清肺消炎丸對(duì)幼齡小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)研究*

吳佳蓉 ，岳曉月 ，王艷秋 ，付蘇凝 ，崔元璐 ，樊官偉

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，天津 301617；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津市中醫(yī)方證轉(zhuǎn)化研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193）

清肺消炎丸源于漢代醫(yī)圣張仲景所著的《傷寒論》中的“麻杏石甘湯”加減，由麻黃、石膏、地龍、牛蒡子、葶藶子、牛黃、苦杏仁和羚羊角等組成，主治清肺化痰，止咳平喘。臨床上主要用于痰熱阻肺，咳嗽氣喘，吐痰黃稠；上呼吸道感染，急性支氣管炎，慢性支氣管炎急性發(fā)作及肺部感染見(jiàn)上述癥狀者?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示，清肺消炎丸具有抗炎、止咳、平喘、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒等多種藥理作用[1-4]。清肺消炎丸在兒科臨床上應(yīng)用廣泛[5-6]，為進(jìn)一步了解其兒科臨床用藥的安全性，本研究參照經(jīng)典的急性毒性實(shí)驗(yàn)方法[7]，根據(jù)《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[8]，進(jìn)行LD50預(yù)試和最大給藥量實(shí)驗(yàn)[9-11]，觀察幼齡小鼠對(duì)清肺消炎丸的急性毒性反應(yīng)，評(píng)價(jià)其用藥安全性，為清肺消炎丸在兒科臨床的安全應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為健康SPF級(jí)昆明小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量16～18 g，3周齡，購(gòu)于北京維通利華動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心（動(dòng)物合格證編號(hào)：SCXK（京）2016-0011），并飼養(yǎng)于天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。飼養(yǎng)期間，保持自由飲水和進(jìn)食，環(huán)境溫度為（24±1）℃，濕度為55%±5%，每只動(dòng)物僅使用1次。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)遵循美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院（NIH）指導(dǎo)原則和天津中醫(yī)藥大學(xué)的倫理委員會(huì)指導(dǎo)原則。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 清肺消炎丸（批號(hào)：T013），由天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司達(dá)仁堂制藥廠提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 萬(wàn)分之一精密分析天平，AL204，Mettler-Toledo儀器（上海）有限公司。渦旋振蕩器，QL-901，海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司。全自動(dòng)封閉脫水機(jī)，ASP300S，德國(guó)Leica儀器公司。生物組織包埋機(jī)，BMJ-1，天津航空機(jī)電公司。石蠟切片機(jī)，RM2135，德國(guó)Leica儀器公司。全自動(dòng)生化分析儀，日本Hitachi公司。

2 方法

參照經(jīng)典的急性毒性[5]（半數(shù)致死量LD50、最大給藥量）實(shí)驗(yàn)方法，進(jìn)行清肺消炎丸的幼齡小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)研究。

2.1 藥液的配制 取清肺消炎丸適量，用研缽研磨后，稱取一定量的清肺消炎丸，用生理鹽水配制成濃稠混懸液，并稀釋成以灌胃針測(cè)試吸取較為順暢的最大藥物濃度為600mg/mL。

2.2 小鼠LD50預(yù)試 選取健康的SPF級(jí)幼齡昆明小鼠40只，隨機(jī)分為5組，每組8只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。經(jīng)預(yù)試清肺消炎丸以灌胃針吸取較為順暢的最大藥物濃度為600mg/mL，給藥劑量按等比級(jí)數(shù)1∶0.75設(shè)計(jì)，組別分別為空白對(duì)照組、10.125 g/kg、13.5 g/kg、18 g/kg和24 g/kg清肺消炎丸給藥組，適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。灌胃前1 d及灌胃當(dāng)天稱質(zhì)量，灌胃前12 h禁食，自由飲水，各給藥組小鼠以能夠接受的最大體積給藥（0.8mL/20 g），分別灌胃給予 10.125 g/kg、13.5 g/kg、18 g/kg 和 24 g/kg 清肺消炎丸，空白對(duì)照組灌胃給予相同體積的生理鹽水，灌胃給藥2次，間隔8 h。最后1次給藥后2 h恢復(fù)進(jìn)食并常規(guī)喂養(yǎng)7 d，于第7天處死小鼠，觀察腦、心、肝、脾、肺、腎等重要臟器有無(wú)異常。

