基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探究三七治療冠心病的潛在作用機(jī)制Δ

黃桂鋒，鄭曉虹，麥喆钘，楊詔鈞，林雪瑩，李俊哲（.汕頭市潮陽區(qū)大峰醫(yī)院心血管內(nèi)科，廣東汕頭5500；.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，廣州 50405；.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，廣州50405）

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們生活質(zhì)量的提高，高脂、高糖的飲食習(xí)慣日漸普遍，導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病（以下簡稱“冠心病”，CHD）的發(fā)病率和病死率逐年增加，已嚴(yán)重影響到人們的生活質(zhì)量[1]。CHD指冠狀動(dòng)脈血管發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化病變而引起血管腔狹窄或阻塞，造成心肌缺血、缺氧或壞死而導(dǎo)致的心臟病，病情嚴(yán)重可導(dǎo)致患者猝死[2-3]。CHD在臨床的藥物治療思路主要包括抗血小板聚集、調(diào)脂、擴(kuò)張冠脈、減輕心肌耗氧量、改善心臟重構(gòu)等[4-6]。目前，隨著中醫(yī)藥的蓬勃發(fā)展，中藥在輔助治療CHD方面發(fā)揮了重要作用。本研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)，臨床上采用血栓通注射液或膠囊聯(lián)合常規(guī)藥物治療CHD往往可以取得更好的療效[7-8]。而血栓通相關(guān)制劑的主要藥味均為三七[9-10]，因此本研究團(tuán)隊(duì)認(rèn)為三七在CHD治療過程中可發(fā)揮巨大的作用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究也證實(shí)，三七總皂苷可改善能量代謝障礙，促進(jìn)受損組織對能量物質(zhì)的利用，有利于組織結(jié)構(gòu)和功能的恢復(fù)；有利于清除自由基和抗氧化應(yīng)激，減少細(xì)胞損傷；能調(diào)控細(xì)胞凋亡信號(hào)通路，明顯減少心肌細(xì)胞凋亡，可在一定程度上減少CHD誘因的產(chǎn)生，從而降低CHD的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[11-12]。三七化學(xué)成分復(fù)雜，對相關(guān)疾病的治療具有多成分、多靶點(diǎn)、多途徑等特點(diǎn)，但是目前對其藥理學(xué)研究僅停留在單成分研究或其對某種動(dòng)物模型和某個(gè)/某幾個(gè)相關(guān)因子的影響，尚無法很好地解釋其在治療CHD中作用廣泛、效果良好的特點(diǎn)，其化學(xué)活性成分和作用機(jī)制均不明確。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是以系統(tǒng)生物學(xué)為基礎(chǔ)，利用生物網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫、各種生物網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建方法和生物網(wǎng)絡(luò)分析技術(shù)，通過網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建工具，系統(tǒng)闡述“藥物-基因-靶點(diǎn)-疾病”之間復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)關(guān)系的一門交叉學(xué)科[13]。本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，分析三七的化學(xué)成分、作用靶標(biāo)、信號(hào)通路，并進(jìn)行京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集分析以及基因本體（GO）分類富集分析，揭示三七的多靶標(biāo)、多通路協(xié)同作用機(jī)制，旨在發(fā)掘其治療CHD的新靶點(diǎn)和新通路，為臨床治療CHD提供新思路，同時(shí)也為三七的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 三七活性成分的獲取

利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)（TCMSP，http：//lsp.nwu.edu.cn/）檢索三七的化學(xué)成分。以“三七”為關(guān)鍵詞在該平臺(tái)進(jìn)行檢索，獲得其化學(xué)成分的信息，包括分子名、分子量、脂水分配系數(shù)、半衰期、口服吸收度（OB）和類藥性（DL）等。由于并非所有成分均能作為藥物進(jìn)入人體內(nèi)發(fā)揮作用，所以根據(jù)TCMSP平臺(tái)的推薦，選取同時(shí)滿足“OB值大于30%”“DL值大于0.18”這兩個(gè)納入條件[14]的化學(xué)成分，作為三七的活性成分。

