胡椒堿對(duì)家兔離體腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響及機(jī)制探討

鐘進(jìn)典 黎莊 劉瓊蘭 鄧子昕 張少蓮 林明琴 李佩瓊

【摘要】目的：研究胡椒堿對(duì)兔腸平滑肌的影響，并探討其作用機(jī)制。方法：制備兔離體腸平滑肌肌條，采用BL一420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，觀察胡椒堿對(duì)腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響;以乙酰膽堿、阿托品分別誘導(dǎo)或抑制腸平滑肌收縮后，觀察胡椒堿對(duì)平滑肌收縮的影響，以期探明胡椒堿對(duì)腸平滑肌作用的機(jī)制。結(jié)果：胡椒堿呈濃度依賴(lài)性對(duì)兔腸平滑肌收縮的振幅有抑制作用，對(duì)收縮頻率無(wú)影響。胡椒堿40mM可顯著抑制0.1mM乙酰膽堿誘導(dǎo)腸平滑肌的收縮振幅及頻率（P<0.05）;同時(shí)也可加強(qiáng)0.ImM阿托品對(duì)腸平滑肌收縮的抑制作用（P<0.05）。結(jié)論：胡椒堿對(duì)兔腸平滑肌收縮的振幅有抑制作用，對(duì)收縮頻率無(wú)影響，其機(jī)制可能與阻斷腸平滑肌上M受體有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】胡椒堿;兔腸平滑肌;收縮活動(dòng);影響

胡椒堿（Piperine）為胡椒等常用藥物主要活性成分，具有止瀉、解痙等多方面的藥理作用腳。目前與胃腸道相關(guān)的研究主要集中在胡椒堿對(duì)小鼠或大鼠體內(nèi)腸液分泌、胃腸排空的影響上吲，對(duì)小腸平滑肌收縮活動(dòng)及機(jī)制研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本文旨在通過(guò)胡椒堿灌流家兔離體腸標(biāo)本，觀察胡椒堿對(duì)腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響并探討其作用機(jī)制。

1動(dòng)物與試劑

1.1動(dòng)物

新西蘭大耳白10只，體重（2_2±0.3kg，雌雄各半。購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK（湘）2009-0004）。

1.2藥物及試劑

胡椒堿：批號(hào)：DH-23，阿托品：批號(hào)：20140601，（均購(gòu)自上海笛柏化學(xué)品技術(shù)有限公司）;氯化乙酰膽堿（Ach）（上海麥克林化學(xué)技術(shù)有限公司，批號(hào)：C10052299）。

1.3儀器

BL-420E生物機(jī)能試驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司），平滑肌離體灌流裝置（上海豪敦工貿(mào)有限公司）。

2方法

2.1離體腸段制備及試驗(yàn)系統(tǒng)調(diào)整

取健康大耳白兔，禁食24h，不禁水，擊兔頭枕部致死后迅速切開(kāi)腹部，取十二指腸腸管20cm，置于冰凍Tyr0de's液中，洗凈腸內(nèi)容物，將其剪成1-1.5cm的腸段作為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本。

打開(kāi)BL-420E生物機(jī)能試驗(yàn)系統(tǒng)，調(diào)零，定標(biāo)，在一通道輸入接口處安裝張力換能器。調(diào)節(jié)恒溫平滑肌槽，使水溫保持在37±0.5°，將臺(tái)氏液加入預(yù)管內(nèi)，藥物管加入Tyr0de's液15ml。取一腸段，上端連接張力換能器，下端連于L一型通氣鉤上，將腸管放入藥物管并固定，調(diào)節(jié)恒溫平滑肌槽，持續(xù)通入混合氣（96%02，4%C02），60-80個(gè)氣泡/min，標(biāo)準(zhǔn)負(fù)荷lg，平衡30min，待試驗(yàn)系統(tǒng)穩(wěn)定后，進(jìn)行試驗(yàn)。

