許艷茹,石 菊,展 月,李 敏,王雅儷,徐 建*

(1.吉林修正藥業(yè)新藥開發(fā)有限公司 吉林省中藥標(biāo)準(zhǔn)化關(guān)鍵工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,吉林 長春130012；2.修正藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司,吉林 通化134000)

麝香壯骨膏藥方源于《黃帝內(nèi)經(jīng)》,已經(jīng)有兩千多年的應(yīng)用歷史[1]。處方由麝香、薄荷腦、冰片等十七味藥材組成,具有鎮(zhèn)痛、消炎的功效,臨床用于風(fēng)濕痛、關(guān)節(jié)痛等病癥的治療。皮膚外用藥的種類較多,主要包括硬膏劑、軟膏劑、貼劑、氣霧劑等劑型,但近年來外用中藥致敏的臨床事件時(shí)有發(fā)生。因此,在新藥臨床前安全性評(píng)價(jià)中,中藥刺激性、致敏性的研究備受關(guān)注[2-4]。本研究對(duì)麝香壯骨膏的皮膚刺激性及致敏性進(jìn)行研究,為其臨床安全用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 動(dòng)物與試劑

1.1 動(dòng)物

新西蘭種白兔,雌雄各半,體重(2.5±0.5)kg；豚鼠,雌雄兼有,體重(250±20)g,均由長春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司提供。

1.2 藥物與試劑

麝香壯骨膏、陰性基質(zhì)貼均由修正藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供,批號(hào)：20170905、20170912。致敏對(duì)照藥：2,4-二硝基氯苯(批號(hào)：W5656,山東西亞化學(xué)股份有限公司)。

2 方法

2.1 皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)

2.1.1 單次給藥皮膚刺激性 取健康大白兔10只,雌雄各半,單籠飼養(yǎng),隨機(jī)分成兩組,即完整皮膚組和破損皮膚組,每組5只,應(yīng)用同體左右側(cè)自身對(duì)比法。各組大白兔于給藥前24 h將其背部脊柱兩側(cè)毛剪掉(避免使用化學(xué)脫毛,減少化學(xué)刺激),去毛面積約3 cm×3 cm。破損皮膚組給藥前將各兔背部去毛區(qū)用0#砂紙擦至皮膚表面出現(xiàn)小滲血點(diǎn)為度。兔背部脊柱左側(cè)為受試藥組,右側(cè)為陰性對(duì)照組,分別給予麝香壯骨膏和基質(zhì)對(duì)照物(2.5cm×2.5cm),貼敷后隨即用醫(yī)用膠帶纏繞固定,24h后去除藥物并用溫水清潔皮膚,分別于1、24、48、72 h用肉眼觀察并記錄用藥部位有無水腫和紅斑等刺激性現(xiàn)象。并按照表1標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分,評(píng)價(jià)單次給藥皮膚刺激性強(qiáng)度。

2.1.2 多次給藥皮膚刺激性 分組及皮膚處理方法同單次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)。每日給藥1次,用醫(yī)用膠帶纏繞固定,保持6 h,連續(xù)給藥14 d。每日給藥前用肉眼觀察并記錄用藥部位有無水腫和紅斑等刺激性現(xiàn)象,并進(jìn)行評(píng)分。停藥后分別于1、24、48、72h觀察皮膚的刺激反應(yīng)。評(píng)分及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見表1、表2。

表1 皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表2 皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

2.2 過敏性實(shí)驗(yàn)

