霍秀龍 韋顯凱

（1.平果縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西平果 531499；2.廣西動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西南寧 530001）

作為一種具有典型傳染性、傳播速度快等特征的疾病，禽流感主要與A型流感病毒感染有關(guān)。這種疾病傳播速度快、死亡率高?；谶@種疾病的危害，做好禽流感的預(yù)防與控制具有重要意義。目前養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)主要通過(guò)疫苗免疫的方式，抑制禽流感的出現(xiàn)與傳播。禽流感病毒包含多種血清型。其中的H5亞型禽流感可誘發(fā)高致病性禽流感，基于這一血清型的危害，分析H5亞型高致病性禽流感的免疫抗體檢測(cè)具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。

1 材料及方法

1.1 材料準(zhǔn)備

經(jīng)養(yǎng)殖場(chǎng)和農(nóng)村散戶(hù)，采集免疫后1個(gè)月的雞血液、鴨血液樣品作為研究材料。2016年共采集雞血樣本580份，鴨血樣本410份；2017年共采集雞血液樣品778份、鴨血液樣品340份。2018年共采集雞血液樣品1495份、鴨血液樣品357份。

1.2 檢測(cè)方法

（1）血液樣品處理。按照4000r/min速度，以離心機(jī)持續(xù)處理血液樣品5min，取血清置入離心管內(nèi)，置于-20℃冰箱內(nèi)保存待檢。為避免血清樣本質(zhì)量變化而影響監(jiān)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，盡量于采集標(biāo)本后較短時(shí)間內(nèi)送檢。（2）免疫抗體檢測(cè)。抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清均使用 H5亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原（廠家：哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司）。檢測(cè)方法選用血凝抑制試驗(yàn)方法。檢測(cè)流程嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)完成，以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。（3）結(jié)果判定。試驗(yàn)成立條件：當(dāng)陰性對(duì)照孔血清滴度≤2log2時(shí)，陽(yáng)性對(duì)照孔血清誤差在1個(gè)滴度以下時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果有效。將完全一致4HAU抗原血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度，HI價(jià)≤3log2結(jié)果為陰性，HI價(jià)=4 log2為可疑，需重復(fù)試驗(yàn)；HI價(jià)≥5 log2為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1 不同年份的檢測(cè)結(jié)果

本研究所有免疫抗體檢測(cè)試驗(yàn)均有效。2016年、2017年、2018年平果縣雞群、鴨群H5亞型高致病性禽流感免疫抗體檢測(cè)合格率分別為88.48%、90.43%、91.09%，呈逐年升高趨勢(shì)。見(jiàn)表1。

表1 不同年份的檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同禽種的檢測(cè)結(jié)果

平果縣不同禽種H5亞型高致病性禽流感免疫抗體檢測(cè)結(jié)果顯示：雞檢測(cè)合格率92.01%，鴨檢測(cè)合格85.73%，不同禽種的H5亞型高致病性禽流感免疫抗體檢出結(jié)果差異不顯著（p>0.05）。見(jiàn)表2。

表2 2016～2018H5亞型高致病性禽流感不同禽種的檢測(cè)結(jié)果

2.3 不同飼養(yǎng)方式的檢測(cè)結(jié)果

3960份禽類(lèi)血清樣本中，共2435份來(lái)自養(yǎng)殖場(chǎng)，以集中養(yǎng)殖方式養(yǎng)殖；1525份來(lái)自農(nóng)村散戶(hù)，采取散養(yǎng)方法養(yǎng)殖。集中養(yǎng)殖檢測(cè)合格率92.24%，高于散養(yǎng)合格率87.08%，但差異不顯著（p>0.05）。見(jiàn)表3。

