西安地區(qū)0～12歲健康兒童血清S100蛋白參考區(qū)間的建立*

吳 爽，張書婉，張濤元，陳 露，曹三成，李 俏

(1.西安市兒童醫(yī)院檢驗科，西安 710003；2.日照心臟病醫(yī)院，山東日照 276800)

S100蛋白是一種酸性鈣結合蛋白，體內(nèi)96%的S100蛋白存在于神經(jīng)系統(tǒng)的雪旺氏細胞、星形膠質細胞及少突膠質細胞，具有高度的中樞特異性，因此血清S100蛋白水平升高，能有效預示顱腦損傷、出血及缺血性腦卒中、黑色素瘤等[1]。血清S100蛋白參考區(qū)間對上述疾病的診斷療效判斷至關重要。目前國內(nèi)外暫無統(tǒng)一的血清S100蛋白參考區(qū)間標準，且大多數(shù)參考區(qū)間是以成人為研究對象[2]。但由于兒童血腦屏障并未發(fā)育完整，其血清S100蛋白水平較成人有明顯差異[3]，同時，不同的檢測系統(tǒng)對參考區(qū)間有著較大影響[4]。因此，針對本實驗室的檢測系統(tǒng)，建立西安地區(qū)0～12歲健康兒童的參考區(qū)間，對提高診斷特異度和靈敏度有著重要的作用。本研究根據(jù)《中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準WST-402-2012》文件中所規(guī)定的方法，分析、建立并驗證本地區(qū)0～12周歲健康兒童的血清S100蛋白參考區(qū)間[5]，現(xiàn)報道如下：

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集2018年7月1日起，在西安市兒童醫(yī)院兒?？七M行常規(guī)體檢的0～12歲健康兒童(男性78例，女性47例)血清，共125例。依據(jù)《中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準WST-402-2012》關于健康者的要求，所有參與者無黃疸、自身免疫性疾病、肝腎功能不全、惡性黑色素瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變、體檢結果異常、用藥史等。

1.2 試劑與儀器 使用西安金磁納米生物技術有限公司的磁定量免疫分析儀及其配套的S100蛋白檢測試劑盒、S100蛋白質控卡，基于金磁微粒免疫層析法，嚴格按照標準操作程序，測定血清S100蛋白水平。

1.3 方法

1.3.1 檢測系統(tǒng)性能驗證：根據(jù)CLSI-EP9-A2文件要求，對分析系統(tǒng)的批內(nèi)精密度、中間精密度、線性范圍、分析靈敏度等進行驗證，用于評價分析系統(tǒng)是否滿足臨床檢測要求。

1.3.2 建立參考區(qū)間：①標本采集與檢測：按照說明書要求，采集研究對象血清，用上述儀器及試劑進行檢測；②離群值的剔除：采取Dixon法，判斷離群值。D為觀測極值與下一觀測值之間的差值，R為包括極值在內(nèi)的所有觀測值的極差，若D大于或等于極差值的1/3，則可判斷為離群值；③分組：將納入對象按照性別及年齡進行初步分組，采用統(tǒng)計學方法比較組間差異，若差異具有統(tǒng)計學意義，則在保證每組標本數(shù)為120例的條件下，重新計算參考區(qū)間；若差異無統(tǒng)計學意義，則無需重新計算參考區(qū)間；④參考區(qū)間的驗證：選取并檢測2018年10月在西安市兒童醫(yī)院兒?？企w檢的健康兒童血清標本(符合相應的排除標準)共20例對參考區(qū)間進行驗證，20例測試對象的檢測結果中，不超過2例數(shù)值位于參考區(qū)間之外，則參考區(qū)間適用。

2 結果

2.1 分析系統(tǒng)的性能驗證 根據(jù)CLSI-EP9-A2文件要求，對分析系統(tǒng)的批內(nèi)精密度、中間精密度、線性范圍、檢出限等進行驗證，結果顯示，其各項指標均符合廠家聲明中給出的性能參數(shù)要求。

2.2 離群值的判斷與剔除 125例數(shù)據(jù)中，最大值為590.92 pg/ml，則D為109.3，R/3為146.47，因此剔除509.92 pg/ml這組數(shù)據(jù)。以此類推，共剔除464.55，465.32，480.79和590.92 pg/ml共四組數(shù)據(jù)，剩余121組有效數(shù)據(jù)被納入。

