洪 林， 蒲 蘭， 李冰冰， 胡正平， 馬奮剛， 曹國瓊

(貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550025)

十大功勞屬Mahonia植物，隸屬于被子植物門小檗科(Berberidaceae)，為常綠灌木或小喬木，約60種，分布于東亞、東南亞、北美、中美和南美西部，中國約有35種，主要分布于四川、云南、貴州和西藏東南部[1]。十大功勞是我國傳統(tǒng)藥用植物，亦是苗族習(xí)用藥材之一，在《中國苗族藥物彩色圖集》《苗族醫(yī)藥學(xué)》等苗藥著作中均有收載。2015年版《中國藥典》收載藥材功勞木來源于闊葉十大功勞[Mahoniabealei(Fort.)Carr.]和細(xì)葉十大功勞[Mahoniafortunei( Lindl. ) Fedde.]的干燥莖[2]。在中國十大功勞屬藥用植物中，闊葉十大功勞分布最廣，達(dá) 12個省市自治區(qū)[3]。闊葉十大功勞別名土黃柏、土黃連、八角刺等，味苦，性寒，入肝、胃、大腸經(jīng)，具有清熱燥濕、瀉火解毒的功效，用于濕熱瀉痢、黃疸尿赤、目赤腫痛、胃火牙痛和瘡癤癰腫[2]。現(xiàn)代研究表明，闊葉十大功勞中所含化學(xué)成分主要為生物堿類、黃酮類及揮發(fā)油類等，藥理活性主要為抗氧化、抗炎和抑菌等。近年來，闊葉十大功勞屬植物的藥用價值受到廣泛關(guān)注，筆者對闊葉十大功勞的化學(xué)成分及藥理活性等方面的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為闊葉十大功勞在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的深入研究及其資源的合理利用提供依據(jù)。

1闊葉十大功勞化學(xué)成分的提取工藝及其含量

查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，闊葉十大功勞主要與同屬其他植物相似，該屬植物主要含生物堿類、黃酮類、揮發(fā)油等。目前針對闊葉十大功能化學(xué)成分的研究并無系統(tǒng)開展，已有的研究主要集中在對其主要化學(xué)成分的提取及提取工藝優(yōu)化方面。

1.1生物堿類

與同屬植物比較研究發(fā)現(xiàn)，闊葉十大功勞主要含小檗堿、巴馬汀、氧化小檗堿、尖刺堿、阿莫靈等生物堿類化化合物[4-5]。王樂[6]從闊葉十大功勞乙醇提取物中分離、純化得到6個Mahonia bealei化合物，分別是berberine、massenspektrum、chilenine、8-oxy-berberine、palmatine、noroxyhydrastinine，其中massenspektrum、chilenine、noroxyhydrastinine是首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)。邢俊波等[7]采用正交試驗優(yōu)化乙醇回流法提取功勞木中鹽酸小檗堿的提取工藝，其最佳提取工藝為8倍量70%乙醇熱回流提取3次，每次2 h。白婧文等[8]采用單因子試驗和正交試驗設(shè)計優(yōu)化了超聲波輔助提取功勞木中鹽酸小檗堿的提取工藝，其最佳提取工藝為乙醇濃度80%，超聲提取時間30 min，超聲功率選擇500 W，液料比為9，該條件下鹽酸小檗堿得率為1.322%。寧娜等[9]采用響應(yīng)面法，優(yōu)選了酶法輔助超聲提取功勞木中鹽酸小檗堿的提取工藝，在酶解pH 3.5、酶用量10.6 mg/g、酶解溫度51℃及酶解時間97 min條件下，小檗堿得率最高，為22.46 mg/g。蒲忠慧等[10]采用星點-響應(yīng)面法，優(yōu)選闊葉十大功勞葉中小檗堿的提取工藝，其最佳提取工藝為液料比13∶1，乙醇濃度54%，超聲時間35 min，提取2次，該條件下，小檗堿的得率為0.683%。