1.2 三七治療CHD的作用靶標(biāo)基因的獲取

1.2.1 三七活性成分靶標(biāo)基因的獲取 采用Discovery Studio 4.0軟件對“1.1”項(xiàng)下獲取的三七活性成分進(jìn)行預(yù)處理：選擇“Minimize ligands”模塊，選擇“CHARMm”力場，能量優(yōu)化算法采用“共軛梯度法”和“最陡下降法”，對活性成分進(jìn)行能量最小化分析；分子多構(gòu)象生成選擇“BEST”模式進(jìn)行。通過Chembiodraw Ultra 12.0軟件繪制三七活性成分的3D結(jié)構(gòu)圖，然后將所有活性分子的3D結(jié)構(gòu)上傳到DRAR-CPI服務(wù)器（http：//cpi.bio-x.cn/drar/），并基于反向分子對接方法對活性成分和靶標(biāo)間相互作用的親和性進(jìn)行評分。按照該服務(wù)器推薦，選定Z-score值小于－0.5的蛋白[15]作為三七活性成分的靶標(biāo)蛋白，并記錄活性成分和靶標(biāo)蛋白的對應(yīng)關(guān)系。然后通過UniProtKB數(shù)據(jù)庫（https：//www.uniprot.org/）檢索活性成分靶標(biāo)蛋白的分子名，檢索字段為“All Fields”，限定物種為“Human”，從而獲取靶標(biāo)蛋白的相應(yīng)基因與其UNIPROTKB編號(hào)（UPID）。

1.2.2 CHD疾病靶標(biāo)基因的獲取 分別在GeneCards數(shù)據(jù)庫（https：//www.genecards.org/）和DisGeNET數(shù)據(jù)庫（http：//www.disgenet.org/）中進(jìn)行檢索，以“Coronary heart disease”或“CHD”為關(guān)鍵詞，獲取CHD疾病靶標(biāo)基因。

1.2.3 三七治療CHD的成分-疾病靶標(biāo)基因的獲取采用Excel 2007軟件錄入三七活性成分靶標(biāo)基因和CHD疾病靶標(biāo)基因，對兩者進(jìn)行對比并篩選出交集基因，作為三七治療CHD的成分-疾病靶標(biāo)基因（簡稱為“作用靶標(biāo)”）；同時(shí)，篩選出上述靶標(biāo)基因?qū)?yīng)的UPID。

1.3 有效成分-作用靶標(biāo)基因網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

根據(jù)“1.2.3”項(xiàng)下篩選獲得的作用靶標(biāo)基因，從“1.1”項(xiàng)下獲取的三七活性成分中篩選出三七中可能具有CHD治療作用的活性成分，作為有效成分。將這些有效成分和作用靶標(biāo)基因及兩者間的對應(yīng)關(guān)系文件導(dǎo)入Cytoscape 3.6.0軟件，構(gòu)建有效成分-作用靶標(biāo)基因網(wǎng)絡(luò)，并對網(wǎng)絡(luò)可視化圖譜進(jìn)行讀取和分析。

1.4 核心靶標(biāo)的獲取

1.4.1 潛在核心靶標(biāo)的獲取 將“1.2.3”項(xiàng)下獲得的三七治療CHD的作用靶標(biāo)基因的UPID導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫（https：//string-db.org），限定物種條件為“Homo sapiens”，檢索獲取作用靶標(biāo)基因的相互作用網(wǎng)絡(luò)關(guān)系。再將這一相互作用網(wǎng)絡(luò)關(guān)系文件導(dǎo)入Cytoscape 3.6.0軟件，繪制作用靶標(biāo)基因的相互作用網(wǎng)絡(luò)。采用該軟件的“Network Analyzer”工具對相互作用網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析并計(jì)算各作用靶標(biāo)的連接度（Degree）。Degree值代表某個(gè)靶標(biāo)與其可能具有相互作用關(guān)系的其他靶標(biāo)數(shù)量，該值越高則意味著該靶標(biāo)在三七治療CHD中發(fā)揮的作用可能越大。篩選Degree值最大的5個(gè)作用靶標(biāo)作為潛在核心靶標(biāo)。根據(jù)各個(gè)作用靶標(biāo)的Degree值調(diào)整節(jié)點(diǎn)的面積大小，繪制作用靶標(biāo)的相互作用網(wǎng)絡(luò)圖（Degree值越大則節(jié)點(diǎn)面積越大），并對圖譜進(jìn)行讀取和分析。

