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      晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞條件培養(yǎng)液對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的影響

      2019-05-10 02:50:18唐艷鄧蘇辛
      實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志 2019年8期
      關(guān)鍵詞:存活率培養(yǎng)基誘導(dǎo)

      唐艷 鄧蘇辛

      1南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院心血管內(nèi)科(湖南衡陽421001);2衡陽市中心醫(yī)院心血管內(nèi)科(湖南衡陽421001)

      阿霉素(adriamycin,ADR)是常見的抗腫瘤因子,因其心臟毒副作用,所以臨床應(yīng)用受到限制,而在其過程中心肌細(xì)胞(cardiomyocytes,CMs)凋亡為最主要的機(jī)制[1]。

      各種干細(xì)胞條件培養(yǎng)液被開始應(yīng)用于心血管疾病并取得了很好的結(jié)果[2]。而在眾多干細(xì)胞中,內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是一群能增殖、分化,暫未表達(dá)成熟血管內(nèi)皮細(xì)胞的特征性表型及形成血管的幼稚內(nèi)皮細(xì)胞,有促進(jìn)血管新生和旁分泌功能,根據(jù)在培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的時(shí)間分為早期和晚期EPCs,研究發(fā)現(xiàn)晚期EPCs 具有更強(qiáng)的旁分泌功能[3]。EPCs 因其取材方便,應(yīng)用價(jià)值大,近年來受到關(guān)注,然而關(guān)于晚期EPCs 與ADR 引起的CMs 凋亡之間的研究甚少,因此,本研究原代培養(yǎng)乳鼠CMs,建立ADR 誘導(dǎo)的CMs 凋亡模型,同時(shí)制備晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞條件培養(yǎng)液(endothelial progenitor cells conditioned medium,EPCs-CM),觀察晚期EPCs-CM 對(duì)ADR 誘導(dǎo)的CMs 凋亡的影響,并初步探討其機(jī)制。

      1 材料與方法

      1.1 主要試劑及儀器 新生小牛血清,DMEM 培養(yǎng)基(美國Gibco 公司),Ⅱ型膠原酶,EDTA 胰酶(美國Sigma 公司),CD31 相關(guān)抗原抗體(北京博鰲生物技術(shù)公司),Ⅷ因子相關(guān)抗原抗體(Solarbio,北京),鼠抗cTnI 多克隆抗體,兔抗TGF-β1 單克隆抗體(北京中杉金橋),RT-PCR 試劑盒(美國Fermentas 公 司),Hoechst33342/PI,AnnexinV-FITC/PI 及MTT 試劑盒(凱基生物),TRIzol Reagent(美國Invitrogen 公司),鹽酸阿霉素注射液(山西普德藥業(yè)),倒置顯微鏡(日本Olympus 公司),電泳儀及垂直板蛋白電泳裝置(美國Bio-rad 公司)。

      1.2 研究對(duì)象 1~3 d SD 乳鼠,體質(zhì)量7~11 g,雌雄不限;8~12 周健康雄性SD 大鼠,體質(zhì)量170~240 g,由南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

      1.3 EPCs 分離、培養(yǎng)及鑒定 頸椎脫臼法處死大鼠,無菌取出股、脛骨,沖洗骨髓腔,離心收集細(xì)胞,DMEM 培養(yǎng)基(含10%新生小牛血清)反復(fù)吹打制成細(xì)胞懸液,放置在37 ℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)。2 d 后全量換液,離心,上懸液接種于人纖維粘連蛋白預(yù)包被的6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,繼續(xù)培養(yǎng),每隔2 d 換液,傳代培養(yǎng)至28 d,免疫熒光顯微鏡檢測(cè)EPCs 表面標(biāo)志CD31、Ⅷ因子的表達(dá)進(jìn)行鑒定。

      1.4 晚期EPCs-CM 制備 培養(yǎng)28 d 收集晚期EPCs 的上清液,以2 000 r/min 離心10 min 離心棄細(xì)胞碎片,于-20 ℃保存。

