大鼠麻醉后經(jīng)腹主動脈連續(xù)采血的白細胞數(shù)值變化

沈鏈鏈 鐘義紅 徐 彬 靳蘇香 王玉邦

(南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院,江蘇省醫(yī)藥農(nóng)藥獸藥安全性評價與研究中心,江蘇南京 211166)

血細胞分析儀是對血液中的白細胞、紅細胞、血小板等進行分類計數(shù)，同時可以得到血紅蛋白濃度，紅細胞壓積等與血液有關(guān)的數(shù)據(jù)，能有效的幫助篩查異常樣本，提供可靠的診斷依據(jù)。對于實驗?zāi)┢诘膭游锒裕ǔ游锫樽砗筮B續(xù)采集幾份血樣做不同的分析，如血細胞分析、生化分析或血凝分析等。而目前暫無研究證明先采的血標本與后采的血標本在血常規(guī)指標上有無差異。本實驗用雌雄大鼠各10只，每只大鼠用水合氯醛麻醉后，經(jīng)腹主動脈采血，用EDTA-抗凝管連續(xù)收集5份血液標本用于血液分析，對比血常規(guī)的各項指標有無差異。

1 材料和方法

1.1 實驗動物及飼養(yǎng)

SPF級健康離乳SD大鼠購自上海西普爾-碧凱實驗動物有限公司，飼養(yǎng)于屏障系統(tǒng)，溫度20-26℃，相對濕度40%-70%，飼料購自江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司，自由飲水和飲食。

1.2 儀器

Advia2120i全自動血液分析儀購自西門子。

1.3 材料

EDTA-真空抗凝管購自江蘇康健醫(yī)療用品有限公司。

1.4 方法

大鼠正常飼養(yǎng)30d后，隔夜禁食。10%水合氯醛麻醉，經(jīng)腹主動脈用采血針采血收集至真空采血管，收集血液1ml 左右立即取新的真空采血管收集血液，共連續(xù)采血5管。

全自動血液分析儀檢測：用西門子advia 2120i進行血液學(xué)分析，種屬選擇大鼠，自動進樣模式檢測。手工計數(shù)方法：參考全國臨床檢驗操作規(guī)程（第3版）[1]完成。取小試管一支，加入白細胞稀釋液0.38ml（白細胞稀釋液：冰乙酸2ml，蒸餾水98ml，10 g/L 亞甲藍溶液3滴，混勻后過濾），用移液器吸取血液20μl，擦去沾的血，將血液打入白細胞稀釋液混勻，待紅細胞完全破壞，液體變?yōu)樽睾稚?，再次混勻充池，靜置3分鐘后，待白細胞下沉。用低倍鏡計數(shù)四角四個大方格內(nèi)的細胞數(shù)，壓線細胞按數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的原則進行計數(shù)，白細胞數(shù)/l =（N/4）*10*20*106=（N/20）*109。

用SPSS軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，后一份血標本的均數(shù)與前一份血標本的均數(shù)用配對T檢驗進行統(tǒng)計學(xué)比較。

2 結(jié)果

2.1 儀器檢測白細胞數(shù)值

雌、雄大鼠各10只，每只大鼠采5份血液標本，共100個數(shù)據(jù)。隨著采血順序的延后，白細胞的數(shù)值呈下降趨勢。紅細胞、血紅蛋白、血小板等其它指標均未觀察到顯著差異。除了2例雌性大鼠，1例雄性大鼠的第4管血樣的白細胞數(shù)小于第5管，其余的數(shù)據(jù)均呈現(xiàn)出隨著采血次序的延后，白細胞呈下降趨勢。各采血順序的血樣的均值和標準差見表1。

