生脈飲對(duì)荷斯坦青年母牛運(yùn)輸應(yīng)激的影響

孫宇，王義翠，賈榮玲，劉延鑫，付彤， 高騰云

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，鄭州 450002； 2.河南中醫(yī)藥大學(xué)，鄭州 450046；3.南陽(yáng)農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，南陽(yáng) 473000)

荷斯坦牛是世界各國(guó)主要的奶牛品種，各地之間經(jīng) 常會(huì)通過(guò)運(yùn)輸引入奶牛，在運(yùn)輸過(guò)程中因生活環(huán)境的變化，迫使動(dòng)物處于適應(yīng)新環(huán)境下的被動(dòng)狀態(tài)，同時(shí)途中由于驚嚇、擁擠、傷風(fēng)、饑餓、顛簸、溫度等應(yīng)激原的綜合作用，機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)代謝和免疫機(jī)能發(fā)生改變，不僅出現(xiàn)食欲減退、拉稀等一系列癥狀，還會(huì)導(dǎo)致奶牛生長(zhǎng)發(fā)育緩慢、生產(chǎn)性能降低，還可能誘發(fā)腹瀉、肺炎等疾病，對(duì)奶牛業(yè)發(fā)展產(chǎn)生極大影響[1～4]。

生脈飲具有強(qiáng)心益氣，養(yǎng)陰生津，增強(qiáng)免疫功能，提高機(jī)體抵抗力的作用[5]。動(dòng)物試驗(yàn)已證實(shí)生脈飲有多臟器保護(hù)作用[6]，有抗應(yīng)激、抗炎作用[7～10]。在減少運(yùn)輸應(yīng)激造成牛發(fā)病的添加藥物方面，國(guó)內(nèi)很多學(xué)者進(jìn)行了有益的嘗試[10～13]，但至今國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)關(guān)于生脈飲防治奶牛運(yùn)輸應(yīng)激的報(bào)道。鑒于此，本試驗(yàn)探討了中草藥試劑生脈飲對(duì)荷斯坦青年母牛運(yùn)輸后的作用效果，為降低奶牛運(yùn)輸應(yīng)激提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)和時(shí)間

試驗(yàn)時(shí)間為2017年4月份，試驗(yàn)地點(diǎn)在鄭州市河南農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)牛場(chǎng)。

1.2 試驗(yàn)藥物與試劑

生脈飲（國(guó)藥準(zhǔn)字Z11020363）購(gòu)自北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司，丙二醛(MDA)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、超微量Na+/K+-ATP酶試劑盒、谷胱甘肽-過(guò)氧化物酶(GSH-Px)試劑盒和總蛋白試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3 試驗(yàn)處理及飼養(yǎng)管理

選擇15頭體重、月齡相近（10月齡）的青年母牛，隨機(jī)分為對(duì)照組、運(yùn)輸應(yīng)激組和生脈飲處理組，每組5頭。對(duì)照組牛不進(jìn)行運(yùn)輸。運(yùn)輸應(yīng)激組和生脈飲處理組牛隨機(jī)裝車(chē)，在模擬道路(包括紅綠燈停車(chē)和顛簸路段)上進(jìn)行3h速度為60km/h的公路運(yùn)輸（相當(dāng)于從許昌出發(fā)運(yùn)至鄭州），途中均不提供飲水和食物。生脈飲處理組自運(yùn)輸前3d至運(yùn)輸后7d，按120mL/（頭·d）在水中添加生脈飲，由專門(mén)實(shí)驗(yàn)人員監(jiān)督試驗(yàn)牛服用。

到達(dá)場(chǎng)舍后，對(duì)各組試驗(yàn)牛在統(tǒng)一飼養(yǎng)管理?xiàng)l件下飼喂。運(yùn)輸后1d沒(méi)有飼喂精飼料，自由飲水，每日人工飼喂2次。

1.4 樣品的采集和指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 采食量、體溫的測(cè)定 每天7∶40對(duì)每組牛的平均采食量進(jìn)行測(cè)定；每天8∶30采用獸用體溫計(jì)測(cè)定全部牛的直腸溫度。