2.3 血清中S100蛋白水平的數(shù)據(jù)分布分析 對所有數(shù)據(jù)進行分析，其偏度g1為0.700，Sg1為0.220，峰度g2為0.301，Sg2為0.437，U檢驗顯示U1>2.58，U2<1.96(P<0.01，P>0.05)，說明血清S100蛋白濃度偏離正態(tài)分布。

2.4 S100蛋白水平在不同性別分組間的數(shù)據(jù)分析 121例健康兒童的血清S100蛋白水平見表1。通過Wilcoxon秩和檢驗顯示，不同性別之間，血清S100蛋白水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表1 不同性別健康兒童血清S100蛋白水平統(tǒng)計學描述(pg/ml)

項目女性(n=45)男性(n=76)全人群(n=121)均數(shù)標準差最小值第25百分位數(shù)中位數(shù)第75百分位數(shù)最大值172.986 043.022 58104.24139.700 0167.070 0203.625 0270.46170.810 546.171 71100.00133.645 0164.505 0197.720 0326.59171.619 644.857 39100.00135.490 0164.700 0200.995 0326.59

2.5 S100蛋白水平在不同年齡分組間的數(shù)據(jù)分析 見表2。將121例健康兒童數(shù)據(jù)按年齡分為三組，Keuskal-WallisH檢驗顯示，不同年齡組間數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表2 不同年齡段健康兒童血清S100蛋白水平統(tǒng)計學描述(pg/ml)

項目≤1歲(n=32)1歲～3歲(n=31)≥3歲(n=58)均數(shù)標準差最小值第25百分位數(shù)中位數(shù)第75百分位數(shù)最大值170.991 237.045 24111.77145.745 0161.395 0194.987 5326.59183.265 540.468 43111.21154.610 0182.110 0205.400 0270.46165.741 750.186 96100.00120.592 5154.535 0203.522 5285.21

2.6 參考區(qū)間的確立 以非參數(shù)95%百分位數(shù)法計算血清S100蛋白的參考區(qū)間，0～12歲兒童磁定量免疫層析法檢測血清S100蛋白參考區(qū)間為S100≤270.375 5 pg/ml。

2.7 參考區(qū)間的驗證 收集2018年10月在西安市兒童醫(yī)院兒?？企w檢的健康兒童血清共20例，檢測其血清S100蛋白水平，結果顯示，19例檢測值均在此參考區(qū)間范圍內(nèi)，因此，本研究建立的參考區(qū)間適用于本地區(qū)兒童。

3 討論

S100蛋白主要分布于神經(jīng)系統(tǒng)的雪旺氏細胞、星形膠質細胞、少突膠質細胞、黑色素瘤細胞及脂肪細胞中[6，7]。作為一種近年來新興的腦特異性蛋白損傷標志物，S100蛋白具有以下特征：①腦組織特異性高；②健康人群血清含量低且穩(wěn)定；③S100蛋白在腦損傷后具有良好的動態(tài)變化規(guī)律；④尿液、血清、腦脊液及羊膜液等均可用于檢測，且性質穩(wěn)定，不易降解[8]。因此，血清S100蛋白檢測被廣泛應用于腦外傷、缺血性腦卒中、腦出血性疾病及中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的診斷中[9]，同時S100的動態(tài)變化，對監(jiān)測腦損傷的時間、范圍和預后起到了較為重要的作用[10]?；诖?，血清S100蛋白參考區(qū)間的確定顯得尤為重要。

目前有研究顯示，血清S100蛋白水平與年齡相關，是否與性別相關尚不確定，同時，其正常范圍尚無統(tǒng)一數(shù)據(jù)[11]。STUDAHL等[12]研究發(fā)現(xiàn)，0～3歲正常嬰幼兒血清S100蛋白濃度與年齡呈負相關，新生兒期最高，0～2歲逐漸下降，2～3歲趨于穩(wěn)定，但并未發(fā)現(xiàn)與性別相關。Portela等[13]研究顯示，新生兒血清S100濃度最高，隨年齡增加而下降，20歲后趨于穩(wěn)定。這些研究均與本實驗的結果基本相符。本實驗結果顯示，西安地區(qū)0～12歲兒童S100蛋白水平為270.375 5 pg/ml，明顯高于本實驗所用的S100蛋白檢測試劑盒說明書提供的成人參考區(qū)間(S100>100 pg/ml)，大大降低了兒童顱腦損傷的誤診率，填補了本地區(qū)血清S100蛋白參考區(qū)間的空缺。但由于難以獲取健康新生兒血液標本，因此本實驗并未將新生兒納入研究對象。