劉麗達(dá)，劉科亮，何其勵(lì)，王 睿

(四川省疾病預(yù)防控制中心， 成都 610041)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)作為一門綜合性的獨(dú)立的新興學(xué)科，是發(fā)展生命科學(xué)的重要的支撐條件，已經(jīng)成為現(xiàn)代生命科學(xué)研究的奠基學(xué)科。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被廣泛地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、生物制品、農(nóng)藥、食品、添加劑、化工產(chǎn)品、化妝品等方面；在人類的健康和福利研究中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物總是起著人類替身的作用，實(shí)驗(yàn)最終結(jié)果要類推到人類，因此實(shí)驗(yàn)動(dòng)物起著“活的天秤”和“活的化學(xué)試劑”的作用。隨著生命科學(xué)的發(fā)展，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物已成為其研究的支撐條件之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在生命科學(xué)領(lǐng)域里，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的課題占60%，包括傳染病、藥效、營養(yǎng)等研究都需要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為模型，因此實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量影響著整個(gè)實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量和水平，已成為制約性要素。

四川省有較多的高校、研究所及醫(yī)藥公司均開展了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相關(guān)的研究，根據(jù)統(tǒng)計(jì)，四川省已成為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用量大省，省內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的產(chǎn)量、品種、質(zhì)量還不能完全滿足省內(nèi)需求，仍需從外省購買大量實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。為了提高本省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)的質(zhì)量，根據(jù)《中華人民共和國動(dòng)物防疫法》、《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量管理辦法》、《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證管理辦法》等相關(guān)法律法規(guī)，對四川省具有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證的企業(yè)單位進(jìn)行一年一次的抽樣檢測并出具報(bào)告，及時(shí)發(fā)布質(zhì)量抽檢信息，對不合格的動(dòng)物及時(shí)進(jìn)行處理。本文對2011年至2015年四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量抽檢結(jié)果進(jìn)行分析，探討影響動(dòng)物質(zhì)量的因素，為生產(chǎn)單位進(jìn)行質(zhì)量管理提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

被檢實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均來自四川省具有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證的生產(chǎn)單位，各年度抽檢單位數(shù)量、動(dòng)物品種、等級及數(shù)量見表1。

1.2 主要試劑與儀器

Anthos2010酶標(biāo)儀、生物顯微鏡(奧林巴斯)、VITEK2COMPACT全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)；試劑盒由蘇州西山生物術(shù)有限公司代銷的美國Expression品牌；平板培養(yǎng)基由法國科馬嘉提供。

1.3 抽樣與檢測

由具備實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量檢測資質(zhì)的檢測機(jī)構(gòu)-四川省疾病預(yù)防控制中心，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行抽樣檢測[1-3]。

表1 2011～2015年四川地區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量抽檢數(shù)目Table 1 Number of laboratory animals subjected to random testing in Sichuan from 2011 to 2015

1.4 結(jié)果判定

按照相應(yīng)國家標(biāo)準(zhǔn)對檢測結(jié)果進(jìn)行綜合判定，并出具報(bào)告。本文根據(jù)這幾年的檢驗(yàn)報(bào)告對不同級別，不同種類的動(dòng)物感染情況進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果

從表2可見SPF級大鼠檢出了蠕蟲、金黃色葡萄球菌、大鼠細(xì)小病毒RV株、H-1株病毒抗體。其中金黃色葡萄球菌這4年都有檢出，2011、2012年分別有一家單位檢出，2013年有3家單位，2015年有2家單位檢出。蠕蟲2012年有2家單位檢出，大鼠細(xì)小病毒RV株和H-1株在2015年3家單位同時(shí)檢出；表3 可見SPF級小鼠檢出了體外寄生蟲、蠕蟲和肺炎克雷伯桿菌。其中肺炎克雷伯桿菌只在2011年一家單位小鼠中檢出，體外寄生蟲2012、2013年分別在不同單位檢出；蠕蟲在2012～2015年都有檢出，12年有3家單位檢出陽性，其中一家單位在2013年仍有陽性檢出，15年有2家新單位檢出蠕蟲。

表2 2011～2015年SPF級大鼠檢出陽性比例(%)Table 2 Positive rates of SPF rats from 2011 to 2015

注：此表格括號內(nèi)字母代表實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)單位編號。下表同。

Note: The letters in brackets in this form represent the laboratory animal production units number. The same in the flowing tables.

表3 2011～2015年SPF級小鼠檢出陽性比例(%)Table 3 Positive rates of SPF mice from 2011 to 2015

表4 2011～2015年普通級動(dòng)物檢出陽性比例(%)Table 4 Positive rates of conventional animals from 2011 to 2015

表5 2011～2015年抽檢動(dòng)物合格率Table 5 Qualified rates of laboratory animals samples in Sichuan (2011-2015)

普通級動(dòng)物包括兔、犬、豚鼠和猴，豚鼠(包括清潔級)在2011～2015年抽檢中未檢出陽性。兔在2013年一家單位檢出弓形蟲，檢出陽性動(dòng)物數(shù)占抽檢動(dòng)物總數(shù)10%；犬在2012年分別從兩家單位檢出皮膚真原菌和弓形蟲，陽性率為5.0%和2.5%；猴2011年有兩家單位檢出皮膚真原菌，陽性率為9.5%，2011、2012年同一家單位連續(xù)兩年志賀菌陽性，陽性率為2.4%，2.5%，獼猴皰疹病毒I型在2012年一家單位檢出陽性，陽性率為2.5%(見表4)。另，2015年第一次檢測實(shí)驗(yàn)用小型豬，省內(nèi)只有兩家生產(chǎn)企業(yè)，分別抽檢了10只，只做了布氏桿菌和弓形蟲，結(jié)果均為陰性。