1.4.2 血液樣本的采集與處理

在運(yùn)輸前1d，運(yùn)輸后1d、7d、14d對(duì)各組試驗(yàn)牛采集尾靜脈血10mL，ACD抗凝，迅速用冰盒帶回實(shí)驗(yàn)室，1 500r/min離心15min，分離上層血清以備測(cè)定血清無(wú)機(jī)離子含量、GSH-Px、SOD酶活力和MDA含量；下層的紅細(xì)胞備測(cè)紅細(xì)胞膜Na+/K+-ATP酶活力。

1.4.3 血液生化指標(biāo)的測(cè)定

采用 Abacus Junior VET全自動(dòng)血常規(guī)分析儀測(cè)定血液相關(guān)指標(biāo)。

1.4.4 血清抗氧化指標(biāo)的測(cè)定

GSH-Px活性采用二硫代二硝基苯甲酸法測(cè)定；SOD活性采用黃嘌呤氧化法測(cè)定；MDA含量采用硫代巴比妥酸(TBA)方法測(cè)定；紅細(xì)胞膜Na+/K+-ATP酶用比色法測(cè)定；總抗氧化能力(T-AOC)等指標(biāo)測(cè)定均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4.5 生長(zhǎng)性能及健康狀況記錄

于運(yùn)輸后1、7、14d稱重，計(jì)算14d平均日增重；此外，觀察并記錄14d內(nèi)所有試驗(yàn)牛的發(fā)病情況，主要觀察呼吸道疾病和消化系統(tǒng)疾病。

1.5 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用SPSS 19.0軟件處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。以O(shè)ne-Way ANOVA進(jìn)行方差分析，比較不同試驗(yàn)處理對(duì)奶牛血液相關(guān)生理、生化指標(biāo)及增重的影響，同時(shí)考察同一組內(nèi)、不同時(shí)間點(diǎn)奶牛血液指標(biāo)的變化。采用LSD法進(jìn)行多重比較，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 生脈飲對(duì)荷斯坦青年母牛直腸溫度的影響

表1組內(nèi)比較結(jié)果顯示，運(yùn)輸應(yīng)激組荷斯坦青年母牛平均直腸溫度在運(yùn)后1d與其他時(shí)間點(diǎn)比較溫度略高，差異顯著（P＜0.05）；對(duì)照組和生脈飲處理組平均直腸溫度在運(yùn)后1d與其他時(shí)間點(diǎn)比較，均差異不顯著（P＞0.05）。組間比較結(jié)果顯示，運(yùn)后1d，運(yùn)輸應(yīng)激組與對(duì)照組和生脈飲處理組比較，平均直腸溫度略高，差異顯著（P＜0.05）。

2.2 生脈飲對(duì)荷斯坦青年母牛干物質(zhì)采食量的影響

表2 生脈飲對(duì)荷斯坦青年母牛干物質(zhì)采食量的影響單位： kg/(頭·d)

表2組內(nèi)比較結(jié)果顯示，荷斯坦青年母牛平均干物質(zhì)采食量運(yùn)輸應(yīng)激組和生脈飲處理組在運(yùn)后7d與其他時(shí)間點(diǎn)比較，采食量下降，差異顯著（P＜0.05）；對(duì)照組干物質(zhì)采食量在運(yùn)后7d與其他時(shí)間點(diǎn)比較，差異均不顯著（P＞0.05）。組間比較結(jié)果顯示：運(yùn)后7d干物質(zhì)采食量，運(yùn)輸應(yīng)激組與對(duì)照組和生脈飲處理組比較，均差異顯著（P＜0.05），對(duì)照組與生脈飲處理組比較，差異顯著（P＜0.05）；運(yùn)后14d，運(yùn)輸應(yīng)激組與對(duì)照組和生脈飲處理組比較，差異顯著（P＜0.05）。