1.2揮發(fā)油類

董雷等[11-12]用水蒸氣蒸餾法從闊葉十大功勞莖、葉中提取揮發(fā)油，用氣相色譜-質(zhì)譜法對闊葉十大功勞莖、葉中揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，其中，莖中共檢測出96個組分，鑒定了其中18個組分，占色譜總餾出面積的80%以上，分別為羅丁醇、[1-甲基-1-(5-甲基-5-乙烯基)四氫呋喃-2-基]乙醇、 [(2,2,3-三甲基)-3-環(huán)己烯-1-基]乙醛、沉香醇、樟腦、異龍腦、5-甲基-2-(1-甲基)乙基環(huán)己醇、 [1-甲基-1-(4-甲基-3-環(huán)己烯-1-基)]乙醇、丁二酸二(2-甲基)丙酯等；鑒定了葉中28個組分，分別為2-庚烯醛、(6-甲基)-6-己烯-2-酮、羅丁醇、桉油醇、2-甲烯基環(huán)庚醇、(E,E)-2,4-十二碳二烯醛、l,l-二乙氧基乙烷、沉香醇、樟腦、順式-13-十八烯酮、異龍腦、(R)-4-甲基-1-(1-甲基)乙基-3環(huán)乙烯-1-醇、孟烯醇、異環(huán)檸檬醛、l-(2-吠喃基)己酮等。此外，李妍[13]在單因素試驗的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面法設(shè)計試驗優(yōu)化闊葉十大功勞葉揮發(fā)油的最佳提取工藝條件為超聲溫度50℃，超聲時間40 min，料液比1∶20，該條件下，葉揮發(fā)油的提取率為2.45%。

1.3其他類成分

蔣瓊鳳等[14-15]采用索氏提取法、超聲波法及微波法提取闊葉十大功勞中綠原酸并用紫外分光光度法測定了其中綠原酸的含量。劉立萍等[16]采用微波提取法提取闊葉十大功勞葉和花中的總黃酮，并對總黃酮含量進(jìn)行測定，結(jié)果表明，葉與花中總黃酮含量分別為2.182%和8.155%。王緒英等[17]用不同提取方法提取闊葉十大功勞不同部位的總黃酮，結(jié)果表明超聲波提取法優(yōu)于索氏提取法，超聲波提取根、莖、葉的黃酮含量分別為2.596%、2.881%、4.506%。

2闊葉十大功勞提取物的藥理作用

2.1抗菌與抗炎

蔡嘉慧等[18]以闊葉十大功勞葉為原料，對其抗菌作用進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，其葉中綠原酸對產(chǎn)紫青霉和米曲霉抑菌效果顯著，對枯草芽孢桿菌和酵母菌的抑菌效果不顯著，對大腸桿菌無抑菌效果。曾祥英等[19]利用雞胚試驗技術(shù)研究了闊葉十大功勞根中生物堿成分在體外對流感病毒的抑制作用，0.25 mg/mL闊葉十大功勞根提取物對甲Ⅰ型流感病毒有較強的抑制作用。李燕婧等[20-21]采用小鼠耳廓腫脹法、醋酸扭體法、番瀉葉致小鼠腹瀉法和異硫氰酸萘酯所致肝損傷模型對闊葉十大功勞水提物、醇提物進(jìn)行藥效學(xué)評價，并比較了長柱十大功勞與闊葉十大功勞水提物、醇提物的藥理作用差異，闊葉十大功勞水提物、醇提物都具有抗炎、鎮(zhèn)痛、止瀉及保肝退黃的作用，且長柱十大功勞與闊葉十大功勞水提物的藥理作用相近。

2.2抗氧化

余慶皋等[22]證明了十大功勞能抑制鄰苯三酚的自氧化速度，并能清除Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的羥自由基，且該能力在藥物濃度為0.5～4 mg/mL內(nèi)隨濃度的升高而增強。張華峰等[23]研究了闊葉十大功勞多糖清除 ABTS·+和DPPH自由基的 EC50值分別為0. 168 9 g/L和0. 222 4 g/L。涂招秀等[24]對闊葉十大功勞葉提取物正己烷相、二氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相5個不同極性相態(tài)抗氧化作用進(jìn)行研究表明，乙酸乙酯相提取物和正丁醇相提取物的抗氧化能力較強于其他萃取相。朱姮等[25]的研究表明，功勞木總生物堿、小檗堿、藥根堿、巴馬汀、非洲防己堿及千金藤寧堿對DPPH自由基清除的半抑制濃度(IC50)依次為0.07 mg/mL、0.32 mg/mL、0.24 mg/mL、0.20 mg/mL、0.18 mg/mL和0.59 mg/mL。