表1 儀器檢測白細胞值（均值±標準差）

2.2 手工計數(shù)白細胞數(shù)值

為了進一步驗證該數(shù)據(jù)的可靠性，又進一步進行手工計數(shù)（手工計數(shù)只計數(shù)了白細胞總數(shù)，未進行分類計算百分比）。除了1例雌性大鼠第4管血樣的白細胞數(shù)小于第5管，1例雌性大鼠第3管血樣的白細胞數(shù)小于第4管，3例雄性大鼠第4管血樣的白細胞數(shù)小于第5管，其余的數(shù)據(jù)均呈現(xiàn)出隨著采血次序的延后，白細胞呈下降趨勢。各采血順序的血樣的均值和標準差見表2。

表2 手工計數(shù)白細胞值（均值±標準差）

2.3 根據(jù)儀器檢測白細胞值計算每管血相對于上一管血的變化率

根據(jù)儀器自動分析的白細胞值，按公式計算每管血樣相對于上一管血的白細胞值的變化百分比，結(jié)果見表3。

表3 由儀器檢測的白細胞值計算的變化率

以此類推。

2.4 根據(jù)手工計數(shù)白細胞值計算每管血相對于上一管血的變化率

根據(jù)手工計數(shù)的白細胞值，按公式計算每管血樣相對于上一管血的白細胞值的變化百分比，結(jié)果見表4。

表4 由手工計數(shù)的白細胞值計算的變化率

3 討論

本次研究發(fā)現(xiàn)，隨著采血順序的延后，白細胞的數(shù)值呈下降趨勢。儀器計數(shù)顯示，這種下降主要由于中性粒細胞和淋巴細胞的數(shù)值下降引起，這兩者相加約占白細胞總數(shù)的95%以上。其余的單核細胞，嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞由于絕對值和百分比都相對較小，未觀察到明顯的變化。

本次研究中也出現(xiàn)了幾例前一管血標本的白細胞數(shù)值小于后一管的現(xiàn)象，但都是順序靠后的血標本（如第3管血相對于第4管血，第4管血相對于第5管血），造成這種現(xiàn)象可能有如下原因：1，靠后的血標本采血過程相對較慢，血液流速降低，可能會產(chǎn)生一些較小的血凝塊，影響檢測的準確性。2，靠后的血標本本身的白細胞數(shù)值已經(jīng)很低，較小的隨機誤差（儀器檢測或者手工檢測）即可產(chǎn)生影響。因此這些結(jié)果不足以影響本次研究的結(jié)論。

筆者推測白細胞的這種下降趨勢可能與失血造成的體內(nèi)環(huán)境的改變有關(guān)。王君等發(fā)現(xiàn)失血易引起血漿IL-6、IL-8、TNF-α和NOS水平升高[2]，說明急性失血時體內(nèi)環(huán)境發(fā)生急劇變化。另外，不同的血液來源（動脈血、靜脈血、末梢血等）的血液成分也有很大的差別。劉帥[3]等研究發(fā)現(xiàn)大鼠斷尾采血和眼內(nèi)眥采血的白細胞極顯著高于腹主動脈采血的值。劉斌[4]等發(fā)現(xiàn)大鼠尾靜脈和眼眶靜脈的白細胞數(shù)值高于腹主動脈。這說明不同部位所采集到的血液標本所檢測到白細胞數(shù)值可能有很大的差異。本實驗中，隨著總血量的減少，采取到的血液的來源也在發(fā)生的變化，這是否是產(chǎn)生白細胞數(shù)值差異的原因值得進一步研究。

本研究結(jié)果顯示，大鼠在麻醉狀態(tài)下經(jīng)腹主動脈連續(xù)采血時，白細胞數(shù)值差異顯著，因此動物實驗需要進行動脈連續(xù)采血做不同的分析時，如同時采集多管血液分別做血液分析，血生化檢查，凝血指標檢查等，需要按照固定的順序采血（如第一管血做血液分析，第二管血做生化分析，第三管血做血凝分析，并且對于體重相近的動物而言，血液分析的采血量也應(yīng)大致相同，以避免誤差。