表3 2016～2018年H5亞型禽流感不同飼養(yǎng)方式的檢測(cè)結(jié)果

2.4 不同季節(jié)的檢測(cè)結(jié)果

春季雞群、鴨群H5亞型高致病性禽流感病毒免疫抗體檢測(cè)合格率88.11%，低于秋季92.30%，但差異不顯著（p>0.05）。見(jiàn)表4。

表4 H5亞型禽流感不同季節(jié)的檢測(cè)結(jié)果

2.5 不同免疫次數(shù)的檢測(cè)結(jié)果

H5亞型禽流感一免檢測(cè)結(jié)果：合格率為53.48%，低于二免檢測(cè)合格率97.61%，差異顯著（p<0.05）。見(jiàn)表5。

表5 不同免疫次數(shù)的檢測(cè)結(jié)果

3 討論

近年來(lái)，禽流感頻繁發(fā)生使得人們對(duì)禽類(lèi)傳染病控制的關(guān)注度水平持續(xù)升高[1]。從禽流感易發(fā)群體來(lái)看，雞、鴨群中的禽流感問(wèn)題較為明顯[2]。而由于這種疾病的傳播速度較快，一旦發(fā)現(xiàn)，可于較短時(shí)間內(nèi)傳播至較大范圍，導(dǎo)致禽類(lèi)大量死亡，并為人們的身體健康帶來(lái)一定的隱患[3]。因此，做好禽流感的預(yù)防與控制具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。

隨著禽流感危害的不斷暴露，預(yù)防禽流感逐漸成為養(yǎng)殖業(yè)管理的重點(diǎn)之一。從當(dāng)前養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)對(duì)于這類(lèi)疾病所采取的防控手段來(lái)看，其干預(yù)方法主要以疫苗預(yù)防為主。疫苗預(yù)防禽流感的原理為：使用疫苗后，促使禽類(lèi)體內(nèi)形成相應(yīng)禽流感病毒的免疫抗體，進(jìn)而使其能夠自主抵抗禽流感病毒的侵襲，降低禽流感發(fā)病率[4]。自疫苗預(yù)防方法流行以來(lái)，這一方法逐漸于各地農(nóng)村散戶(hù)、養(yǎng)殖場(chǎng)等主體中普及開(kāi)來(lái)。從疫苗預(yù)防方法的應(yīng)用效果來(lái)看，疫苗的使用使得各類(lèi)禽種的禽流感爆發(fā)風(fēng)險(xiǎn)得到了有效的控制。H5亞型作為禽流感病毒的主要血清型之一，其危害較大，原因在于：由普通血清型引發(fā)的禽流感致病性偏低，而由H5亞型禽流感病毒引發(fā)的禽流感具有高致病性特征，當(dāng)雞群或鴨群中的少數(shù)幾只發(fā)病后，可于較短時(shí)間內(nèi)，快速導(dǎo)致其他健康禽種發(fā)病，進(jìn)而為散戶(hù)、養(yǎng)殖場(chǎng)帶來(lái)一定的經(jīng)濟(jì)損失[5]。因此，做好家禽H5亞型禽流感疫苗的免疫對(duì)該病的預(yù)防控制具有重要作用。

本研究將平果縣作為研究區(qū)域，分別于2016年、2017年、2018年采集當(dāng)?shù)夭煌曫B(yǎng)方式的雞群、鴨群血液樣本，制備血清標(biāo)本后，采用血凝抑制試驗(yàn)法測(cè)定雞群、鴨群的疫苗預(yù)防效果。結(jié)果表明：平果縣2016、2017和2018年H5亞型高致病性禽流感病毒免疫抗體檢測(cè)合格率分別為88.48%、90.43%和91.09%，不同年份抗體合格率差異不顯著。上述結(jié)果表明：平果縣2016-2018年的H5亞型禽流感病毒免疫抗體檢測(cè)合格率均超出國(guó)家要求，且呈逐年升高趨勢(shì)。上述數(shù)據(jù)提示：平果縣的禽流感防控工作開(kāi)展得當(dāng)，其動(dòng)物防疫體系建設(shè)完善水平較高。這一狀況為當(dāng)?shù)仉u群、鴨群等禽種的禽流感疫情控制提供了良好的支持。