2.3其他作用

董雷等[26]的研究表明，闊葉十大功勞提取物是生物堿類具有逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞株K562/ADM對阿霉素(ADM)的耐藥活性。王樂[6]的研究表明，闊葉十大功勞總提取物、生物堿具有良好的HMG-Co A還原酶抑制活性。

3闊葉十大功勞中藥材的質(zhì)量控制

傳統(tǒng)中藥材質(zhì)量檢測主要通過性狀鑒別和顯微鑒別進(jìn)行，隨著理化鑒別、分子鑒別等新方法的引入，中藥質(zhì)量檢測取得了很大進(jìn)步，從外觀鑒定到一個成分作為指標(biāo)再到多種成分作為指標(biāo)進(jìn)行中藥質(zhì)量的全面控制。

3.1性狀鑒別

王碩雄[27]分別對闊葉十大功勞橫切顯微鑒別和安徽產(chǎn)闊葉十大功勞粉末顯微特征作了詳細(xì)介紹。何開家等[28]比較了長柱十大功勞與闊葉十大功勞莖和葉的性狀和顯微特征，結(jié)果表明，闊葉十大功勞莖外皮硬度、葉質(zhì)地、葉緣刺狀鋸齒數(shù)、海綿細(xì)胞的形狀、草酸鈣方晶存在數(shù)量及部位、莖韌皮纖維細(xì)胞的形狀、石細(xì)胞數(shù)量等存在區(qū)別。

3.2成分檢測

周先強等[29]建立了闊葉十大功勞中小檗堿含量測定的高效液相色譜法，結(jié)果表明，所建立的測定方法簡便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。趙丹等[30]建立了闊葉十大功勞葉藥材中鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿含量測定的高效液相色譜法，并對不同產(chǎn)地闊葉十大功勞葉藥材進(jìn)行測定與比較，結(jié)果表明，產(chǎn)地為安徽和云南的生物堿含量較高。劉靜等[31]建立闊葉十大功勞和細(xì)葉十大功勞的生物堿成分和非生物堿成分指紋圖譜，確定了17個共有峰，指認(rèn)出其中6個峰，測定了藥根堿、巴馬亭和小檗堿的含量。楊昌貴等[32-33]采用TLC對功勞木、葉樣品進(jìn)行定性鑒別，測定藥材樣品水分、灰分、醇浸出物；采用HPLC測定藥材樣品中鹽酸小檗堿的含量以應(yīng)用于十大功勞的質(zhì)量檢測。

3.3分子鑒別

DNA條形碼(DNA barcoding)是利用標(biāo)準(zhǔn)的DNA片段對物種進(jìn)行鑒定的技術(shù)，它與傳統(tǒng)的鑒定方法相比，更具特異性，非常適合區(qū)分藥材、近緣種及其混偽品。近年來，該技術(shù)成為藥材鑒定的新途徑，其中ITS2序列已成功地應(yīng)用于白芷[34]、當(dāng)歸[35]、川貝母[36]等與其混淆品的鑒定。夏葉等[37]基于GenBank核酸數(shù)據(jù)庫ITS2序列對兩種功勞葉藥材及其近緣混偽品進(jìn)行分子鑒定，結(jié)果表明，冬青屬枸骨以及十大功勞屬闊葉十大功勞和細(xì)葉十大功勞均能與其混偽品很好地區(qū)分開，闊葉十大功勞與混偽品種間最小K2P距離為0.005，平均 K2P 距離為0.238。羅小珍等[38]基于nrDNA ITS序列對廣西6種十大功勞屬植物親緣關(guān)系分析，其親緣關(guān)系都較近，闊葉十大功勞與小果十大功勞和十大功勞的親緣關(guān)系最為密切。徐婧等[39]建立了闊葉十大功勞ISSR-PCR反應(yīng)體系，可用于闊葉十大功勞的種質(zhì)鑒定及遺傳多樣性分析。

