艷山姜薄層色譜鑒別方法的建立

唐藝 陳舒憶 楊再清

【摘 要】目的：建立艷山姜的薄層色譜鑒別方法。方法：樣品加入石油醚（60～90℃）5ml，振蕩30min，離心，取上清液作為供試品溶液，另取艷山姜對(duì)照藥材同法操作，作為對(duì)照品溶液。取供試品和對(duì)照品溶液各5μl點(diǎn)于硅膠板上，以石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（9：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果：所得的薄層色譜圖譜有7個(gè)斑點(diǎn)，斑點(diǎn)清晰且分離效果和顯色效果佳。結(jié)論：該鑒別方法操作簡(jiǎn)單，試劑少、時(shí)間短，定性特征明顯、結(jié)果易于判定，可作為艷山姜的薄層鑒別方法。

【關(guān)鍵詞】艷山姜;薄層色譜鑒別;對(duì)照藥材

中圖分類(lèi)號(hào)： R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 2095-2457（2019）06-0111-003

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2019.06.041

【Abstract】Objective：To establish a thin layer chromatography identification method of Alpinia zerumbet.Methods Petroleum ether（60-90℃）were added in samples with 5ml，stired for 30 minutes，and centrifuged，the upper liquid was taken as the test solution.Alpinia zerumbet was used as the control medicinal materials，and operated in the same way as the reference solution.The test and reference solutions were spreaded on the silica gel plate at 5μl，with etroleum ether（60-90℃）：ethyl acetate（9：1）as mobile phase，and 5% sulfuric acid solution as color developing reagent.Heated at 105℃ until the spots color were clear.Results The TLC chromatogram had 7 well-separated clear spots，the separation and color development effect were good.Conclusion The identification method had the advantages of simple operation，less reagents，short-time operation，obvious qualitative characteristics and easy judgment，and it can be used as a thin layer identification method for Alpinia zerumbet.

【Key words】Alpinia zerumbet;TLC;reference crude herb

艷山姜系姜科山姜屬植物艷山姜Alpinia zerumbet（Pert）Burtt et.Smith的干燥成熟果實(shí)，生于海拔400～650m的林中蔭處[1]，別名玉桃、草扣、大良姜、大草蔻、土砂仁[2]，是貴州省少數(shù)民族地區(qū)的傳統(tǒng)習(xí)用藥物，廣泛分布于我國(guó)東南部至西南部各地。最早記載于《廣州常見(jiàn)經(jīng)濟(jì)植物》，收錄于2003版《貴州省中藥、民族藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中。性味辛、澀，溫;歸心、胃、大腸經(jīng);具有溫中燥濕，行氣止痛，截瘧的功效;用于心腹冷痛，胸腹脹滿(mǎn)，消化不良，嘔吐腹瀉，瘧疾等病癥。揮發(fā)油是艷山姜的主要化學(xué)成分，具有顯著的藥理活性[3-6]，同時(shí)艷山姜藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未曾收載過(guò)薄層鑒別的檢測(cè)方法，通過(guò)對(duì)艷山姜的研究，提取出艷山姜的揮發(fā)油成分，建立一種簡(jiǎn)便易行，專(zhuān)屬性好的TLC色譜鑒別方法。

1 材料和儀器

1.1 材料：艷山姜原植物采集于貴州貞豐，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)魏升華教授鑒定為姜科植物艷山姜Alpinia zerumbet（Pert）Burtt et.Smith，其干燥成熟果實(shí)作為對(duì)照藥材（見(jiàn)圖1）。

1.2 儀器設(shè)備：TLC PLATE HEATER Ⅲ薄層板加熱器（瑞士CAMAG）;BSA224S萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)Sartorius）;KQ-500DE數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;HY-4A往復(fù)式調(diào)速多用振蕩器（群安實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）;硅膠G薄層板（青島海洋化工廠(chǎng)，批號(hào)：20180902）。

1.3 試劑試藥：石油醚（60～90℃）、乙酸乙酯、香草醛、濃硫酸等（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法和結(jié)果

2.1 對(duì)照藥材溶液的制備：取艷山姜對(duì)照藥材粉末（過(guò)3號(hào)篩）1g，加入石油醚（60～90℃）5ml，振蕩30min，離心，取上清液作為對(duì)照藥材溶液;

