì)優(yōu)，但還不夠穩(wěn)定。

表6 2018年新余蜜桔無(wú)核優(yōu)選株果實(shí)品質(zhì)分析表

表7 2016年新余蜜桔無(wú)核優(yōu)選株果實(shí)品質(zhì)分析表

表8 2017年新余蜜桔無(wú)核優(yōu)選株果實(shí)品質(zhì)分析表

2013年秋將2009-3、2009-4枝組編號(hào)為2013-1、2013-2，采集到13個(gè)有效芽高接在5株新余蜜桔成年樹(shù)上（其中2013-1號(hào)1株，2013-2號(hào)4株），進(jìn)行穩(wěn)定性觀(guān)察與篩選。嫁接芽成活8個(gè)，經(jīng)過(guò)精心管理，形成了8個(gè)枝組，編號(hào)依次為2016-1、2016-2、2016-3……2016-8。2016年開(kāi)始采果觀(guān)察分析，經(jīng)2016、2017、2018連續(xù)3年考察，8個(gè)枝組連續(xù)3年表現(xiàn)穩(wěn)定，所有枝組的果實(shí)種子平均都在1粒以下，全部符合選育要求，達(dá)到了無(wú)核株系的選育要求（詳見(jiàn)表6、表7、表8）。

5 結(jié)論

通過(guò)輻射誘變、田間群選等方式，在多年的觀(guān)察、篩選、嫁接、再觀(guān)察、再篩選后，于2009年發(fā)現(xiàn)了2009-3和2009-4兩個(gè)枝組（經(jīng)嫁接的輻射單芽形成）符合選育要求，平均單果種子數(shù)分別為1.6和0.1粒。但在2010～2012年期間，兩枝組的單果平均種子數(shù)在0～5粒間變化，其穩(wěn)定性表現(xiàn)出不斷反復(fù)的現(xiàn)象。這表明了經(jīng)輻射誘變產(chǎn)生的芽變具有變異性狀的不穩(wěn)定性。

2013年秋將2009-3、2009-4枝組編號(hào)為2013-1、2013-2，高接在5株新余蜜桔成年樹(shù)上進(jìn)行穩(wěn)定性觀(guān)察與篩選。2016年開(kāi)始采果觀(guān)察分析，經(jīng)2016～2018連續(xù)3年考察，2013-1和2013-2無(wú)核或少核性狀逐漸表現(xiàn)穩(wěn)定。綜合2016～2018年連續(xù)3年穩(wěn)定性再觀(guān)察，其嫁接后8個(gè)枝組種子數(shù)和品質(zhì)的檢測(cè)表明，這2個(gè)無(wú)核優(yōu)質(zhì)株系平均種子數(shù)均在0.5以下，橫縱徑比新余蜜桔略小，果形指數(shù)略高，果皮厚度無(wú)明顯差異，可溶性固形物略高于新余蜜桔?？梢?jiàn)，2013-1與2013-2兩個(gè)無(wú)核優(yōu)株系初步符合選育預(yù)期，暫命名為輻佑1號(hào)、輻佑2號(hào)，有待下一步進(jìn)行田間測(cè)試和推廣試驗(yàn)。