      1.5 CMs 原代培養(yǎng) 無菌取出乳鼠心臟,剪碎,加入0.1%胰酶及0.1%Ⅱ型膠原酶聯(lián)合反復(fù)消化,細(xì)胞懸液先用200 目篩網(wǎng)過濾,離心收集CMs,培養(yǎng)基(含20%新生小牛血清)反復(fù)吹打制成細(xì)胞懸液,差速貼壁1 h 分離并棄成纖維細(xì)胞,以獲得較純的CMs,放置在37 ℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)。鼠抗心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTnI)多克隆抗體,鑒定CMs。

      1.6 實(shí)驗(yàn)分組與干預(yù) 分為對(duì)照組,模型組及實(shí)驗(yàn)組;對(duì)照組為原代培養(yǎng)CMs 108 h;模型組為原代培養(yǎng)CMs 48 h 后,無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)12 h,后換等量的含ADR(5 μg/mL)的DMEM 培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)48 h;實(shí)驗(yàn)組為原代培養(yǎng)CMs 48 h 后,無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)12 h,后換等量的含ADR(5 μg/mL)的DMEM 培養(yǎng)基及晚期EPCs-CM,培養(yǎng)4、24、48 h 分別用MTT 法檢測(cè)各組CMs 存活率,48 h 后3 組均檢測(cè)CMs 凋亡率,測(cè)定BNP 和TGF-β1 的mRNA 及蛋白的表達(dá)。

      1.7 MTT 法 將各組CMs 以1 × 104個(gè)細(xì)胞接種至96 孔培養(yǎng)板中,每組設(shè)置6 個(gè)復(fù)孔,每孔加入50 μL 1×MTT,繼續(xù)37 ℃孵育4 h 后吸出上清液,再加入150 μL DMSO,低速搖勻,酶標(biāo)儀在550 nm波長處檢測(cè)每組的光密度(OD),將各測(cè)試孔的OD值減去調(diào)零孔OD值(調(diào)零孔是完全培養(yǎng)基加MTT),復(fù)孔的OD值取均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,細(xì)胞存活率(%)=(實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞OD/正常組細(xì)胞OD-1)×100%,以作用時(shí)間為橫坐標(biāo),細(xì)胞存活率為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞存活率曲線。

      1.8 Hoechst33342/PI 法 取各組CMs 消化收集后,將105~106個(gè)細(xì)胞懸浮于1 mL 培養(yǎng)基中,加入Hoechst 33342 染液10 μL,混勻,37 ℃孵育10 min,于4 ℃,1 000 r/min 離心5 min棄上清液,再加入1 mL 1 × Buffer A 工作液懸浮細(xì)胞,后再加入PI 染液5 μL,室溫,避光,反應(yīng)10 min 后,熒光顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞,凋亡指數(shù)=凋亡細(xì)胞/總細(xì)胞數(shù)×100%。

      1.9 AnnexinV-FITC/PI 法 取各組CMs 用不含EDTA 的胰酶消 化 收 集,用PBS 洗滌2 次,2 000 r/min 離心5 min 收集1~5 × 105的CMs,用Binding Buffer 500 μL 懸浮細(xì)胞,向其加入Annexin V-FITC液5 μL,混勻,后再加入PI 染液5 μL,室溫、避光、反應(yīng)10 min;1 h 內(nèi),用流式細(xì)胞儀以激發(fā)波長為488 nm,發(fā)射波長為530 nm 進(jìn)行觀察,計(jì)算CMs凋亡指數(shù)。