4闊葉十大功勞中藥材的臨床應(yīng)用

闊葉十大功勞根、莖、葉不同部位均可入藥，以根、莖入藥稱為功勞木。臨床上功勞木可單獨使用，也可作為復(fù)方中藥中的一味藥。梁琰等[40]將功勞木外洗液聯(lián)合噴氧防治乳腺癌放射性皮炎，可以更好地保護(hù)胸壁皮膚。作為復(fù)方中藥，已廣泛應(yīng)用于臨床，且臨床制劑較多，2015版《中國藥典》收載的含功勞木的制劑有5種，分別是功勞去火片、婦科千金片、婦科千金膠囊、腸胃適膠囊和痔瘡片，此外還有許多制劑使用功勞木，如金雞系列制劑[41]。十大功勞也是苗族常用藥材之一，《雷山苗族醫(yī)藥》與《苗族醫(yī)藥學(xué)》中記載的十大功勞均為小檗科闊葉十大功勞，苗醫(yī)認(rèn)為其性冷、味苦，入熱經(jīng)，具有除熱、排毒和退黃的功效，用于肺癆咳血和小便疼痛；在苗族驗方中用于治療小便疼痛和胸膜結(jié)核[42-43]。

5其他研究

5.1UV-B照射處理

章燕珍[44]采用UV-B照射處理闊葉十大功勞葉，與對照組相比，藥根堿、非洲防己堿、巴馬汀和小檗堿分別增加了919.6%、391.4%、192.4%和33.1%，并發(fā)現(xiàn)了UV-B誘導(dǎo)后異喹啉生物堿合成的6個關(guān)鍵酶基因也顯著提高。寧偉等[45]比較UV-B誘導(dǎo)前后離體闊葉十大功勞葉中藥根堿增幅達(dá)410.84%，巴馬汀增幅達(dá)118.76%，小檗堿誘導(dǎo)后含量則顯著降低。

5.2園藝應(yīng)用

闊葉十大功勞除了用做藥材，其植物還用于園林種植或被制作成盆景。抱峰[46]對闊葉十大功勞盆景的制作進(jìn)行詳細(xì)介紹。

5.3苗木繁殖

黃光霽等[47]采用組織培養(yǎng)法研究闊葉十大功勞葉柄愈傷組織快速繁技術(shù)，試管苗生根繼代培養(yǎng)形成的試管苗生長旺盛，生根率為94.6%，生根數(shù)為7.2條，每代的繁殖系數(shù)為2.8。陸茂華[48]以半木質(zhì)化的闊葉十大功勞枝條為插穗，研究不同生根劑吲哚丁酸、萘乙酸對插穗生根的促進(jìn)作用，結(jié)果表明，在吲哚丁酸為200 mg/L時，對插穗生根的促進(jìn)作用最為顯著。譚海文[49]研究了濕度、溫度、光照、pH、營養(yǎng)對闊葉十大功勞炭疽病菌生長、產(chǎn)孢和孢子萌發(fā)的影響，結(jié)果表明，病原菌菌絲在10～40℃均可生長，產(chǎn)生分生孢子的溫度為10～32℃，分生孢子萌發(fā)的最適溫度為28℃，在pH 3～10時該菌均能生長，最適pH值為6。

6結(jié)語

闊葉十大功勞作為傳統(tǒng)中藥和苗族民間常用藥材，歷史悠久，且毒副作用小，安全性高，具有抗病毒、抗菌及抗氧化等作用。目前針對闊葉十大功勞化學(xué)成分研究主要集中在生物堿的提取和藥理作用等方面，對其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、藥理作用機(jī)制及復(fù)方制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等研究內(nèi)容相對較少，因此深入系統(tǒng)地開展闊葉十大功勞的體內(nèi)外藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、藥理作用機(jī)制、復(fù)方制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、指紋圖譜及現(xiàn)代制劑工藝等應(yīng)用基礎(chǔ)研究，為該藥的開發(fā)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用前景。另一方面闊葉十大功勞資源雖然豐富，但隨著資源的開發(fā)利用，野生資源日益減少，在充分利用野生資源的同時，也應(yīng)對闊葉十大功勞植株的生長繁殖進(jìn)行深入研究，為該類植物的可持續(xù)利用提供理論基礎(chǔ)。