而不同禽種的H5亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)結(jié)果顯示：雞H5亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)合格率92.01%，高于鴨85.73%，鴨免疫抗體合格率部分樣品偏低的原因可能為：當(dāng)?shù)伉嗮B(yǎng)殖場(chǎng)由農(nóng)戶(hù)個(gè)人建立，其衛(wèi)生管理工作并未能按相關(guān)制度要求完成，免疫工作開(kāi)展不規(guī)范等，導(dǎo)致鴨群的免疫效果受到一定影響。相反，雞養(yǎng)殖場(chǎng)大多由公司+農(nóng)戶(hù)模式組成，其管理依托公司技術(shù)優(yōu)勢(shì)，則更加規(guī)范、有序，其免疫程序嚴(yán)格按照國(guó)家免疫計(jì)劃的要求完成，因此，雞群的整體H5亞型禽流感病毒免疫抗體檢測(cè)合格率水平較高。為了控制鴨群的禽流感發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，抑制H5亞型禽流感病毒的危害，可加強(qiáng)對(duì)鴨養(yǎng)殖場(chǎng)及散戶(hù)等養(yǎng)殖主體的監(jiān)督與管理，要求其嚴(yán)格按照國(guó)家免疫計(jì)劃的要求逐步落實(shí)免疫工作，并做好養(yǎng)殖環(huán)境的衛(wèi)生監(jiān)控，長(zhǎng)期維持干凈、清潔的環(huán)境，以避免H5亞型禽流感病毒帶來(lái)的不良影響。

平果縣不同飼養(yǎng)方式的H5亞型禽流感病毒免疫抗體檢測(cè)結(jié)果顯示：養(yǎng)殖場(chǎng)集中養(yǎng)殖抗體檢測(cè)陽(yáng)性率92.24%，高于農(nóng)戶(hù)散養(yǎng)免疫抗體陽(yáng)性率87.08%，組間差異不顯著。上述結(jié)果提示：養(yǎng)殖場(chǎng)集中養(yǎng)殖模式的H5亞型禽流感病毒防控效果，優(yōu)于農(nóng)村養(yǎng)殖戶(hù)。事實(shí)上，出現(xiàn)上述現(xiàn)象的原因?yàn)椋吼B(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖雞、鴨數(shù)量較多，家禽規(guī)模、密集度方面的優(yōu)勢(shì)，其更加關(guān)注疫情的控制與預(yù)防。在日常養(yǎng)殖管理工作中，養(yǎng)殖場(chǎng)較農(nóng)村散戶(hù)更加擔(dān)憂發(fā)生禽流感，因此，這類(lèi)養(yǎng)殖主體多能夠充分配合國(guó)家免疫計(jì)劃及相關(guān)衛(wèi)生管理工作的要求，積極做好雞、鴨養(yǎng)殖環(huán)境衛(wèi)生狀況的維持，并通過(guò)定期的免疫控制，有效控制雞群、鴨群的H5亞型高致病性禽流感發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