2011年至2015年抽檢的四年中，大鼠合格率在2011年最高，達(dá)到95%，以后有下降趨勢，13、15年合格率只有60%；小鼠合格率除13年87.1%，其余3年都保持在90%以上。兔2013年合格率為90%，猴2011年合格率為88.1%，2012年為95.0%，其余都為100%合格。

3 討論

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)測是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)的重要內(nèi)容，做好監(jiān)測是確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量的必要手段，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量是保證整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性、規(guī)律性和重復(fù)性的基礎(chǔ)條件，同時(shí)也是實(shí)驗(yàn)工作人員健康和生命的保證。通過合理的質(zhì)量檢測，能及時(shí)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中存在問題，排除人畜共患病原體攜帶，以減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在飼養(yǎng)使用過程中對人群的感染。對于生產(chǎn)單位，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物檢測能促進(jìn)其對質(zhì)量的重視與控制，使企業(yè)良性發(fā)展。

回顧2011～2015年四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量抽檢結(jié)果，發(fā)現(xiàn)四川這4年實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量存在著一定的問題。大小鼠的質(zhì)量存在波動(dòng)的情況，其中金葡的感染率較高，由于金葡菌廣泛存在于自然界，在人群中的帶菌率也較高[4-5]，導(dǎo)致要完全隔離金葡對大鼠的感染比較困難，而且少量帶菌是否影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用還需要進(jìn)一步研究。抽檢動(dòng)物中，大鼠存在問題比較突出，尤其在2013和2015年合格率僅60%，這可能跟引種時(shí)間長，動(dòng)物質(zhì)量下降有關(guān)。從結(jié)果發(fā)現(xiàn)問題動(dòng)物主要集中在其中幾個(gè)生產(chǎn)單位，并且同時(shí)存在多種問題，應(yīng)重點(diǎn)監(jiān)督。其中有兩個(gè)單位問題幾乎一致，可能單位間生產(chǎn)動(dòng)物有交叉感染的現(xiàn)象，提醒生產(chǎn)單位對引種和外來動(dòng)物必須嚴(yán)格隔離觀察。小鼠合格率除2013年外，都保持在90%以上，主要問題是體外寄生蟲和蠕蟲，其中2012年發(fā)現(xiàn)蠕蟲的單位除了一家在2013年有檢出外，都已合格，說明通過抽檢可幫助生產(chǎn)單位發(fā)現(xiàn)問題并改進(jìn)。普通級動(dòng)物兔、豚鼠合格率比較穩(wěn)定，猴的合格率在2013和2015年也達(dá)到了100%，為四川獼猴的出口奠定了質(zhì)量基礎(chǔ)。由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生產(chǎn)和質(zhì)量監(jiān)控在四川起步較晚，抽檢中還存在著一些疏漏，從2015開始對犬抗體水平進(jìn)行了檢測，因此本文沒有對犬的合格率做統(tǒng)計(jì)，將在以后的工作中更加重視，彌補(bǔ)這一缺失。相對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)達(dá)地區(qū)四川實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品種的發(fā)展也較慢，四年中只增加了小型豬，未能充分發(fā)揮四川物種多樣性的優(yōu)勢。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量容易受到環(huán)境設(shè)施、飼養(yǎng)方式、理化因素、繁育運(yùn)輸?shù)榷喾N因素的影響，要提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量，需要多方面共同努力[6-7]。首先生產(chǎn)單位應(yīng)有足夠的重視，對有質(zhì)量問題的動(dòng)物做出相應(yīng)的處理，找到管理中的漏洞進(jìn)行改進(jìn)。個(gè)別單位由于使用人員復(fù)雜性，整改確實(shí)有難度，需要監(jiān)管部門幫助協(xié)調(diào)進(jìn)行整改。其次，監(jiān)管部門和檢測單位也要不斷提高自身管理與檢測能力。2015年四川省有新增品種小型豬，但沒有相應(yīng)的國標(biāo)對其檢測項(xiàng)目做出明確規(guī)定，在檢測中相關(guān)人員只參照其他省市地標(biāo)進(jìn)行檢測，說明監(jiān)管也存在滯后性，目前四川省小型豬的地標(biāo)也在加緊制定當(dāng)中。在檢測方面四川省一直比較重視對微生物和寄生蟲等級的監(jiān)測，且相比發(fā)達(dá)地區(qū)的檢測頻次相對較少，也缺乏靈活性[8-9]，可以根據(jù)本地的感染譜、病原特性和檢測方法的敏感性，調(diào)整監(jiān)測計(jì)劃，有目的地增加檢測頻率，既保證動(dòng)物質(zhì)量，又可節(jié)省經(jīng)費(fèi)，使檢測工作在確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量方面起到應(yīng)有的作用[10]。目前，四川省在遺傳的監(jiān)測上幾乎沒有涉及，雖然暫時(shí)并沒有近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生產(chǎn)，但是具備遺傳質(zhì)量評價(jià)的能力對于檢測機(jī)構(gòu)是必要的[11]。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳背景決定了其反應(yīng)特性，只有做好遺傳質(zhì)量檢測，才能充分保障種群的特異性，所以也要增強(qiáng)生產(chǎn)單位對遺傳質(zhì)量控制意識，共同保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量[12]。