1.4.2 潛在核心靶標(biāo)與有效成分之間結(jié)合力的分子對接驗(yàn)證 將“1.4.1”項(xiàng)下獲得的潛在核心靶標(biāo)導(dǎo)入System Dock Web Site服務(wù)器（http：//systemsdock.unit.oist.jp/iddp/home/index），按照服務(wù)器原始參數(shù)設(shè)定，將潛在核心靶標(biāo)與“1.3”項(xiàng)下獲得的三七治療CHD的有效成分進(jìn)行分子對接，得到對接評分（Docking score），用來評價(jià)有效成分與潛在核心靶標(biāo)的結(jié)合力，以驗(yàn)證核心靶標(biāo)的真實(shí)性。當(dāng)對接評分＞4.25時(shí)，表示成分和靶標(biāo)具有一定的結(jié)合能力；當(dāng)對接評分＞5.0時(shí)，表示其結(jié)合能力較強(qiáng)；當(dāng)對接評分＞7.0時(shí)，表示其結(jié)合能力很強(qiáng)[16]。

1.5 重要信號(hào)通路和分子功能的獲取

將“1.2.3”項(xiàng)下獲得的三七治療CHD的作用靶標(biāo)基因?qū)隓AVID數(shù)據(jù)庫（https：//david.ncifcrf.gov/），設(shè)置“Select Identifier”為“UNIPROT ACCESSION”、“List Type”為“Gene List”，選擇“Functional Annotation Tool”，獲得KEGG通路富集分析和GO分類富集分析的結(jié)果，并重點(diǎn)關(guān)注GO分類富集分析結(jié)果中的分子功能（Molecular function，MF）部分。選取P＜0.001[17]的信號(hào)通路和分子功能，并根據(jù)富集基因數(shù)由多到少排序，選取排名前20位的信號(hào)通路和分子功能，結(jié)合現(xiàn)有文獻(xiàn)，從中篩選三七治療CHD的重要信號(hào)通路和分子功能并進(jìn)行分析。

1.6 重要信號(hào)通路的“有效成分-作用靶標(biāo)-信號(hào)通路”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

通過DAVID數(shù)據(jù)庫，在篩選重要信號(hào)通路的同時(shí)，找出富集于上述信號(hào)通路中的作用靶標(biāo)基因，并與“1.2.3”項(xiàng)下獲得的三七治療CHD的作用靶標(biāo)基因進(jìn)行對比，篩選出交集靶標(biāo)。將這些交集靶標(biāo)與“1.3”項(xiàng)下獲得的三七治療CHD的有效成分相配對，然后將配對關(guān)系文件導(dǎo)入Cytoscape 3.6.0軟件，構(gòu)建出重要信號(hào)通路的“有效成分-作用靶標(biāo)-信號(hào)通路”的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖，對圖譜進(jìn)行讀取并分析三七治療CHD的分子機(jī)制。

2 結(jié)果

2.1 三七活性成分的篩選結(jié)果

從TCMSP平臺(tái)上檢索到三七所含的化學(xué)成分有119個(gè)，符合納入條件的活性成分共5個(gè)，分別為豆甾醇（Stigmasterol）、β-谷固醇（Beta-sitosterol）、人參皂苷rh2（Ginsenoside rh2）、槲皮素（Quercetin）、三七皂苷r1（Notoginsenoside r1），詳見表1。

