王可 童晶晶 云悅

摘? ?要：酶標(biāo)板是酶聯(lián)免疫反應(yīng)試驗(yàn)的一個重要載體工具，主要起到承載被測液體的作用，隨著酶標(biāo)儀功能的研發(fā)和推廣，酶標(biāo)板也廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、化學(xué)合成、食品/藥品成分分析等領(lǐng)域。但是當(dāng)酶標(biāo)板進(jìn)行多孔、多板、多項(xiàng)目的試驗(yàn)操作時，過程相當(dāng)繁復(fù)且講究，所以需要有效的配套設(shè)備予以輔助。本文概述了目前酶標(biāo)板輔助裝置及配件的研究現(xiàn)狀，總結(jié)了其在使用操作過程中的突出問題，分析了幾項(xiàng)研究所涉及方法和裝置的特點(diǎn)及優(yōu)勢，并對其發(fā)展予以展望。

關(guān)鍵詞：酶標(biāo)板? 輔助裝置? 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

隨著酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測技術(shù)的廣泛應(yīng)用，如何快速準(zhǔn)確地滴加檢測樣品是提高試驗(yàn)效率的關(guān)鍵步驟[1]。酶標(biāo)板（ELISA PLATE）作為酶聯(lián)免疫反應(yīng)試驗(yàn)的一個重要載體工具，主要起到承載被測液體的作用。對于多個項(xiàng)目、多個版塊同時進(jìn)行的酶聯(lián)免疫試驗(yàn)是一項(xiàng)勞動密集型工作，操作過程非常繁瑣而且容易出錯[2]。目前，酶標(biāo)板的功能開發(fā)主要側(cè)重于降低檢測過程中各成分之間的相互影響及減少檢測物質(zhì)活性的喪失，也有少數(shù)研究報道了為避免因人為操作而引起誤差而設(shè)計的酶標(biāo)板輔助裝置及試驗(yàn)方法。

1? 酶標(biāo)板概述

酶標(biāo)板系列產(chǎn)品多選用光學(xué)透明純聚苯乙稀制造，采用特殊工藝而成，酶標(biāo)板類型主要根據(jù)酶標(biāo)儀進(jìn)行選擇，從構(gòu)造上可分為可拆卸和不可拆卸，有6孔、12孔、24孔、48孔、96孔之分，對于吸附試驗(yàn)可分為高結(jié)合力酶標(biāo)板、中結(jié)合力酶標(biāo)板和氨基化酶標(biāo)板。在細(xì)胞試驗(yàn)中，酶標(biāo)板需進(jìn)行伽瑪射線滅菌處理，可以使細(xì)胞達(dá)到最佳吸附狀態(tài)，能促進(jìn)原生代細(xì)胞：如神經(jīng)細(xì)胞、傳代細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等動物與人體細(xì)胞的生長和繁殖[3]。同時，隨著酶標(biāo)儀功能的研發(fā)和推廣，酶標(biāo)板也可應(yīng)用于低紫外區(qū)的DNA、RNA定量及純度分析和蛋白定量，酶活、酶動力學(xué)檢測，酶聯(lián)免疫測定，細(xì)胞毒性分析，細(xì)胞凋亡檢測，報告基因檢測及G蛋白偶聯(lián)受體分析（GPCR）等試驗(yàn)的檢測[4]。目前，酶標(biāo)板已被食品工業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生、生物制藥、農(nóng)產(chǎn)品加工、衛(wèi)生防疫等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。

但是，對于多個項(xiàng)目、多個版塊同時進(jìn)行，酶標(biāo)板的操作是整個試驗(yàn)過程中工作量最為巨大的一部分，所以，研究者們對酶標(biāo)板的使用進(jìn)行了優(yōu)化，設(shè)計了多種關(guān)于酶標(biāo)板的輔助操作裝置，以期為試驗(yàn)操作提供有效、便捷的方法和技術(shù)，保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的真實(shí)可靠。

2? 酶標(biāo)板外部的輔助操作裝置

酶標(biāo)板在使用時，常常需要對酶標(biāo)板進(jìn)行一個外部條件的控制，此時，只有利用合適的酶標(biāo)板輔助操作裝置才能有效地控制酶標(biāo)板內(nèi)部反應(yīng)的有序進(jìn)行。

2.1 加樣輔助操作裝置

ELISA試驗(yàn)的開展往往涉及大量的樣品數(shù)量，但是傳統(tǒng)的加樣方式，不僅速度慢，而且加樣的準(zhǔn)確率也較低，故通過相關(guān)試驗(yàn)人員的研究，得到高效率的加樣輔助操作裝置是十分有利于試驗(yàn)的順利開展。蘇志春[5]等發(fā)明了一種新型酶標(biāo)板加液感應(yīng)器，其主要部件為板體、板條，所有板條均勻布滿板孔并與指示板上指示燈相連，當(dāng)加入的液體液位到達(dá)指示元件位置后，指示燈發(fā)出電平信號，方便試驗(yàn)人員進(jìn)行液體滴加情況的實(shí)時監(jiān)測。王可等[6]提供了一種新型酶標(biāo)板輔助操作裝置，依靠光學(xué)原理增強(qiáng)了酶標(biāo)板的視覺效果，避免了試驗(yàn)操作中的漏滴錯滴現(xiàn)象，確保了多孔同時加樣的準(zhǔn)確性。