      1.10 qRT-PCR 法 各組CMs 按產(chǎn)品說明書用Trizol Reagent 裂解,抽取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA,條件為65 ℃5 min,25 ℃5 min,42 ℃60 min,70 ℃5 min,保存于-70 ℃。以20 μL 的反應(yīng)體系進(jìn)行PCR,取2 μL 的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)產(chǎn)物分別與BNP,TGF-β1 及內(nèi)參GAPDH 引物進(jìn)行反應(yīng);BNP引物序列:上游:5′-TGATTCTGCTCCTGCTTTTC-3′;下游:5′-GTGGATTGTTCTGGAGACTG-3′;TGFβ1:上游:5′-GGACTACTACGCCAAAGAAG-3′;下游:5′-TCAAAAGACAGCCACTCAGG-3′;GAPDH:上游:5′-GCCTTCTCCATGGTGGTGAA-3′;下游:5′-GGTCGGTGTGAACGGATTTG-3′;反應(yīng)條件:BNP:95 ℃預(yù)變性1 min,95 ℃變性15 s,58 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,45 個(gè)循環(huán);產(chǎn)物140 bp;TGF-β1:預(yù)95 ℃變性1 min,95 ℃變性15 s,52 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,45 個(gè)循環(huán)。產(chǎn)物280 bp;GAPDH:94 ℃預(yù)變性3 min,94℃變性30 s,58 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,35 個(gè)循環(huán),最后再72 ℃延伸7 min。產(chǎn)物251 bp。取10 μL PCR 產(chǎn)物,進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳,成像系統(tǒng)拍照,目的產(chǎn)物的相對(duì)表達(dá)量為目的產(chǎn)物/GAPDH 產(chǎn)物電泳條帶密度的比值,引物由上海捷瑞公司提供,數(shù)據(jù)采用2-△△Ct法分析。

      1.11 Western Blot檢測(cè) 各組CMs按總蛋白提取試劑盒說明書進(jìn)行,用細(xì)胞刮收集,4℃,12 000 r/min離心10 min 獲得總蛋白,取10 μL 蛋白溶液在聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳,先恒壓電泳80 V,待溴芬藍(lán)條帶前端進(jìn)入分離膠約10 min 后,將電壓調(diào)至120 V,繼續(xù)恒壓電泳,當(dāng)條帶前端跑至分離膠底部,停止電泳,以0.8~3.0 mA/cm2恒流轉(zhuǎn)膜1~2 h,將NC 膜取出后放入5%脫脂奶粉/TBS-T 液中4 ℃封閉1 h,再放入一抗(兔抗BNP 多克隆抗體1∶500,兔抗TGF-β1 單克隆抗體1∶500,1∶1 000 鼠抗β-actin多克隆抗體)中,孵育4 ℃過夜,再用TBS-T液洗膜共3 次,每次5 min,再放入辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔,羊抗鼠二抗(1∶5 000)中,4℃孵育4 h,后用TBST 液洗膜共3 次,每次10 min;ECL 發(fā)光試劑盒顯色,顯影,用圖像處理系統(tǒng)拍照并分析。目的蛋白相對(duì)表達(dá)值為目的蛋白/內(nèi)參蛋白(β-actin)的灰度值比值。

      1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn),多組間比較采用ANOVA 檢驗(yàn),組間兩兩比較采用q檢驗(yàn);P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 EPCs 的培養(yǎng)與鑒定 培養(yǎng)2 d后大部分EPCs貼壁,呈圓形,體積較??;第4~7 天,細(xì)胞體積增大,呈梭形,形成集落,第8~10 天貼壁細(xì)胞逐漸增多,呈微血管樣生長。第28 天,呈現(xiàn)“鋪石路”樣的晚期EPCs(圖1)。免疫熒光顯示:EPCs特征性標(biāo)志物CD31、VIII 陽性細(xì)胞率高,約90%(圖2)。

      圖1 培養(yǎng)的EPCs 形態(tài)學(xué)變化(×100)Fig.1 Morphological changes of the cultured endothelial progenitor cells(×100)

      圖2 EPCs 特征性標(biāo)志物CD31 及VIII 因子的免疫熒光鑒定(×100)Fig.2 Immunofluorescence identification of characteristic marker CD31 and VIII factor of endothelial progenitor cells

