淺析研究禽流感病毒檢測(cè)方法相關(guān)進(jìn)展

摘 要：禽流感病毒作為一種人類(lèi)致病性病毒，有著變異性強(qiáng)、傳播速度快以及病死率高等特征，對(duì)于人民的健康生命安全也會(huì)造成嚴(yán)重的威脅。全球范圍內(nèi)進(jìn)行禽流感疫病防控的原則在于早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早診斷跟早控制，也就要求相關(guān)部門(mén)進(jìn)行禽流感病毒檢測(cè)模式的不斷優(yōu)化與完善，并需要從病原學(xué)跟血清學(xué)兩方面入手，進(jìn)行現(xiàn)有禽流感病毒檢測(cè)方法的不斷優(yōu)化，本文主要就禽流感病毒檢測(cè)方法進(jìn)行了探究分析。

關(guān)鍵詞：禽流感;病毒檢測(cè);方法

禽流感病毒屬于正黏病毒科的一種，可以引起禽類(lèi)呼吸系統(tǒng)到嚴(yán)重全身敗血癥等多種病癥，并能夠直接感染到人體。此外禽流感病毒有著非常強(qiáng)的變異性，若未在第一時(shí)間內(nèi)得到有效的干預(yù)控制，還會(huì)造成非常嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失跟社會(huì)損失。我國(guó)作為一個(gè)人口大國(guó)，高致病性的禽流感對(duì)于人民的健康安全跟國(guó)民經(jīng)濟(jì)均會(huì)造成非常大的威脅，也就需要加強(qiáng)對(duì)禽流感病毒檢測(cè)方法的不斷強(qiáng)化與完善，來(lái)獲得良好的禽流感防控效果。

一、血清學(xué)檢測(cè)

1.血凝實(shí)驗(yàn)跟血凝抑制實(shí)驗(yàn)

該試驗(yàn)方法作為WHO在全球范圍內(nèi)常用的一種禽流感檢測(cè)方法，也是我國(guó)現(xiàn)階段禽流感檢測(cè)工作中的常見(jiàn)檢測(cè)手段。在進(jìn)行禽流感病毒的檢測(cè)過(guò)程中，采用血凝實(shí)驗(yàn)方法具備有特異性高以及操作簡(jiǎn)便的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)，但是在檢測(cè)過(guò)程中需要進(jìn)行NDV等病毒的排除，對(duì)于病毒種類(lèi)也無(wú)法進(jìn)行直接的檢測(cè)。這樣就容易出現(xiàn)假陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果，使得禽流感檢測(cè)的準(zhǔn)確性無(wú)法得到有效保障。

2.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

在禽流感病毒檢測(cè)過(guò)程中采用酶聯(lián)免疫吸附法，還有這面感性高的特征，對(duì)于抗原跟抗體均能夠起到良好的檢測(cè)效果，因此在大批血清樣本的檢測(cè)過(guò)程中也獲得了廣泛的應(yīng)用。近年來(lái)我國(guó)的ELISA檢測(cè)技術(shù)得到了迅速的發(fā)展，診斷時(shí)間以及診斷試劑也得到了一定程度的優(yōu)化。相關(guān)研究人員采用昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)所制定的禽流感病毒HA蛋白，能夠?qū)υ擃?lèi)型的禽流感病毒起到良好的檢測(cè)效果，還具有非常高的重復(fù)性跟穩(wěn)定性。

3.電化學(xué)發(fā)光免疫法

元文寶等研究人員選用了釕聯(lián)吡啶對(duì)H9亞型AIV的單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記，并對(duì)生物素化多抗的最佳工作濃度進(jìn)行了優(yōu)化，進(jìn)行了臨界點(diǎn)跟反應(yīng)譜的確定，對(duì)構(gòu)建完成的方向進(jìn)行了試驗(yàn)，結(jié)果表明采用電化學(xué)發(fā)光免疫法能夠?qū)εR床上的禽流感病毒起到良好的檢測(cè)效果，對(duì)于H9亞型禽流感病毒的監(jiān)測(cè)以及防控工作也有著非常積極的意義。所有相關(guān)研究人員還需要加強(qiáng)對(duì)該方面的重視力度，為我國(guó)的禽流感病毒檢測(cè)工作提供一定的幫助。