2.2 孵育輔助操作裝置

藍(lán)翊文等[7]將孵育箱設(shè)置了頂蓋，同時在放置層設(shè)置檔口和彈簧，使各酶標(biāo)板之間互相獨(dú)立，互不干擾，有效地控制了操作過程中的偶然因素。王永峰[8]在孵育裝置中使酶標(biāo)板的空心孵育腔底部增加加熱片，使其具有導(dǎo)熱振蕩功能，能夠使酶標(biāo)板在孵育過程中反應(yīng)液得到充分的混合均勻;同時還安裝了計時器和滑動蓋板，以便使其在避光條件下準(zhǔn)確的反應(yīng)。

2.3 洗板輔助操作裝置

洗板操作在酶標(biāo)板使用過程中必不可少，是否有效去除殘留物質(zhì)會直接影響底物顯色及讀板等結(jié)果的顯示。侯杰[9]在酶標(biāo)板的清洗裝置是通過安裝有主機(jī)箱、清洗臺等的一側(cè)均勻的間隔安裝清洗管和回液管，便于裝置設(shè)置單行清洗、跳行清洗和板洗等的清洗方式，增加了裝置清洗方式，便于裝置的使用，并使酶標(biāo)板可以重復(fù)多次使用。朱艷等[10]酶標(biāo)板自動洗板裝置通過三種不同的清洗液的交替使用，采用控制器控制和對四通閥門的控制實(shí)現(xiàn)沖洗方式的自動切換，以便調(diào)整沖洗速度，使洗板模式多樣化，洗板的效果更明顯。

3? 酶標(biāo)板內(nèi)部的輔助操作裝置

酶標(biāo)板外部的輔助操作裝置只能有限地控制試驗(yàn)的外部條件的變化，而在實(shí)際操作中，樣品與底物的反應(yīng)往往處于酶標(biāo)板的內(nèi)部，所以，應(yīng)該設(shè)法使酶標(biāo)板內(nèi)部的樣品和底物反應(yīng)更加充分。袁振宏等[11]通過采用彈性膜的反應(yīng)孔底面，并設(shè)置拉伸板，使酶標(biāo)板的功能兼具平底和V型底的酶標(biāo)板的優(yōu)點(diǎn)，從而檢測效果也大大提高。何韶衡[12]在傳統(tǒng)酶標(biāo)板的基礎(chǔ)上，在酶標(biāo)板孔內(nèi)設(shè)置了一個空隙，使反應(yīng)時的接觸面積大大增加。將酶標(biāo)板孔內(nèi)部的形狀重新設(shè)計，得到半球狀的底部和漏斗型的中部以及凸出壁的上部，使得反應(yīng)物之間的接觸機(jī)會增加，交叉污染的機(jī)會減少。

4? 結(jié)語

酶標(biāo)板的輔助操作裝置在設(shè)計上總結(jié)了試驗(yàn)過程中的問題和經(jīng)驗(yàn)，設(shè)計理念逐漸趨向于專業(yè)化、產(chǎn)品化發(fā)展。但多數(shù)研究及專利在產(chǎn)品轉(zhuǎn)化方面存在不足，某些工作只是停留于表面，沒有真正落實(shí)到產(chǎn)品研發(fā)。相信隨著生化技術(shù)領(lǐng)域的不斷發(fā)展，酶標(biāo)板相關(guān)配套裝置的研發(fā)及市場應(yīng)用前景也將更為明朗。

參考文獻(xiàn)

[1] 焦奎，張書圣.酶聯(lián)免疫分析技術(shù)及應(yīng)用[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004.

[2] 劉超英.酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)原理和酶標(biāo)儀原理及維修[J].醫(yī)療衛(wèi)生裝備，2009，30（2）：110-111.

[3] 曾俊，張丹桂，王革非，等.酶標(biāo)儀參數(shù)及性能檢測[J].汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008，21（3）：176-177.

[4] 成軍，孫關(guān)忠，鄭懷競，等.酶標(biāo)儀性能評價與鑒定的基本方法及其初步應(yīng)用[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1998，21（1）：50-51.

[5] 蘇志春，胡大龍，朱婷婷.一種酶標(biāo)板加液感應(yīng)器[P].中國專利：CN206420533U，2017-01-21.

[6] 王可，朱妮娜，武小暉，等.酶標(biāo)板輔助操作裝置[P].中國專利：CN207472893U，2018-06-08.

[7] 藍(lán)翊文，趙夢露，林顯玉，等.一種酶標(biāo)板孵育架[P].中國專利：CN207992226U，2018-10-19.

[8] 王永峰.一種酶標(biāo)板孵育檢測器[P].中國專利：CN208156011U，2018-11-27.

[9] 侯杰.一種酶標(biāo)板清洗裝置[P].中國專利：CN207971145U，2018-10-16.

[10]朱艷，李永霞，代艷艷，等.一種酶標(biāo)板自動洗板裝置[P]. 中國專利：CN206997192U，2018-02-13.

[11]袁振宏，張宇，何敏超，等.一種多功能酶標(biāo)板[P].中國專利：CN204666633U，2015-09-23.

[12]何韶衡.一種自由組裝的酶標(biāo)板[P].中國專利：CN106198960A，2016-12-07.