江一川 ，吳雪記 ，劉 珊 ，于曉風 ，睢大筼 *

（1.吉林大學藥學院藥理教研室，長春130021；2.吉林省靈芝規(guī)范化種植及新產(chǎn)品開發(fā)工程研究中心，長春130021）

大量長期飲用含有酒精的飲料會導致肝發(fā)生脂肪肝等病理損傷，可繼續(xù)發(fā)展為酒精性肝炎、酒精性肝纖維化，最后形成酒精性肝硬化、肝細胞癌。酒精參與肝細胞內(nèi)氧化應激反應，其在肝臟中過量代謝，使肝細胞產(chǎn)生大量的自由基，促使肝細胞變性、壞死和炎性細胞浸潤，最終導致肝損傷[1]。被譽為“百草之王”的我國傳統(tǒng)名貴中藥人參（Panax ginseng C.A Mayer）能增加肝臟多種物質代謝酶的活性，不僅能增強肝臟的解毒功能，亦具有對抗肝損傷的作用[2、3]。民間有“仙草”之稱的靈芝Ganoderma Lucidium (Leyss.ex Fr.)Kars對多種因素引起的肝損傷均具有保護作用，能促進肝臟對藥物、毒物的代謝，對于中毒性肝炎有確切療效[4、5]。我們研究表明，人參超微粉、靈芝超微粉對對CCl4所致小鼠急性肝損傷具有保護作用[6]，本文進一步觀察人參及靈芝超微粉對酒精所致大鼠慢性肝損傷的保護作用，為其開發(fā)利用提供實驗依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 動物

雄性Wistar大鼠，體重220～225g，由吉林大學動物實驗中心提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK-（吉）2007-0003。實驗在溫度為24℃、濕度為60%的安靜環(huán)境下進行。

1.2 藥品與試劑

人參超微粉及靈芝超微粉由吉林大學《吉林省靈芝規(guī)范化種植及新產(chǎn)品開發(fā)工程研究中心》提供，批號：20171201，以0.5%羧甲基纖維素鈉配制成混懸液；谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）及天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）測試盒由南京建成生物工程研究所提供，批號：20180125；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）由北京康源瑞德生物技術有限公司提供，批號：20180125。

1.3 實驗方法

80只體重為220～250g大鼠隨機分為正常組，模型組，人參超微粉0.25、0.5g/kg組，靈芝超微粉0.25、0.5g/kg組及人參超微粉聯(lián)合靈芝超微粉0.25+0.25、0.5+0.5g/kg組，每組10只。除正常組給蒸餾水外，其余各組均用56%的二鍋頭白酒灌胃，第1周8 mL/kg，以后每周增加1mL，直至15mL/kg，連續(xù)灌胃8周。各給藥組于造模同時每天灌胃相應受試物1次，連續(xù)8周，正常組及模型組灌胃0.5%羧甲基纖維素鈉，灌胃體積均為20mL/kg。末次給酒后禁食12h，腹主動脈取血，分離血清，測定TNF-α、IL-6含量及ALT、AST活性。取血后摘取肝臟，去除周圍結締組織，經(jīng)生理鹽水洗滌后用濾紙吸干，電子天平稱肝濕重，計算肝臟指數(shù) [肝臟指數(shù)=肝濕重（g）/體重（g）×100%]，取部分肝臟，冰水中制成10%勻漿，4℃3500 r/min離心10 min，提取上清液檢測肝組織MDA、GSH、TG含量及SOD活性。

1.4 統(tǒng)計學處理

實驗數(shù)據(jù)以±s表示，多組間對比采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗統(tǒng)計分析。

2 結果

2.1 人參、靈芝超微粉對慢性肝損傷大鼠體質量和肝臟指數(shù)的影響

與正常組比較，模型組大鼠食欲減退，活動減少，嗜睡，少數(shù)有腹瀉，體質量明顯降低，肝臟指數(shù)明顯增加（P<0.01）；與模型組比較，人參、靈芝超微粉高劑量組及人參聯(lián)合靈芝超微粉低、高劑量組大鼠毛發(fā)有光澤，體態(tài)活潑，食量及排便未見異常，體質量明顯增加，肝臟指數(shù)明顯降低（P<0.05或P<0.01），見表1。

