婁紅軍 顏澤清 宋珍華

項目編號：2017GABJC21

天然中草藥已成為國內(nèi)外飼料添加劑研究的熱點(diǎn)，是具有中國特色的綠色飼料添加劑。中草藥飼料添加劑是指以中草藥的物性、物味、物間關(guān)系等傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論為主導(dǎo)，輔以動物飼養(yǎng)和飼料工業(yè)等現(xiàn)代化科學(xué)理論技術(shù)而制成的純天然飼料添加劑；中草藥添加劑中的免疫活性物質(zhì)能提高機(jī)體免疫機(jī)能、抗應(yīng)激、抗病、改善動物生產(chǎn)性能,且具有無殘留、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn),同時還含有多種營養(yǎng)成分和生物活性物質(zhì)，兼有藥物和營養(yǎng)的雙重作用。為此，我們根據(jù)犬的生理及現(xiàn)代中草藥藥理研究抗高原反應(yīng)的科研成果，按中醫(yī)理論組方，研制出純中草藥添加劑，主要成分包括：紅景天、黃芪、當(dāng)歸、玫瑰花等。

經(jīng)反復(fù)試驗證明，該中草藥添加劑有活血止血、補(bǔ)氣固表，增強(qiáng)造血功能，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、抗缺氧、促進(jìn)血液循環(huán)及新陳代謝的作用，能降低高原反應(yīng)對犬的影響。為了驗證其安全性，特做如下試驗。

一、材料與方法

（一）中草藥添加劑

中草藥添加劑主要由紅景天、黃芪、當(dāng)歸、玫瑰花等多味中藥材按比例精制成粉末狀。

（二）試驗動物

試驗用小白鼠，體重為19 ～20g左右；大白鼠，體重為150g 左右，由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗動物中心提供，SPF 級，雌雄兼用，按性別分籠飼養(yǎng)，食固體飼料，自由飲水，室溫20 ～25℃，相對濕度45%～52%。

二、試驗方法

（一）急性毒性試驗

取小白鼠20 只，分成試驗組和對照組，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)，每籠5 只，共4 籠。常規(guī)飼養(yǎng)3d后開始試驗，將中草藥添加劑經(jīng)口投服于試驗組小白鼠，最大服量為0.375g/20g/次，3 次/d；對照組等量固體飼料，連續(xù)服用7d。給藥后立即觀察小白鼠的反應(yīng)情況，連續(xù)觀察7 天，記錄小白鼠的外觀、行為、精神、飲食、大小便、分泌物以及死亡等情況。實(shí)驗結(jié)束時，處死所有小白鼠進(jìn)行尸體剖檢，取其內(nèi)臟進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

（二）亞急性毒性試驗

1.分組及試驗條件

取50 只大白鼠隨機(jī)分成5 個組，第5 組為對照組，每組10 只，雌雄各半。大白鼠禁食20h 后，經(jīng)口投服中草藥飼料添加劑，投服量1～4 組分別為1.5g、1.125g、0.75g、0.375g，每天分3 次口服，對照組給予等量固體飼料，連續(xù)7d。各組均采用相同的飼養(yǎng)管理方式，在飼養(yǎng)過程中，對其進(jìn)行觀察，并記錄各組大白鼠的毒性反應(yīng)及死亡情況。

2.大白鼠生長體重的測定

試驗期間，每15 天稱重1 次。

3.大白鼠血液生理生化指標(biāo)的檢測

在灌服添加劑的第30 天斷尾采血，進(jìn)行紅細(xì)胞、白細(xì)胞計數(shù)，血紅蛋白、白蛋白、總蛋白含量測定，以及對堿性磷酸酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮與血清膽固醇活性的測定，除紅細(xì)胞和白細(xì)胞分類計數(shù)外，其余指標(biāo)均采用MD-100 自動生化分析儀檢測。

4.病理組織學(xué)變化特征

實(shí)驗過程中剖檢死亡和瀕死大白鼠，以及實(shí)驗結(jié)束時處死所有大白鼠進(jìn)行剖檢，取其內(nèi)臟進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，首先用肉眼觀察剖檢變化，然后取心、肺、肝、腎、腸等組織，用10%福爾馬林固定，常規(guī)脫水，透蠟，石蠟包埋，切片，H.E染色，光鏡觀察。