2.3 小鼠最大給藥量實(shí)驗(yàn) 選擇LD50預(yù)試中的最大給藥濃度及最大給藥體積進(jìn)行幼齡小鼠最大給藥量實(shí)驗(yàn)。選取健康的SPF級(jí)幼齡昆明小鼠64只，隨機(jī)分為2個(gè)亞組，分別為清肺消炎丸給藥后7 d（24只）和14天（40只）觀察組。7 d亞組分為兩組，每組12只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)：1）空白對(duì)照組；2）清肺消炎丸給藥組。14 d亞組分為兩組，每組20 只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)：1）空白對(duì)照組；2）清肺消炎丸給藥組。各組小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，灌胃前1 d及灌胃當(dāng)天稱質(zhì)量，灌胃前12 h禁食，自由飲水，以最大給藥濃度（600mg/mL），能夠接受的最大給藥體積（0.8mL/20 g）給藥，各清肺消炎丸給藥組給予清肺消炎丸（24 g/kg），空白對(duì)照組給予相同體積的生理鹽水，灌胃給藥3次，間隔6 h。最后1次給藥后2 h恢復(fù)進(jìn)食并進(jìn)行連續(xù)觀察。

2.4 小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)觀察方法 各組小鼠每次灌胃給藥后，即刻觀察動(dòng)物的毒性反應(yīng)情況。每次給藥0.5、1、2、4 h后觀察各組小鼠的行為活動(dòng)有無(wú)異常，逐日觀察并記錄各小鼠的外觀、行為活動(dòng)、飲水納食、精神狀態(tài)、二便毛色、呼吸及鼻眼口腔等有無(wú)異常分泌物。并于灌胃前1 d、灌胃當(dāng)天、灌胃后第1、3、5、7、9、11、13 天稱取小鼠體質(zhì)量，記錄飼料消耗量和飲水量，灌胃后第7天或14天處死小鼠。處死并解剖小鼠后，肉眼觀察腦、心、肝、脾、肺、腎等重要臟器有無(wú)異常（實(shí)驗(yàn)過(guò)程中因?yàn)l死而處死的小鼠應(yīng)及時(shí)進(jìn)行大體解剖并肉眼觀察各個(gè)重要臟器有無(wú)異常。各項(xiàng)觀察指標(biāo)判定詳見(jiàn)中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[8]）。

各亞組小鼠分別在給藥7 d或14 d后，用異氟烷麻醉，眼球取血，室溫凝血離心，分離血清，并保存于-20℃冰箱，備用。取小鼠腦、心、肝、脾、肺、腎等組織樣本，用生理鹽水沖洗并用濾紙擦干稱質(zhì)量，計(jì)算臟器系數(shù)[臟器系數(shù)=臟器質(zhì)量（mg）/小鼠體質(zhì)量（g）]。

2.5 病理學(xué)分析 為進(jìn)行組織病理學(xué)分析，取小鼠肝、脾、肺、腎組織用10%多聚甲醛固定，進(jìn)行脫水、浸蠟、包埋、切片和HE染色。

2.6 小鼠肝腎功能的檢測(cè) 將保存在-20℃冰箱的血清取出，用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)幼齡小鼠血清中天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血尿素氮（BUN）和血肌酐（SCr）的濃度。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 LD50預(yù)試結(jié)果

3.1.1 清肺消炎丸對(duì)小鼠健康狀態(tài)的影響 每次灌胃給藥后，與空白對(duì)照組小鼠比較，清肺消炎丸給藥組小鼠活動(dòng)行為均無(wú)異常。灌胃2 h后各組小鼠恢復(fù)進(jìn)食，均開(kāi)始正常飲食，并無(wú)顯著差異。實(shí)驗(yàn)觀察期間，受試小鼠均未出現(xiàn)死亡，也未表現(xiàn)出明顯的中毒癥狀，并且觀察期間小鼠毛發(fā)光澤、活動(dòng)自如、進(jìn)食及大小便正常，精神狀態(tài)良好。