2.2 供試品溶液的制備：取5批艷山姜藥材粉末（過(guò)3號(hào)篩）各1g，加入石油醚（60～90℃）5ml，振蕩30min，離心，取上清液作為供試品溶液;

2.3 點(diǎn)樣：用點(diǎn)樣毛細(xì)管吸取對(duì)照藥材溶液和供試品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上;

2.4 展開(kāi)：以石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（9：1）為展開(kāi)劑，吸取10ml展開(kāi)劑于展開(kāi)缸中，放入硅膠G薄層板預(yù)飽和15min后展開(kāi)，當(dāng)溶劑前沿距硅膠G薄層板頂端1cm處，取出，晾干;

2.5 顯色：噴以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。

2.6 結(jié)果：從下到上有7個(gè)清晰的斑點(diǎn)。見(jiàn)圖2。

3 討論

3.1 對(duì)照的選擇

艷山姜的揮發(fā)油中含有β-蒎烯、α-蒎烯、β-水芹烯、莰烯、龍腦、樟腦、冰片等成分[5]。通過(guò)研究α-蒎烯、龍腦和冰片等對(duì)照品的薄層色譜，展開(kāi)后均未得到理想的斑點(diǎn)，其中α-蒎烯對(duì)照品易分解，難購(gòu)買(mǎi)，龍腦和冰片對(duì)照品在艷山姜中含量低，斑點(diǎn)不明顯，展開(kāi)時(shí)間長(zhǎng)，故選擇經(jīng)過(guò)鑒定的艷山姜作為對(duì)照藥材，展開(kāi)后具有斑點(diǎn)多，易分離，信息量大等特點(diǎn)。

3.2 供試品溶液的制備

揮發(fā)油可按照中國(guó)藥典2015版四部通則2204揮發(fā)油測(cè)定法[7]進(jìn)行提取，但此方法提取時(shí)間長(zhǎng)達(dá)6小時(shí)，操作復(fù)雜，不能滿(mǎn)足薄層色譜鑒別快速和簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。通過(guò)多次的試驗(yàn)研究，采用石油醚（60～90℃）能有效的提取揮發(fā)油等非極性化合物，溶劑只需5ml就能較好的提取出艷山姜的揮發(fā)油成分，可直接使用上清液進(jìn)行點(diǎn)樣，避免再次濃縮溶解，簡(jiǎn)化了提取過(guò)程;同時(shí)考察了超聲提取和振蕩提取兩種方式，無(wú)顯著差異，因超聲儀產(chǎn)生較大的噪聲，故選用振蕩提取的方式。

3.3 展開(kāi)劑的確定

根據(jù)揮發(fā)油的化學(xué)性質(zhì)，考察了石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（9：1）和環(huán)己烷：丙酮（9：1）兩組展開(kāi)劑，結(jié)果顯示前一組展開(kāi)劑展開(kāi)的斑點(diǎn)清晰度、分離度、Rf值等參數(shù)較后一組好，故確定石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（9：1）為展開(kāi)劑。

4 結(jié)論

綜上所述，制定的艷山姜薄層色譜鑒別方法操作簡(jiǎn)便快速、斑點(diǎn)信息完整、專(zhuān)屬性較好，能夠準(zhǔn)確的鑒別艷山姜藥材，建議納入艷山姜藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。

【參考文獻(xiàn)】

[1]貴州植物志編輯委員會(huì).貴州植物志[M].四川：四川民族出版社，1989：702.

[2]國(guó)家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會(huì)，中華本草（第8冊(cè)）[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2004（24）：607-608.

[3]張彥燕等.艷山姜化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J]. 中藥藥理和臨床，2010，26（5）：179-181.

[4]徐旖旎等.基于NOS信號(hào)的艷山姜揮發(fā)油對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)HAECs損傷的保護(hù)作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2017， 23（15）：143-147.

[5]張彥燕等.正交試驗(yàn)法研究艷山姜揮發(fā)油保護(hù)脂多糖誘導(dǎo)HUVEC損傷的活性組分[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014. 20（20）：9-12.

[6]陶玲等.艷山姜果實(shí)揮發(fā)油對(duì)離體家兔胸主動(dòng)脈條收縮性能的影響[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2010，30（23）：1966～1969.

[7]國(guó)家藥典委員會(huì)，中華人民共和國(guó)藥典2015年版.四部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：203.