      2.2 CMs 的培養(yǎng)與鑒定 培養(yǎng)第1 天后見大部分CMs 呈梭形生長,集落樣分布,可見非同步性搏動(dòng)。第3 天CMs 搏動(dòng)較前明顯有力,呈同步性搏動(dòng),頻率60~170 次/min(圖3)。免疫熒光結(jié)果:CMs 的特征性標(biāo)志物cTnI 陽性細(xì)胞率高,80%以上(圖4)。

      圖3 原代培養(yǎng)乳鼠CMs 形態(tài)學(xué)變化(×100)Fig.3 Morphological changes of the primary cultured neonatal rat cardiomyocytes

      2.3 晚期EPCs-CM 對(duì)ADR 誘導(dǎo)的CMs 存活率及凋亡率的影響 MTT 檢測(cè)CMs 存活率:同一作用時(shí)間,與對(duì)照組相比,模型組的CMs 存活率較對(duì)照組降低,實(shí)驗(yàn)組的存活率較模型組明顯升高,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),同一組不同作用時(shí)間相比,4 、24 及48 h 的CMs 存活率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,存活率隨著作用時(shí)間的延長逐漸降低,其中作用48 h差異最明顯(P<0.05)。因而選擇作用48 h 為最佳觀察點(diǎn),觀察后續(xù)CMs 凋亡及相關(guān)基因蛋白的檢測(cè)(圖5)。

      圖4 CMs 特征性標(biāo)志物cTnI 的免疫熒光鑒定(×100)Fig.4 Immunofluorescence identification of characteristic marker cTnI of cardiomyocytes

      圖5 MTT 法檢測(cè)各組CMs 存活率Fig.5 Detection of cardiomyocytes survival rate in each group by MTT

      AnnexinV-FITC/PI 法檢測(cè)結(jié)果:對(duì)照組、模型組及實(shí)驗(yàn)組凋亡指數(shù)分別為:(7.22 ± 0.21)%、(59.33±0.83)%、(15.19±0.92)%;與對(duì)照組相比,模型組的CMs 的凋亡指數(shù)顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組相比,實(shí)驗(yàn)組的凋亡指數(shù)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,圖6)。

      Hoechst33342/PI 法檢測(cè)結(jié)果:對(duì)照組、模型組及實(shí)驗(yàn)組的CMs凋亡指數(shù)分別為:(7.21±0.15)%、(58.83±0.74)%、(15.77±0.18)%。與對(duì)照組相比,模型組的CMs 的凋亡指數(shù)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組相比,實(shí)驗(yàn)組的凋亡指數(shù)明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,圖7)。

      圖6 AnnexinV-FITC/PI 雙染法檢測(cè)各組CMs 凋亡率Fig.6 Detection of cardiomyocytes apoptosis rate in each group by AnnexinV-FITC/PI double staining

      圖7 Hoechst33342/PI 雙染法檢測(cè)各組CMs 凋亡率(×400)Fig.7 Detection of cardiomyocytes apoptosis rate in each group by Hoechst33342/PI double staining

      2.4 各組CMs 的BNP 和TGF-β1mRNA 的相對(duì)表達(dá)量 2-△△Ct計(jì)算結(jié)果顯示,同對(duì)照組相比,模型組的CMs 的BNP mRNA 相對(duì)表達(dá)量是對(duì)照組的0.32 倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);同模型組相比,實(shí)驗(yàn)組的BNP mRNA 相對(duì)表達(dá)量為模型組的0.68 倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同對(duì)照組相比,模型組的CMs 的TGF-β1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量是對(duì)照組的3.6 倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);同模型組相比,實(shí)驗(yàn)組的TGF-β1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量為模型組的0.54 倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,圖8)。

      圖8 各組CMs 的BNP 及TGF-β1 mRNA 的相對(duì)表達(dá)量Fig.8 Relative expression of BNP and TGF-β1 mRNA in the cardiomyocytes of each group