表3 生脈飲對(duì)荷斯坦青年母牛血液生化指標(biāo)的影響

2.3 生脈飲對(duì)荷斯坦青年母牛血液生化指標(biāo)的影響

表3組內(nèi)比較結(jié)果顯示，運(yùn)輸應(yīng)激組白細(xì)胞數(shù)、粒細(xì)胞絕對(duì)值和粒細(xì)胞百分比在運(yùn)達(dá)后1d高于其他時(shí)間點(diǎn)，淋巴細(xì)胞絕對(duì)值和淋巴細(xì)胞百分比在運(yùn)達(dá)后1d低于其他時(shí)間點(diǎn)，但是差異均不顯著（P＞0.05）。生脈飲處理組的白細(xì)胞總數(shù)、粒細(xì)胞絕對(duì)值和粒細(xì)胞百分比在運(yùn)達(dá)后1d高于其他時(shí)間點(diǎn)，淋巴細(xì)胞絕對(duì)值和淋巴細(xì)胞百分比在運(yùn)達(dá)后1d低于其他時(shí)間點(diǎn)，但是差異均不顯著（P＞0.05）。組間比較結(jié)果顯示，整個(gè)試驗(yàn)期各組之間紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量、白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、粒細(xì)胞絕對(duì)值、淋巴細(xì)胞百分比、粒細(xì)胞百分比均差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 生脈飲對(duì)荷斯坦青年母牛抗氧化能力的影響

表4 生脈飲對(duì)荷斯坦青年母?？寡趸芰Φ挠绊?/p>

由表4可知，運(yùn)輸應(yīng)激組奶牛在運(yùn)輸后1d、7d的Na+/K+-ATP酶活性均極顯著低于運(yùn)輸前1d（P＜0.01），運(yùn)輸后1d、7d血清SOD活性、GSHPx活性和T-AOC均顯著低于運(yùn)輸前1d（P＜0.05），運(yùn)輸后1、7d血清MDA含量顯著高于運(yùn)輸前1d（P＜0.05）。

在運(yùn)輸后1d、7d，紅細(xì)胞膜Na+/K+-ATP酶活性運(yùn)輸應(yīng)激組均顯著低于對(duì)照組和生脈飲處理組（P＜0.05），后二者間差異不顯著（P＞0.05）。在運(yùn)輸后1d、7d，血清SOD活性、GSH-Px活性和T-AOC運(yùn)輸應(yīng)激組顯著低于對(duì)照組和生脈飲處理組（P＜0.05）。在運(yùn)輸后1d、7d，血清MDA含量運(yùn)輸應(yīng)激組顯著高于對(duì)照組和生脈飲處理組(P＜0.05)。

2.5 生脈飲對(duì)荷斯坦青年母牛平均日增重和發(fā)病率的影響

由表5可知，運(yùn)輸應(yīng)激組運(yùn)輸后14d呼吸道發(fā)病率和消化道發(fā)病率分別達(dá)到15%和20%，而生脈飲處理組分別為0和10%。對(duì)照組和生脈飲處理組運(yùn)輸后14d平均日增重均極顯著高于運(yùn)輸應(yīng)激組（P＜0.01）。

表5 生脈飲對(duì)荷斯坦青年母牛平均日增重和發(fā)病率的影響

3 討論

胡長(zhǎng)敏等[14]對(duì)三種抗牛運(yùn)輸應(yīng)激技術(shù)效果比較的研究結(jié)果表明，運(yùn)輸前后相比，試驗(yàn)組牛體溫平均值比對(duì)照組均有輕度升高，但差異不顯著。本研究證明，運(yùn)輸應(yīng)激影響了奶牛正常的體溫，這與胡長(zhǎng)敏等研究結(jié)果一致。在本研究中，運(yùn)輸應(yīng)激組奶牛體溫略有升高（P＜0.05）；生脈飲處理組與對(duì)照組及其他時(shí)間點(diǎn)比較無(wú)顯著差異，原因可能是生脈飲能滋陰清熱，具有抗疲勞作用[15]，有利于穩(wěn)定運(yùn)輸應(yīng)激造成的奶牛體溫改變。