取豚鼠30只,雌雄各半,隨機(jī)分為3組：受試藥組、陰性對(duì)照(基質(zhì))組、陽性對(duì)照組(1%DNCB),每組10只。實(shí)驗(yàn)前先將豚鼠背部左側(cè)部位脫毛,面積約為3 cm×3 cm,用于致敏涂敷。Buehler試驗(yàn)在第0、7和14天局部給藥以誘導(dǎo),受試藥組給予麝香壯骨膏2.5 cm×2.5 cm,陰性對(duì)照組給予等面積基質(zhì)貼,陽性藥對(duì)照組給予1%2,4二硝基氯苯0.2 m L,貼敷于豚鼠左側(cè)脫毛區(qū)后用醫(yī)用膠帶纏繞固定,給藥6 h后去除藥物。在第27天將豚鼠背部右側(cè)部位脫毛,面積約為3 cm×3 cm,在第28天采用誘導(dǎo)給藥方法貼敷藥物6 h以局部激發(fā)。去除藥物觀察,并于24、48、72 h再次觀察皮膚過敏反應(yīng)情況。皮膚過敏反應(yīng)程度按表3、表4標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分,并評(píng)價(jià)致敏程度,計(jì)算過敏反應(yīng)發(fā)生率。除皮膚局部過敏反應(yīng)外,還應(yīng)觀察豚鼠是否出現(xiàn)哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重全身性過敏反應(yīng)。

表3 皮膚過敏反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表4 皮膚過敏性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

2.3 數(shù)據(jù)處理

按照皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分,反應(yīng)平均分值=(紅斑形成總分+水腫形成總分)/動(dòng)物總數(shù),判斷皮膚刺激強(qiáng)度。按照皮膚過敏反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分,致敏率(%)=發(fā)生過敏動(dòng)物數(shù)/合計(jì)動(dòng)物數(shù)×100%。

3 結(jié)果

3.1 單次皮膚刺激性

家兔單次給藥對(duì)完整皮膚無明顯刺激性,破損皮膚在給藥后24 h有輕度刺激性,但在48h和72h后刺激性消失。結(jié)果見表5。

表5 家兔單次給藥皮膚刺激性評(píng)分

3.2 多次皮膚刺激性

多次連續(xù)給藥對(duì)家兔完整皮膚無明顯刺激性,對(duì)破損皮膚有輕度刺激性,個(gè)別出現(xiàn)勉強(qiáng)可見的輕度紅斑,但均在72 h內(nèi)消失,均未見色素沉著、出血點(diǎn)、皮膚粗糙或皮膚菲薄、水腫現(xiàn)象發(fā)生,按照評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)判定為輕度刺激性。結(jié)果見表6、圖1。

表6 家兔多次給藥皮膚刺激性評(píng)分

3.3 過敏性實(shí)驗(yàn)

在激發(fā)給藥后6～72 h內(nèi),受試藥組、陰性對(duì)照組豚鼠皮膚未見過敏現(xiàn)象,也未出現(xiàn)哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重全身性過敏反應(yīng)。結(jié)果見表7、圖2。

表7 豚鼠皮膚過敏反應(yīng)評(píng)分

圖1 不同時(shí)間皮膚刺激性

圖2 過敏性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4 討論

麝香壯骨膏作為復(fù)方外用制劑,其是否會(huì)引起皮膚的刺激和過敏反應(yīng)尚未見報(bào)道。為確保其安全性,根據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的技術(shù)指導(dǎo)原則及文獻(xiàn)方法[5-8],本實(shí)驗(yàn)研究了麝香壯骨膏對(duì)家兔的皮膚刺激性和豚鼠的皮膚過敏反應(yīng)。本品在給藥初期家兔破損皮膚肉眼可見輕度刺激性,藥物去除后癥狀逐漸消失,實(shí)驗(yàn)中可見基質(zhì)制劑對(duì)兔破損皮膚的輕度刺激。豚鼠Buehler法致敏實(shí)驗(yàn)[9-10]結(jié)果為陰性,表明本品不會(huì)引起豚鼠的皮膚過敏反應(yīng)。楊超等[11]進(jìn)行了與本實(shí)驗(yàn)相似的制劑對(duì)破損家兔皮膚的刺激性和過敏性研究,取得了相似的結(jié)果,分析原因可能與基質(zhì)輔料中殘留的水溶性蛋白質(zhì)、松香中的樹脂酸等因素有關(guān)。此外,該種外用制劑多會(huì)添加保濕劑、防腐劑等,亦會(huì)造成潛在的危害[12-13]。

本研究結(jié)果提示,麝香壯骨膏未見完整皮膚刺激性和過敏性反應(yīng),但破損皮膚應(yīng)避免使用橡膠膏劑,為其臨床安全使用提供了參考依據(jù)。