4.納米熒光檢測(cè)方法

為了實(shí)現(xiàn)對(duì)禽流感病毒的有效檢測(cè)，相關(guān)研究人員還采用納米熒光方法進(jìn)行了H9亞型AIV的檢測(cè)體系，結(jié)果表明該類(lèi)型的禽流感病毒在納米熒光檢測(cè)模式中能夠獲得良好的檢測(cè)效果。此外構(gòu)建完成的H9亞型納米熒光檢測(cè)具備有良好的檢測(cè)特異性，跟其他的亞型AIV病毒也無(wú)交叉性，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，可以在H9亞型禽流感病毒的檢測(cè)工作中得到有效應(yīng)用。

二、分子生物學(xué)診斷方法

1.多重PCR檢測(cè)法

在結(jié)合GenBank上已經(jīng)登錄的AIV的M基因以及NDV的F基因所合成的2對(duì)引物，能夠采用優(yōu)化反應(yīng)條件的模式，來(lái)對(duì)這幾種禽流感病毒進(jìn)行PCR檢測(cè)，并且就該檢測(cè)方法的敏感性、重復(fù)性以及特異性進(jìn)行了檢驗(yàn)。結(jié)果表明通過(guò)多重PCR檢測(cè)法的應(yīng)用，能夠?qū)@兩種病毒起到迅速準(zhǔn)確的鑒別效果，并能夠在臨床上完成這兩種病原的鑒別診斷工作，因此值得在臨床診斷上進(jìn)行應(yīng)用跟推廣。

2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR

該檢測(cè)方法是在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，采用熒光物質(zhì)對(duì)每次的PCR循環(huán)產(chǎn)物量進(jìn)行測(cè)定，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行禽流感病毒的檢測(cè)工作。通過(guò)對(duì)NCBL數(shù)據(jù)庫(kù)中的亞型AIV的HA基因序列進(jìn)行分析，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行特異性引物的針對(duì)性設(shè)定，隨后構(gòu)建針對(duì)該禽流感病毒的熒光定量PCR檢測(cè)方法，能夠?qū)υ撉萘鞲胁《酒鸬搅己玫脑\斷效果。相關(guān)研究表明采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)法，還具備有非常高的檢測(cè)敏感度，對(duì)于各種AIV病毒的檢測(cè)也能夠提供良好的技術(shù)支持，還可以實(shí)現(xiàn)對(duì)外來(lái)AIV的有效監(jiān)測(cè)，避免禽流感病毒所造成的各種影響。

3.環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

該技術(shù)在測(cè)定過(guò)程中不需要采用大型的儀器設(shè)備，并且具備有操作簡(jiǎn)單、成本低廉以及檢測(cè)速度快的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)。跟常規(guī)分子生物學(xué)方法進(jìn)行對(duì)比，該辦法具備有更高的靈敏性以及特異性，適合在基層的獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室以及養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)進(jìn)行應(yīng)用跟推廣。此外在該反應(yīng)體系中，還能夠采用優(yōu)選的凍干保護(hù)劑來(lái)進(jìn)行冷凍干燥處理，并且可以直接進(jìn)行試劑盒的制作，對(duì)后續(xù)的檢驗(yàn)工作提供良好的幫助。

三、結(jié)語(yǔ)

近年來(lái)我國(guó)的禽流感病毒檢測(cè)技術(shù)得到了迅速的發(fā)展，禽流感檢測(cè)手段也變得越來(lái)越多。但是不同檢測(cè)方法在應(yīng)用過(guò)程中還存在有一定的局限性，比如養(yǎng)殖場(chǎng)或者疫情爆發(fā)地就可以采用膠體金診斷試紙來(lái)進(jìn)行禽流感病毒的篩選工作，從而滿足禽流感病毒檢測(cè)工作的具體需求。因此在實(shí)際工作中還需要結(jié)合當(dāng)?shù)厍闆r，進(jìn)行檢測(cè)方法的合理選擇，促進(jìn)我國(guó)養(yǎng)殖行業(yè)得到更進(jìn)一步的發(fā)展。

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作者簡(jiǎn)介：余新玲（1977-07-）女，河南確山人，本科，中級(jí)獸醫(yī)師。工作內(nèi)容及方向：動(dòng)物檢疫及動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督執(zhí)法。