miRNA-21在宮頸癌患者組織中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系

李新 董立新

【摘要】目的：探討宮頸癌患者miRNA-21組織表達情況及其同臨床病理特征的聯(lián)系。方法：選取41例宮頸癌病患為研究對象，取得患者腫瘤組織及臨近非腫瘤組織標(biāo)本，采用定量PCR分析的方式，測定樣品中miR-21-3P、miR-21-5P表達情況及同患者臨床病理特征的聯(lián)系。結(jié)果：同臨近非腫瘤組織對比，宮頸癌組織樣本中的miR-21-3P、miR-21-5P水平表達高（P<0.05）;宮頸癌病患中miRNA-21表達病理因素包括腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。結(jié)論：宮頸癌病患中，miRNA-21表達明顯上調(diào)，且與腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，因此可將miRNA-21作為檢測宮頸癌患者預(yù)后的重要標(biāo)志物。

【關(guān)鍵詞】miRNA-21;宮頸癌;臨床病理特征

【中圖分類號】R181.3+2【文獻標(biāo)志碼】A【文章編號】1005-0019（2019）02-075-02

宮頸癌是女性群體中常見的惡性腫瘤疾病，疾病的發(fā)生同乳頭狀瘤病毒的感染存在密切的聯(lián)系[1]。從關(guān)于宮頸癌的研究中我們可發(fā)現(xiàn)，患者機體中的染色體發(fā)生突變以及單核苷酸多態(tài)性會引起宮頸上皮細胞惡性病變，而借助小RNAs（miRNA）這一調(diào)節(jié)基因可判定宮頸癌的具體病變情況。在宮頸癌患者中，miRNA-21表達明顯更高，針對這一情況，很多的學(xué)者認(rèn)為miRNA-21對宮頸癌發(fā)生及發(fā)展有促進作用[2]。本次研究中，探討了宮頸癌患者組織中的miRNA-21表達情況，并探討其與宮頸癌患者臨床病理特征間的關(guān)系，旨在為宮頸癌患者的早期診治提供依據(jù)和重要幫助。

1資料與方法

1.1一般資料

選取本院2017年3月-2018年6月收治的41例宮頸癌病患為研究對象，所有患者均行手術(shù)切除，且術(shù)前均未行放化療。41例患者年齡范圍在35～71歲之間，平均年齡54.3歲;腫瘤大小2～6cm，平均大小3.5cm。在術(shù)中均采集患者腫瘤病灶及鄰近的非腫瘤組織標(biāo)本，將采集到的標(biāo)本放置到液氮中進行保存。

1.2方法

1.2.1進行RNA提取

用Trizol試劑提取腫瘤組織和臨近非腫瘤組織樣品的RNA，同時借助紫外分光光度計對組織器官中的miRNAs的含量與純度進行測定。

1.2.2RNA逆轉(zhuǎn)錄及定量PCR檢測

采用逆轉(zhuǎn)錄法、定量PCR檢測獲取對的宮頸癌樣本及臨近非腫瘤組織中的miRNA表達情況，具體miRNA測定內(nèi)容包括miR-21-3P及miR-21-5P。應(yīng)用miR-21-3P、miR-21-5P下游引物轉(zhuǎn)錄，各轉(zhuǎn)錄體系中均含有500ng的RNA產(chǎn)物。定量PCR檢測中，檢測反應(yīng)條件是在95℃的溫箱中預(yù)變性10min、95℃變性10s、60℃變性30s，持持續(xù)40個循環(huán)時間[3]。各個樣品重復(fù)三孔，之后應(yīng)用定量PCR儀行定量擴增。針對擴增的產(chǎn)物，借助溶解曲線鑒定產(chǎn)物的特異性，鑒定的溫度設(shè)定為60℃～95℃，應(yīng)用U6、RNA作為參照評估標(biāo)準(zhǔn)，評定基因的表達情況，對miRNA-21、U6擴增Ct比值進行計算。

針對miRNA-21的表達水平，應(yīng)用△Ct、2-△△Ct分析，△Ct計算樣品Ct值同內(nèi)參Ct值的差值，具體的計算公式為△Ct=CtmiRNA-CtU6;△△Ct的計算公式為：△△Ct=△Ct腫瘤樣品-△Ct臨近非腫瘤樣品。針對本研究所選RQ，計算公式為：RQ=2-△Ct，這主要顯示miRNA在腫瘤組織與臨近非腫瘤組織的比值大小，若計算出RQ的值小于1提示腫瘤組織中的miRNA表達下降，反之升高。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS 20.0軟件做統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料用t檢驗，P<0.05為差異顯著。

2結(jié)果

2.1miRNA表達的定量測定

41例樣品中測得38例miRNA-21高表達，宮頸癌標(biāo)本同臨近非腫瘤組織標(biāo)本的表達差異顯著（P<0.05），見表1。

2.2miRNA-21同宮頸癌病理學(xué)特征的關(guān)系

對病患的一般資料進行分析，顯示宮頸癌患者的miRNA-21表達情況腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著聯(lián)系，而與患者年齡、腫瘤分化情況無明顯聯(lián)系。

3討論

宮頸癌是臨床中常見的惡性腫瘤疾病，而在最近幾年的臨床研究中發(fā)現(xiàn)，miRNA常常作為原癌基因或抑癌基因參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。而關(guān)于miRNA同宮頸癌間的關(guān)系，多個研究提示可將miRNA作為診斷及治療疾病的重要標(biāo)志產(chǎn)物。

為了進一步的了解miRNA-21在診治宮頸癌中的價值，在本次研究中，應(yīng)用定量PCR檢測宮頸癌病患中miR-21-3P和miR-21-5P的表達情況，同時對miRNA-21的表達水平進行分析，探討其與患者臨床病理特征的關(guān)系。本研究中采集了宮頸癌病患腫瘤組織及非腫瘤組織的樣本進行檢測，結(jié)果顯示腫瘤組織樣本中miR-21-3P、miR-21-5P顯著高表達，通過進一步對患者病理學(xué)特征進行分析，提示腫瘤組織中miRNA-21高表達同腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切的聯(lián)系，這一結(jié)果同韓英等[6]的研究結(jié)果相一致。

綜上所述，在宮頸癌患者腫瘤組織中miRNA-21的表達明顯上調(diào)，且其表達情況同腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況有著緊密聯(lián)系，提示臨床中可以將miRNA-21作為評價宮頸癌患者診治和預(yù)后的重要標(biāo)志物。

參考文獻

[1]楊朝暉， 章輝， 顧華敏， 等. 宮頸癌組織中miR-21和Stat3的表達及相關(guān)性研究[J]. 浙江醫(yī)學(xué)， 2017， 39（2）：93-96.

[2]趙芳， 王靜， 余建軍， 等. microRNA表達與乳腺癌患者臨床特征的關(guān)系[J]. 中國腫瘤， 2016， 25（12）：1013-1017.

[3]王佳佳. microRNA-21、microRNA-205在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義[D]. 中國科學(xué)院心理研究所， 2012.

[4]沈蓉， 高建武， 李妍雨，等. 宮頸癌組織中miRNA-21含量檢測及其下游靶分子的初步分析[J]. 海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報， 2015， 21（11）：1536-1538.

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[6]韓英， 張蓉， 俞丹華， 等. miRNA-21在子宮頸鱗癌組織中表達的初步研究[J]. 中國婦產(chǎn)科臨床雜志， 2015，14（2）：179-180.