2.2胡椒堿對(duì)腸平滑肌自主活動(dòng)的影響

按項(xiàng)下操作，描記一段小腸的正常收縮曲線后，累計(jì)加入胡椒堿吐溫溶液，使終濃度分別為10、20、30、40、50mlVl，加藥間隔5min，對(duì)照組加入等量吐溫一80，累加5次，每次間隔5min，觀察胡椒堿對(duì)小腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響，記錄收縮頻率及振幅，并計(jì)算抑制率。

2.3胡椒堿對(duì)乙酰膽堿誘導(dǎo)腸平滑肌收縮的抑制作用

按項(xiàng)下操作，描記一段小腸的正常收縮曲線后，分別加入Ach、阿托品（終濃度均為0.1mM），待曲線上升或下降穩(wěn)定后再加入胡椒堿40mM，對(duì)照組加等量吐溫一80，記錄加入胡椒堿后收縮活動(dòng)的頻率和振幅，計(jì)算抑制率。

2.4數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì)

采用SPSSl7.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以x±s表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。用區(qū)間測(cè)量法測(cè)量給藥前l(fā)min內(nèi)和給藥后3min內(nèi)收縮曲線的平均振幅和頻率，計(jì)算公式為：頻率（或振幅）抑制率（%）一（給藥前平均頻率（或振幅）一給藥后平均頻率（或振幅））/給藥前平均頻率（或振幅）x100%。

3結(jié)果

3.1胡椒堿對(duì)小腸平滑肌自主活動(dòng)的影響

吐溫一80對(duì)家兔腸平滑肌運(yùn)動(dòng)波形無(wú)明顯影響，胡椒堿在10-50mM的范圍內(nèi)可呈濃度依賴(lài)性抑制家兔腸平滑肌運(yùn)動(dòng)波形濃度在10mM時(shí)，與對(duì)照組相比，對(duì)腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的幅度和頻率影響很小;濃度在20-50mM時(shí)可顯著性抑制腸平滑肌活動(dòng)的振幅（P<0.05），抑制率隨濃度的增加而增強(qiáng)，但對(duì)收縮頻率抑制不明顯，結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2胡椒堿對(duì)Ach、阿托品干預(yù)后小腸平滑肌收縮的影響

當(dāng)加入0.1mM ACh后，腸平滑肌正常運(yùn)動(dòng)波形急劇升高，頻率加快，加入40mM胡椒堿后，可明顯降低ACh誘導(dǎo)的腸平滑肌的收縮頻率和振幅（P<0.01），

（結(jié)果見(jiàn)表2）。當(dāng)加入0.1mM阿托品后，腸平滑肌正常收縮曲線被抑制，40mM胡椒堿可加強(qiáng)此抑制作用（P<0.05），（結(jié)果見(jiàn)表3）。

4討論

胃腸痙攣的發(fā)生機(jī)制與神經(jīng)遞質(zhì)（Ach、組胺、5-HT等）作用于胃腸平滑肌上相應(yīng)受體有關(guān)。Ach激動(dòng)M受體，引起細(xì)胞內(nèi)IP3、ca2+濃度增加，從而使胃腸平滑肌收縮。阿托品為非選擇性M受體拮抗劑，可抑制乙酰膽堿的作用，臨床上常作解痙藥使用。本試驗(yàn)進(jìn)行了不同濃度胡椒堿對(duì)腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響以及Ach、阿托品分別干預(yù)后胡椒堿對(duì)腸平滑肌的作用。結(jié)果顯示，胡椒堿對(duì)腸平滑肌收縮幅度有抑制作用，且呈劑量依賴(lài)性，但對(duì)收縮頻率無(wú)影響;胡椒堿既能降低Ach誘導(dǎo)的腸平滑肌收縮幅度及頻率;也可加強(qiáng)阿托品對(duì)腸平滑肌的抑制作用。以上結(jié)果推測(cè)胡椒堿對(duì)腸平滑肌的抑制作用可能與阻斷腸平滑肌M受體有關(guān)，同時(shí)也提示抑制程度與腸平滑肌收縮狀態(tài)有關(guān)，對(duì)正常狀態(tài)的影響不明顯，對(duì)處在興奮狀態(tài)（收縮振幅增大及頻率加快）的有顯著抑制作用。

（通訊作者：李佩瓊）