      2.5 各組CMs 的BNP 和TGF-β1 蛋白的相對(duì)表達(dá)量 同對(duì)照組相比,模型組的CMs 的BNP 蛋白表達(dá)明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);同模型組相比,BNP 蛋白在實(shí)驗(yàn)組中表達(dá)上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),同對(duì)照組相比,模型組的CMs 的TGF-β1 蛋白表達(dá)明顯上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),同模型組相比,TGF-β1 蛋白在實(shí)驗(yàn)組中表達(dá)明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,圖9)。

      3 討論

      圖9 各組CMs 的BNP 及TGF-β1 蛋白的相對(duì)表達(dá)量Fig.9 Relative expression of BNP and TGF-β1 protein in the cardiomyocytes of each group

      ADR 是一個(gè)有效的抗實(shí)體瘤和惡性血液病的化療藥物,而心功能障礙是ADR 治療最嚴(yán)重的副作用,因而使用受到限制。目前越來越多證據(jù)證實(shí)ADR 誘導(dǎo)的心肌病的過程中存在大量的機(jī)制,包括氧化應(yīng)激、內(nèi)皮細(xì)胞損傷、CMs 凋亡等,其中CMs 凋亡可能扮演了關(guān)鍵的角色[1]。本研究利用ADR 誘導(dǎo)CMs 凋亡模型作為研究的切入點(diǎn),尋找能逆轉(zhuǎn)其CMs 凋亡的有效方法及機(jī)制探討。

      3.1 晚期EPCs-CM 對(duì)ADR 誘導(dǎo)的CMs 凋亡的影響 EPCs 是血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞,EPCs 主要存在于骨髓,當(dāng)在缺血、血管損傷等因素的誘導(dǎo)下,可從骨髓動(dòng)員到外周血,參與損傷血管的修復(fù),在冠心病、高血壓、血管成形術(shù)后再狹窄等血管性疾病中發(fā)揮治療作用[2],近年來研究發(fā)現(xiàn)EPCs移植同樣應(yīng)用于心肌病如糖尿病心肌病、藥物性心肌病等[4-5]。研究[3]證實(shí):EPCs 除了具有新生血管功能外,其許多心血管的作用是通過旁分泌功能所實(shí)現(xiàn)的,而檢測(cè)EPCs的旁分泌功能的方法就是將細(xì)胞X的條件培養(yǎng)液作用于細(xì)胞Y,觀察其對(duì)細(xì)胞Y 相關(guān)功能的影響,WU 等[6]研究發(fā)現(xiàn)晚期EPCs 可分泌多種具有抗凋亡因子。HYNES 等[7]發(fā)現(xiàn)EPCs-CM 能通過調(diào)控胰島素類似生長因子-1 的表達(dá)在急性心肌梗死后心臟重構(gòu)中發(fā)揮抗CMs凋亡的作用。HANEEF 等[8]發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基能通過促進(jìn)心臟血管再生在缺血性心肌病中發(fā)揮一定的治療作用。本研究培養(yǎng)EPCs 28 d 后取其上清液作為晚期EPCs-CM,將其作用于ADR誘導(dǎo)的CMs凋亡模型中,MTT法、Hoechst33342/PI及AnnexinV-FITC/PI 雙染法發(fā)現(xiàn)ADR 能明顯降低CMs 的存活率及增加CMs凋亡率,而晚期EPCs-CM能抑制ADR誘導(dǎo)的CMs凋亡,提高CMs的存活率,在體外實(shí)驗(yàn)上初步揭示晚期EPCs-CM 可能能在ADR 誘導(dǎo)的心肌病上發(fā)揮一定的治療作用。