表1 人參、靈芝超微粉對慢性肝損傷大鼠體質量和肝臟指數(shù)的影響 (，n=10)

表1 人參、靈芝超微粉對慢性肝損傷大鼠體質量和肝臟指數(shù)的影響 (，n=10)

與正常組比較##P<0.01；與模型組比較 *P<0.05，**P<0.01

2.2 人參、靈芝超微粉對慢性肝損傷大鼠血清AST及ALT活性的影響

與正常組比較，模型組大鼠血清AST及ALT活性均明顯升高（P<0.05或P<0.01）；與模型組比較，人參、芝超微粉高劑量組及人參聯(lián)合靈芝超微粉低、高劑量組均能明顯降低大鼠血清AST、ALT活性 （P<0.05 或 P<0.01），見表 2。

表2 人參、靈芝超微粉對大鼠血清AST及ALT活性的影響 (X±s，n=10)

2.3 人參、靈芝超微粉對慢性肝損傷大鼠血清TNF-α、IL-6含量的影響

與正常組比較，模型組小鼠血清TNF-α、IL-6含量均明顯增加（P<0.01）；與模型組比較，人參、芝超微粉高劑量組及人參聯(lián)合靈芝超微粉低、高劑量組均能明顯降低大鼠血清TNF-α、IL-6含量 （P<0.05或P<0.01），見表 3。

表3 人參、靈芝超微粉對大鼠血清TNF-α、IL-6含量的影響 (X±s，n=10)

2.4 人參、靈芝超微粉對慢性肝損傷大鼠肝臟MDA、GSH、TG含量及SOD活性的影響

與正常組比較，模型組大鼠肝臟MDA及TG含量明顯增加，GSH含量及SOD活性明顯降低 （P<0.01）。與模型組比較，人參、芝超微粉高劑量組及人參聯(lián)合靈芝超微粉低、高劑量組均能明顯降低大鼠肝臟MDA及TG含量，明顯升高GSH含量及SOD活性（P<0.05 或 P<0.01），見表 4。

表4 人參、靈芝超微粉對大鼠肝臟MDA、GSH、TG含量及SOD活性的影響 (X±s，n=10)

3 討 論

人體攝入酒精的90%～95%經(jīng)肝臟代謝，產(chǎn)生大量乙醛，乙醛對肝細胞有明顯的毒性作用，既能損傷細胞器和酶的結構功能，抑制GSH的生物合成，減弱SOD等抗氧化功能，從而產(chǎn)生大量MDA等氧化物或過氧化物。而生成的自由基可破壞肝細胞膜上的脂肪酸等，引發(fā)脂質過氧化反應和胞膜通透性的急劇改變，進而導致ALT、AST和ALP等釋放人血，因此血清中ALT和AST表達高低可直接反映肝臟受損的程度[7]。又可損害線粒體脂肪酸的β氧化，引起脂質過氧化反應[8]，使三羧循環(huán)障礙和脂肪酸氧化減弱而影響脂肪代謝，致使脂肪在肝細胞內(nèi)沉積，TG升高，還能刺激免疫系統(tǒng)，Kufer細胞和免疫細胞被大量激活，產(chǎn)生TNF-α，IL-6等細胞因子，參與了肝臟炎癥的發(fā)生及肝細胞的壞死和凋亡，以及肝組織的纖維化和肝硬變的發(fā)生[9、10]。

本實驗結果表明，人參、芝超微粉均能明顯降低酒精所致慢性肝損傷大鼠TNF-α、IL-6含量及AST、ALT活力，降低肝組織MDA及TG含量，提高GSH含量及SOD活性，提示其對酒精所致大鼠慢性肝損傷具有明顯保護作用，二者聯(lián)合應用的作用效果更佳。