Mackenzie等[16]研究表明，奶牛在運(yùn)輸過(guò)程中會(huì)精神不安、肌肉緊張，大多會(huì)飲食廢止，運(yùn)輸后因反芻規(guī)律可能被打亂，采食量減少。在本研究中，運(yùn)輸后的牛采食量明顯下降，與以上研究結(jié)果一致。本研究發(fā)現(xiàn)生脈飲不僅使奶牛試驗(yàn)期的干物質(zhì)采食量得到顯著改善（P＜0.05），日增重也明顯提高（P＜0.05）；生脈飲處理組奶牛在投喂生脈飲期間，平均日采食量有上升趨勢(shì)，顯著高于運(yùn)輸應(yīng)激組的奶牛，日增重顯著高于運(yùn)輸應(yīng)激組，表明在運(yùn)輸后的飼喂過(guò)程中，生脈飲有提高奶牛日采食量、增加日增重的作用，原因可能在于生脈飲味微苦甘，益氣復(fù)脈、養(yǎng)陰生津，從而能提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能等[17]。

機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，免疫功能下降[4]。運(yùn)后第7天時(shí)，生脈飲處理組奶牛血液中的白細(xì)胞數(shù)目有增高趨勢(shì)，這提示生脈飲可以提高應(yīng)激奶牛的細(xì)胞免疫力[18]；在試驗(yàn)期內(nèi)，各組之間紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量、白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、粒細(xì)胞絕對(duì)值、淋巴細(xì)胞百分比、粒細(xì)胞百分比均差異不顯著，表明生脈飲對(duì)奶牛血液相關(guān)指標(biāo)的影響不大，表明生脈飲可以安全應(yīng)用于奶牛生產(chǎn)中。

機(jī)體的氧化/抗氧化狀態(tài)平衡可能會(huì)被應(yīng)激破壞，造成細(xì)胞功能異常。ATP酶可以為細(xì)胞輸入許多新陳代謝所需的物質(zhì)并輸出毒物、代謝廢物以及其他可能阻礙細(xì)胞進(jìn)程的物質(zhì)。鈉鉀ATP酶（又稱為鈉/鉀離子ATP酶）能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈉/鉀離子的濃度，從而保持細(xì)胞的靜息電位，其活性對(duì)細(xì)胞正常功能的維持具有重要意義[18]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)血清SOD活性等均有顯著影響，表明短途運(yùn)輸產(chǎn)生的應(yīng)激對(duì)試驗(yàn)牛造成了一定程度的氧化損傷；但生脈飲處理組在運(yùn)輸后，血清SOD活性顯著高于運(yùn)輸應(yīng)激組，MDA含量顯著低于運(yùn)輸應(yīng)激組（P＜0.05），表明生脈飲有利于機(jī)體保持氧化/抗氧化狀態(tài)的平衡。曲維忠等[9]研究表明，生脈飲可顯著增強(qiáng)小鼠血清中SOD活性并降低MDA含量，本試驗(yàn)結(jié)果與其一致，表明生脈飲增強(qiáng)了機(jī)體的抗氧化功能，在一定程度上緩解了運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)奶牛的影響。

生脈飲可增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫功能，改善心臟功能，調(diào)整心肌代謝，增強(qiáng)抵抗力；生脈飲具有顯著抗炎作用，可提高動(dòng)物對(duì)疾病的抵抗力。本研究表明，生脈飲處理組牛的呼吸道和消化道發(fā)病率明顯減少。

4 結(jié)論

運(yùn)輸前3d添加生脈飲，運(yùn)輸后可以降低奶牛體溫，提高奶牛干物質(zhì)采食量，降低MDA的含量，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化功能；生脈飲用于奶牛生產(chǎn)是安全的；綜合考慮各個(gè)因素，在奶牛運(yùn)輸前建議添加120mL/(頭·d)生脈飲，以減輕運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)荷斯坦青年母牛造成的危害。