表1 三七活性成分Tab 1 Active components of Panax notoginseng

2.2 三七治療CHD作用靶標(biāo)基因的篩選結(jié)果

在DRAR-CPI服務(wù)器中對三七的5個(gè)活性成分進(jìn)行反向分子對接后，結(jié)果Z-score值小于－0.5的靶標(biāo)有147個(gè)；通過UniProtKB數(shù)據(jù)庫獲得其對應(yīng)的基因和UPID；再將上述靶標(biāo)基因與GeneCards和DisGeNET數(shù)據(jù)庫中的CHD相關(guān)基因比對、取交集后，篩選出三七治療CHD的作用靶標(biāo)基因96個(gè)，詳見表2。

2.3 有效成分-作用靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建結(jié)果

根據(jù)作用靶標(biāo)基因的篩選結(jié)果，從三七的5個(gè)活性成分中篩選出5個(gè)有效成分（見表1），即活性成分均為有效成分。經(jīng)有效成分與作用靶標(biāo)基因配對后繪制出有效成分-作用靶標(biāo)基因網(wǎng)絡(luò)圖（見圖1）。由圖1可見，網(wǎng)絡(luò)中共有101個(gè)節(jié)點(diǎn)，包括5個(gè)有效成分和96個(gè)作用靶標(biāo)基因，其中矩形節(jié)點(diǎn)代表有效成分，圓形節(jié)點(diǎn)代表作用靶標(biāo)基因；另有134條邊線，代表5個(gè)有效成分與96個(gè)靶標(biāo)基因之間存在134種作用關(guān)系，其中槲皮素可與83個(gè)靶標(biāo)基因產(chǎn)生作用。由該網(wǎng)絡(luò)可見，同一作用靶標(biāo)基因可對應(yīng)不同的有效成分，而同一有效成分也可以作用于不同的靶標(biāo)基因，表明三七治療CHD具有多成分、多靶標(biāo)的特點(diǎn)。

表2 三七治療CHD的作用靶標(biāo)基因Tab 2 Target genes of P.notoginseng for CHD

圖1 有效成分-作用靶標(biāo)基因網(wǎng)絡(luò)Fig 1 Effective component-target gene network

2.4 核心靶標(biāo)的篩選結(jié)果

對通過String數(shù)據(jù)庫獲得的作用靶標(biāo)的相互作用網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，繪制出靶標(biāo)的相互作用網(wǎng)絡(luò)圖，結(jié)果見圖2。由圖2可見，該網(wǎng)絡(luò)共包括96個(gè)節(jié)點(diǎn)、1 187條邊線，其中圓形節(jié)點(diǎn)表示作用靶標(biāo)，邊線表示靶標(biāo)之間的相互作用關(guān)系。經(jīng)“Network Analyzer”工具計(jì)算得出各作用靶標(biāo)的連接度，結(jié)果見表3。由表3可見，連接度最高的5個(gè)靶標(biāo)分別為蛋白激酶B（AKT）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、血管內(nèi)皮生長因子A（VEGFA）、c-JUN蛋白（c-JUN）、肝磷脂結(jié)合表皮生長因子（HB-EGF）。因此，本團(tuán)隊(duì)認(rèn)為，上述5個(gè)靶標(biāo)在三七治療CHD中發(fā)揮了重要作用，為潛在核心靶標(biāo)。結(jié)合圖2亦可看出，上述5個(gè)作用靶標(biāo)可影響多個(gè)靶標(biāo)，進(jìn)一步證實(shí)了三七治療CHD不僅是通過作用于多個(gè)靶標(biāo)而發(fā)揮多種效果，還通過靶標(biāo)之間的相互作用產(chǎn)生了復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)效果。