5.數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理

用t 檢驗法分析組間差異。

三、結(jié) 果

（一）急性毒性試驗

通過7d 喂養(yǎng)試驗，56.25g/kg體重的中草藥添加劑給小白鼠灌胃，試驗中所有小白鼠活動正常，行為、精神、飲食、大小便、分泌物等無異常，也未見死亡。小白鼠反應(yīng)靈敏，呼吸平穩(wěn)。小白鼠精神狀況正常，采食量、增長率與對照組相比,均無顯著性差異(P＞0. 05)。試驗結(jié)束時處死小鼠，解剖肉眼觀察主要臟器顏色及形態(tài)學(xué)改變，結(jié)果心、肝、脾、肺、腎等主要臟器未見異常。據(jù)此，中草藥飼料添加劑經(jīng)小白鼠灌胃給藥1日最大給藥劑量56.25 g/kg，未見明顯急性毒性反應(yīng)，表明該制劑安全無毒。

表1 7d 小白鼠喂養(yǎng)試驗情況

表2 大白鼠試驗詳細(xì)情況

表3 喂養(yǎng)30d 后的大白鼠血液生理生化指標(biāo)

(二 )亞急性毒性試驗

1.大白鼠基本狀況

試驗中，多數(shù)大白鼠于經(jīng)口投服后精神狀況、活動正常，反應(yīng)靈敏，呼吸平穩(wěn)，高劑量組稍有行動遲緩的情況，15 分鐘后恢復(fù)正常。急性毒性大鼠經(jīng)口大于或等于10000mg/kg，沒有出現(xiàn)副作用和不良反應(yīng)。喂養(yǎng)15d、30d 時,試驗組大白鼠平均日增重0.3275g，對照組平均日增重0.32g；處理組與對照組的體重均無顯著性差異(P＞0.05)（見表2）。內(nèi)臟經(jīng)組織病理學(xué)檢查，無任何異常病變。

2.大白鼠血液生理生化指標(biāo)的檢測

從表3 可以看出（見表3），喂養(yǎng)30d 的大白鼠，紅細(xì)胞、白細(xì)胞以及血紅蛋白略有上升，其他指標(biāo)均無明顯變化，與對照組相比，差異均不顯著(P＞0.05)。說明灌服中草藥飼料添加劑對機(jī)體血清酶的活性與生理指標(biāo)均無顯著影響。

3.組織學(xué)觀察

試驗結(jié)束臟器處理后光鏡觀察心、肺、肝、腎、腸等，未見明顯異常。

四、討 論

我們針對犬高原反應(yīng)的特點(diǎn)和中草藥的作用機(jī)理，對傳統(tǒng)中草藥經(jīng)現(xiàn)代藥理學(xué)研究篩選，研制出對犬高原反應(yīng)具有預(yù)防和治療作用的中草藥添加劑。方中主要成分包括：紅景天、黃芪、當(dāng)歸、玫瑰花等中草藥，以紅景天為君藥起主要作用，輔助其他各味以活血止血、補(bǔ)氣固表，增強(qiáng)免疫、抗缺氧之功效。

急性毒性試驗中，中草藥添加劑經(jīng)小鼠口服的1日最大量56.25g/kg，相當(dāng)于一頭工作犬(30kg)用量的281倍，沒有出現(xiàn)副作用和不良反應(yīng)；結(jié)果表明該中草藥飼料添加劑對犬等動物基本無毒害作用 。

從亞急性毒性試驗結(jié)果可以看出，中草藥添加劑可使大白鼠的紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血紅蛋白的數(shù)量有所增加，體重平均日增重0.3275g，說明該中草藥添加劑具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力和促進(jìn)動物生長的作用，這主要是中草藥中含有的苷類、多糖類、氨基酸和動物所需的轉(zhuǎn)化酶等免疫活性物質(zhì)能活化機(jī)體的免疫系統(tǒng)。這些物質(zhì)從不同環(huán)節(jié)激發(fā)免疫應(yīng)答，其中包括增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，抗缺氧，促進(jìn)血液循環(huán)及新陳代謝的作用。