而從平果縣不同季節(jié)的H5亞型禽流感病毒免疫抗體檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，當(dāng)?shù)厝罕姶杭厩萘鞲胁《久庖呖贵w檢測(cè)合格率88.11%，低于秋季92.30%，組間差異不顯著。上述結(jié)果表明：平果縣春季、秋季的H5亞型禽流感病毒防疫工作均達(dá)到相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的要求。而分析不同季節(jié)H5亞型禽流感病毒免疫抗體檢測(cè)合格率水平不同的原因可能為：春季溫差較大，不利于家禽圈舍清潔環(huán)境維持，加之保暖、通風(fēng)等工作容易出現(xiàn)問(wèn)題，導(dǎo)致家禽免疫機(jī)能下降，進(jìn)而增加其發(fā)生禽流感的風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)上述結(jié)果：為了全面控制H5亞型禽流感病毒的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，養(yǎng)殖場(chǎng)、個(gè)體養(yǎng)殖戶(hù)應(yīng)加強(qiáng)春季階段的管理工作，以全面降低H5亞型高致病性禽流感病毒感染風(fēng)險(xiǎn)為目標(biāo)，經(jīng)以下幾種措施，改善雞群、鴨群禽流感的預(yù)防效果：第一，通風(fēng)與保暖優(yōu)化。根據(jù)春季溫度變化，做好圈舍的保暖工作，以防外部溫差過(guò)大影響家禽的免疫力水平，進(jìn)而誘發(fā)禽流感。而在溫度較高的時(shí)段，可適當(dāng)通風(fēng)，維持圈舍內(nèi)的空氣流通，進(jìn)而為雞群、鴨群的健康狀況提供良好的支持。第二，做好圈舍環(huán)境衛(wèi)生控制。圈舍環(huán)境衛(wèi)生環(huán)境與春季階段禽類(lèi)禽流感發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)及免疫效果存在密切關(guān)聯(lián)。為了避免因環(huán)境管理不當(dāng)而影響免疫效果，誘發(fā)大規(guī)模禽流感，養(yǎng)殖場(chǎng)或個(gè)體養(yǎng)殖戶(hù)均需做好圈舍環(huán)境的管理，定期清潔圈舍，保持圈舍的相對(duì)清潔。

平果縣雞群、鴨群不同免疫次數(shù)的H5亞型禽流感病毒免疫抗體檢測(cè)結(jié)果表明：一次免疫后雞群、鴨群免疫抗體檢驗(yàn)合格率53.48%，低于二次免疫后的免疫抗體檢測(cè)合格率97.61%，組間差異顯著（P＜0.05）。但相對(duì)于禽種、季節(jié)等因素而言，不同免疫次數(shù)之間的H5亞型禽流感病毒免疫抗體合格率差異相對(duì)較大。分析出現(xiàn)上述結(jié)果的原因?yàn)椋航?jīng)一次免疫干預(yù)后，部分雞、鴨可能因疫苗使用不合理、未形成免疫應(yīng)答等，而仍伴有一定的禽流感病毒感染風(fēng)險(xiǎn)。而給予雞群、鴨群二次免疫后，疫苗的使用可與第一次免疫時(shí)的免疫應(yīng)答機(jī)制形成優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)作用，全面引發(fā)家禽的免疫應(yīng)答反應(yīng)，使其形成能夠?qū)笻5亞型高致病性病毒的抗體。在這種情況下，雞群、鴨群的禽流感發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)均可得到良好的控制。

根據(jù)上述分析結(jié)果，可認(rèn)為：養(yǎng)殖場(chǎng)、個(gè)體養(yǎng)殖戶(hù)在防控禽流感工作中，應(yīng)嚴(yán)格根據(jù)國(guó)家免疫計(jì)劃的要求，分別于適宜時(shí)段，針對(duì)雞、鴨等家畜進(jìn)行疫苗防疫，以保障其禽流感預(yù)防效果。此外，如有必要，還可通過(guò)定期檢測(cè)免疫抗體的形式，評(píng)估疫苗預(yù)防效果，以便及時(shí)采取有效的預(yù)防干預(yù)措施，降低禽流感及其他傳染性疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，平果縣雞、鴨群的H5亞型高致病性禽流感免疫工作開(kāi)展良好。為了全面降低禽流感的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，各養(yǎng)殖場(chǎng)、個(gè)體養(yǎng)殖戶(hù)還應(yīng)嚴(yán)格落實(shí)免疫程序，不斷完善消毒制度，定期針對(duì)圈舍進(jìn)行消毒清潔；做好飼養(yǎng)密度的調(diào)節(jié)，避免密度過(guò)高增加禽流感或其他疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。此外，在日常養(yǎng)殖管理中，保證日糧營(yíng)養(yǎng)全面、圈舍環(huán)境衛(wèi)生清潔、通風(fēng)防寒保暖等工作達(dá)到管理制度的要求，運(yùn)用良好的飼養(yǎng)管理，能增強(qiáng)豬機(jī)體的抵抗疾病能力，從而保證機(jī)體產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答。