      3.2 在晚期EPCs-CM 作用于ADR 誘導(dǎo)的CMs凋亡上TGF-β1 的表達(dá)的變化 在心衰發(fā)生發(fā)展的過程中,CMs 能產(chǎn)生一系列細(xì)胞因子,通過自分泌或旁分泌,在特定的條件下,經(jīng)特定的信號(hào)傳導(dǎo)通路,調(diào)控心衰的發(fā)生發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn),TGF-β是在心衰發(fā)展過程中急劇增加的細(xì)胞因子中的一員,TGF-β1 作為TGF-β超家族中重要亞型,生物學(xué)功能復(fù)雜,尤以介導(dǎo)CMs 凋亡的功能為主[9]。本研究發(fā)現(xiàn)ADR 誘導(dǎo)的CMs 凋亡模型中,CMs 的TGF-β1 mRNA 及蛋白表達(dá)明顯上調(diào),而晚期EPCs-CM 可明顯下調(diào)凋亡因子TGF-β1 mRNA 及蛋白的表達(dá),提示晚期EPCs-CM 可能是通過下調(diào)TGF-β1的表達(dá)抑制ADR 誘導(dǎo)的CMs 凋亡。

      3.3 在晚期EPCs-CM 作用于ADR 誘導(dǎo)的CMs凋亡上BNP 的表達(dá)的變化 BNP 作為一種神經(jīng)激素,其分泌和釋放受CMs 張力影響,在心衰的病理生理過程發(fā)揮重要作用,研究發(fā)現(xiàn)在動(dòng)物體內(nèi)注射ADR 后其血漿BNP 濃度上升,血漿BNP 可作為ADR心肌病的監(jiān)測(cè)指標(biāo)[10]。本研究應(yīng)用5 μg/mL的ADR 建立CMs 凋亡模型模擬體外ADR 性心肌病,結(jié)果發(fā)現(xiàn)CMs 的BNP mRNA 轉(zhuǎn)錄沒有增加反而被抑制,Western Blot檢測(cè)也進(jìn)一步證實(shí)BNP蛋白表達(dá)減少,這與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)于動(dòng)物體內(nèi)應(yīng)用ADR 引起的BNP 濃度升高的結(jié)論相悖,考慮可能為體外一次性使用ADR 作用于CMs 后其急性毒性作用能引起B(yǎng)NP的表達(dá)暫時(shí)減少,而分次給動(dòng)物體內(nèi)應(yīng)用ADR是一個(gè)劑量逐漸累積引起慢性毒性效應(yīng),導(dǎo)致心功能受損,心室負(fù)荷增加,從而引起B(yǎng)NP 表達(dá)分泌增加。本研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)在ADR 誘導(dǎo)的CMs 凋亡模型中應(yīng)用晚期EPCs-CM 能明顯上調(diào)BNP mRNA 轉(zhuǎn)錄及蛋白的表達(dá),提示晚期EPCs-CM可能是通過上調(diào)BNP的表達(dá)抑制ADR誘導(dǎo)的CMs凋亡。

      綜上所述,筆者認(rèn)為晚期EPCs-CM 能抗ADR誘導(dǎo)的CMs 凋亡,其機(jī)制可能是通過下調(diào)凋亡因子TGF-β1 的表達(dá)及上調(diào)BNP 的表達(dá)所實(shí)現(xiàn)的,晚期EPCs 移植未來可能可用于ADR 誘導(dǎo)的心肌病的預(yù)防和治療,甚至也可預(yù)防其他蒽環(huán)類藥物抗腫瘤時(shí)對(duì)心肌的損害。然而晚期EPCs抗CMs凋亡機(jī)制復(fù)雜,且WU 等[6]研究結(jié)果已經(jīng)提示多種細(xì)胞因子都可能對(duì)其起作用。受研究條件所限,本實(shí)驗(yàn)僅研究了其中的BNP 及TGF-β1,對(duì)于相關(guān)機(jī)制的探索,還有待于深入研究。本研究目前僅局限于體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及人體臨床試驗(yàn)尚未開展,此研究為干細(xì)胞治療心血管疾病提供前期基礎(chǔ)。

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