圖2 作用靶標(biāo)的相互作用網(wǎng)絡(luò)Fig 2 Target interaction network

將5個(gè)潛在核心靶標(biāo)與三七的5個(gè)有效成分進(jìn)行分子對接驗(yàn)證后，結(jié)果在25種可能的對接關(guān)系中，有4種對接關(guān)系的對接評分＞7.0，占16%；有9種對接關(guān)系的對接評分在7.0～5.0之間，占36%；有9種對接關(guān)系的對接評分在5.0～4.25之間，占36%；有3種對接關(guān)系的對接評分＜4.25，占12%。由此可見，5個(gè)潛在核心靶標(biāo)與三七的有效成分結(jié)合活性高，兩者之間具有較強(qiáng)的結(jié)合能力。本團(tuán)隊(duì)認(rèn)為，該5個(gè)靶標(biāo)在實(shí)際情況中確實(shí)發(fā)揮了較大的作用，因此確定為三七治療CHD的核心靶標(biāo)。

2.5 重要信號(hào)通路和分子功能的篩選結(jié)果

經(jīng)KEGG通路富集分析，符合篩選條件的信號(hào)通路有20條，詳見表4；經(jīng)GO分類富集分析，符合篩選條件的分子功能有20個(gè)，詳見表5。結(jié)合已有文獻(xiàn)及相關(guān)研究，本團(tuán)隊(duì)認(rèn)為，在三七治療CHD中發(fā)揮重要作用的通路有磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信號(hào)通路、低氧誘導(dǎo)因子1（HIF-1）信號(hào)通路、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路；作用較大的分子功能是蛋白結(jié)合（Protein binding）。

2.6 有效成分-作用靶標(biāo)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建結(jié)果

基于重要信號(hào)通路的篩選結(jié)果，構(gòu)建出有效成分-作用靶標(biāo)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)圖，詳見圖3。由圖3可見，該網(wǎng)絡(luò)共有49個(gè)節(jié)點(diǎn)，其中三角形節(jié)點(diǎn)為有效成分，圓形節(jié)點(diǎn)為作用靶標(biāo)基因，六邊形節(jié)點(diǎn)為重要信號(hào)通路。由該網(wǎng)絡(luò)圖可見，三七治療CHD的機(jī)制主要是由5個(gè)有效成分作用于41個(gè)作用靶標(biāo)，從而調(diào)控HIF-1、MAPK、PI3K/AKT信號(hào)通路，發(fā)揮抗炎、保護(hù)缺血損傷、減少動(dòng)脈粥樣硬化的作用。

表3 作用靶標(biāo)的連接度Tab 3 Target connectivity

表4 作用靶標(biāo)的KEGG通路富集分析結(jié)果Tab 4 Analysis results of KEGG pathway enrichment of target

表5 作用靶標(biāo)的分子功能GO分類富集分析結(jié)果Tab 5 Analysis results of GO pathway enrichment for molecular function of target

圖3 有效成分-作用靶標(biāo)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)Fig 3 Effective component-target-signaling pathway network

3 討論

中藥三七，其味甘、微苦，入足厥陰肝經(jīng)，具有和營止血、通脈行瘀的功效，可用于各種血瘀證的治療[18]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，三七可有效治療動(dòng)脈粥樣硬化，具有抗粥樣硬化斑塊形成、抗氧化、抗炎的作用，可抑制IL-1β、IL-6、腫瘤壞死因子α（TNF-α）等炎癥因子的表達(dá)[19]。

由本研究獲得的有效成分-作用靶標(biāo)基因網(wǎng)絡(luò)圖可知，三七治療CHD的有效成分分別為豆甾醇、β-谷固醇、人參皂苷rh2、槲皮素和三七皂苷r1。這5個(gè)有效成分可作用于96個(gè)作用靶標(biāo)基因從而產(chǎn)生對CHD的治療效果。其中，槲皮素可作用于83個(gè)靶標(biāo)，可能在治療中發(fā)揮了最廣泛、最重要的作用。既有研究亦證明了槲皮素對于心血管疾病的治療確實(shí)發(fā)揮了積極的作用：其可減少肥大心肌細(xì)胞中的蛋白濃度，減輕心肌肥大程度；可提高心肌細(xì)胞ATP水平和線粒體膜電位，降低活性氧簇（ROS）含量，從而改善心肌細(xì)胞線粒體代謝，改善心肌細(xì)胞能量代謝紊亂和凋亡，對于心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用[20]。從本研究獲得的有效成分-作用靶標(biāo)基因網(wǎng)絡(luò)圖可知，三七可通過多成分作用于多靶標(biāo)來治療CHD。

由本研究獲得的作用靶標(biāo)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖可知，三七治療CHD的各作用靶標(biāo)之間存在復(fù)雜的相互影響，這表明其作用機(jī)制復(fù)雜多樣，不僅是某個(gè)成分作用于某個(gè)靶標(biāo)產(chǎn)生的，還有靶標(biāo)之間的相互影響。分子對接結(jié)果證實(shí)，核心靶標(biāo)可與有效成分緊密結(jié)合，由此說明本研究對于核心靶標(biāo)的預(yù)測與實(shí)際情況吻合度較高。結(jié)合相互作用網(wǎng)絡(luò)圖與分子對接結(jié)果，本研究團(tuán)隊(duì)認(rèn)為，AKT、IL6、VEGFA、c-JUN、HB-EGF為核心靶標(biāo)，可對多個(gè)其他靶標(biāo)產(chǎn)生影響，可發(fā)揮多方面的、綜合的治療效果。這一推論也符合既有研究成果。AKT是PI3K通路中的一個(gè)重要蛋白，可調(diào)控細(xì)胞凋亡、增殖、抗氧化等多種反應(yīng)[21]。韓軍等[22]研究發(fā)現(xiàn)，金絲桃苷可使AKT磷酸化、激活，促使TNF-α和IL-6活性降低，減輕炎癥反應(yīng)，保護(hù)缺血再灌注損傷心肌。所以，本研究團(tuán)隊(duì)認(rèn)為三七也可起到活化AKT、抑制炎癥反應(yīng)的作用。IL-6又被稱為前炎癥因子，可調(diào)控機(jī)體炎癥發(fā)生，促進(jìn)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化[23]。Scheller J等[24]研究發(fā)現(xiàn)，IL-6水平與冠狀動(dòng)脈嚴(yán)重病變的發(fā)生率呈正相關(guān)。郭旗等[25]也通過研究發(fā)現(xiàn)，隨著CHD臨床癥狀的加重，IL-6水平在依次遞增。因此，本研究團(tuán)隊(duì)推測三七是通過抑制IL-6的生物學(xué)功能從而減輕CHD癥狀并減緩病情的進(jìn)展，從而達(dá)到治療目的。HB-EGF是表皮生長因子家族成員之一，參與多種生理病理過程，如心臟發(fā)育、心肌修復(fù)、心肌肥大等[26]。有研究證實(shí)，在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊組織中，HBEGF在主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中有明顯高表達(dá)，能促進(jìn)動(dòng)脈硬化，加重CHD的臨床癥狀[27]。對此，本研究團(tuán)隊(duì)考慮三七可能是通過降低HB-EGF的表達(dá)來減輕CHD的臨床表現(xiàn)。c-JUN是激活蛋白1（AP-1）的異源二聚體形式，已有研究證實(shí)，c-JUN可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞黏附因子產(chǎn)生、增加趨化因子表達(dá)和泡沫細(xì)胞生成，從而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成與發(fā)展[28]。因此，三七有可能通過抑制c-JUN的表達(dá)來發(fā)揮防治CHD的作用。VEGFA是血管內(nèi)皮因子家族中的一種類型，與不同受體結(jié)合后可以激活不同的下游信號(hào)通路來發(fā)揮作用[29]，然而關(guān)于VEGFA在CHD治療中的作用機(jī)制尚未明確，缺少相關(guān)研究。

從本研究的GO分類富集分析結(jié)果可知，三七可通過影響蛋白結(jié)合的功能以達(dá)到治療CHD的目的。有研究發(fā)現(xiàn)，部分結(jié)合蛋白的大量合成可導(dǎo)致CHD發(fā)生率升高，例如血清視黃醇結(jié)合蛋白4（RBP4）在動(dòng)脈粥樣硬化組中分泌的增多，對CHD的發(fā)生起到一定誘導(dǎo)作用[30]；脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白（AFABP）也是一種可誘發(fā)CHD的結(jié)合蛋白，其在巨噬細(xì)胞中是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，可參與到動(dòng)脈粥樣硬化的過程中，是心血管疾病的炎癥性危險(xiǎn)因素[31]。因此，本研究團(tuán)隊(duì)推測三七可抑制蛋白結(jié)合功能，減少RBP4和AFABP等結(jié)合蛋白的合成分泌，達(dá)到防治CHD目的。

從本研究KEGG通路富集分析結(jié)果和有效成分-作用靶標(biāo)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)圖可知，三七治療CHD主要是通過調(diào)控PI3K/AKT信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路和MAPK信號(hào)通路從而發(fā)揮作用。其中，PI3K/AKT信號(hào)通路在心肌細(xì)胞的凋亡、炎癥反應(yīng)、抗氧化反應(yīng)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[21]。研究表明，當(dāng)心肌細(xì)胞受到損害時(shí)，PI3K/AKT信號(hào)通路可抑制心肌炎癥反應(yīng)的發(fā)生，限制內(nèi)源性負(fù)反饋調(diào)節(jié)因子和代償機(jī)制的產(chǎn)生，從而減少惡性病變的發(fā)生，保護(hù)受損心肌[32-33]。HIF-1是HIF-1信號(hào)通路中的重要因子，廣泛存在于多細(xì)胞動(dòng)物體內(nèi)，在低氧狀態(tài)下，機(jī)體可通過調(diào)節(jié)HIF-1信號(hào)通路來上調(diào)HIF-1的表達(dá)，從而維持內(nèi)環(huán)境的氧穩(wěn)態(tài)[34]。目前越來越多的研究致力于利用HIF-1α來調(diào)控多種血管生成因子的表達(dá)，由此對缺血缺氧的心肌組織進(jìn)行基因治療，達(dá)到促進(jìn)新生血管的生成、改變靶組織代謝情況從而減輕心肌缺血損傷的目的[35]。p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）是MAPK通路中的重要下游蛋白，作為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)酶，在心肌缺血再灌注損傷信號(hào)傳導(dǎo)通路中發(fā)揮了重要作用[36]。張成哲等[37]研究發(fā)現(xiàn)，脾虛型CHD模型動(dòng)物的p38 MAPK蛋白表達(dá)明顯升高，猜測其可能通過激活核轉(zhuǎn)錄因子κB（NF-κB），進(jìn)而誘導(dǎo)IL-6、TNF-α的釋放，參與動(dòng)脈粥樣硬化的形成，導(dǎo)致CHD的發(fā)生。

綜上所述，三七治療CHD的過程涉及多個(gè)活性成分、作用靶標(biāo)及通路，這與中醫(yī)藥治療疾病“多成分、多靶標(biāo)、多通路”的作用特點(diǎn)相符合。本研究所得結(jié)論大部分與現(xiàn)有研究報(bào)道相一致，但也有部分結(jié)論并無足夠的既有相關(guān)研究支持，這可能是對數(shù)據(jù)進(jìn)行多次交互分析產(chǎn)生的誤差，但從另一個(gè)角度看也可為研究者提供該領(lǐng)域新的研究切入點(diǎn)。本文僅從理論層面研究了三七治療CHD的作用機(jī)制，實(shí)際應(yīng)用中還需要更多的臨床試驗(yàn)和相關(guān)細(xì)胞、分子實(shí)驗(yàn)等對本結(jié)論進(jìn)行驗(yàn)證。