3.1.2 清肺消炎丸對(duì)幼齡小鼠體質(zhì)量的影響 對(duì)所有組小鼠的體質(zhì)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果如表1所示，灌胃前各組小鼠的體質(zhì)量差異無(wú)顯著性，不同劑量的清肺消炎丸給藥7 d后，各給藥組小鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)與空白對(duì)照組基本一致，均呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，清肺消炎丸的各給藥組在給藥后7 d內(nèi)，差異均無(wú)顯著性。說(shuō)明不同劑量的清肺消炎丸對(duì)幼齡小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育沒(méi)有影響。

3.1.3 清肺消炎丸對(duì)幼齡小鼠飲食飲水的影響 對(duì)各組小鼠的飼料消耗量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果如表2所示，與空白對(duì)照組進(jìn)行比較，不同劑量的清肺消炎丸給藥7 d后幼齡小鼠各時(shí)間段的飼料消耗量差異均無(wú)顯著性。對(duì)小鼠的飲水量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果如表3所示，與空白對(duì)照組比較，除了10.125 g/kg清肺消炎丸組雄性小鼠給藥1 d后飲水量差異有顯著性（P＜0.05），其他各組的各時(shí)間段的飲水量差異均無(wú)顯著性；各清肺消炎丸雌性小鼠給藥7 d后，與空白對(duì)照組比較差異均無(wú)顯著性，說(shuō)明不同濃度的清肺消炎丸不會(huì)影響幼齡小鼠的飲食飲水。

表1 對(duì)幼齡小鼠體質(zhì)量的影響Tab.1 Effecton bodyweightof youngm iceg

表1 對(duì)幼齡小鼠體質(zhì)量的影響Tab.1 Effecton bodyweightof youngm iceg

組別 給藥前1 d 給藥當(dāng)天 給藥后1 d 給藥后3 d 給藥后5 d 給藥后7 d空白組 26.44±0.98 25.84±0.11 29.86±0.31 33.03±0.19 34.86±0.59 36.10±0.85 24.74±0.25 24.23±0.56 26.39±0.44 27.88±0.90 28.24±0.91 29.17±0.82清肺消炎丸組（10.125 g/kg） 26.79±0.74 26.32±0.26 29.64±0.70 33.26±0.54 35.70±0.50 37.23±0.28 24.28±0.51 23.94±0.46 25.11±0.38 27.06±0.69 27.80±0.51 28.17±0.68清肺消炎丸組（13.5 g/kg） 26.07±1.33 25.55±1.67 30.43±1.57 33.70±2.25 34.11±2.61 35.84±2.08 24.76±1.05 23.55±0.57 26.37±0.77 27.73±1.67 28.54±1.47 29.25±1.64清肺消炎丸組（18 g/kg） 26.67±0.84 26.10±0.99 29.69±1.05 32.86±1.36 34.78±1.52 36.01±1.17 24.78±0.30 23.70±0.58 26.90±0.49 30.45±0.59 30.25±1.41 31.11±1.44清肺消炎丸組（24 g/kg） 26.67±1.10 26.19±0.87 29.62±0.21 32.90±1.24 34.66±1.76 36.11±1.92 25.11±0.37 24.00±0.55 25.96±0.52 27.73±1.26 27.60±0.74 28.93±1.46性別雄性雌性雄性雌性雄性雌性雄性雌性雄性雌性動(dòng)物數(shù)8 8 8 8 8

表2 對(duì)幼齡小鼠飼料消耗量的影響Tab.2 Effecton feed consum ption of youngm iceg/d

表2 對(duì)幼齡小鼠飼料消耗量的影響Tab.2 Effecton feed consum ption of youngm iceg/d

性別 給藥前1 d 給藥后1 d 給藥后3 d 給藥后5 d 給藥后7 d雄性 5.97±1.03 7.26±0.60 7.46±1.00 7.16±0.66 6.37±0.28雌性 5.10±0.17 6.84±0.24 5.90±0.47 7.27±0.62 5.27±0.84雄性 5.76±0.21 7.54±0.17 7.98±0.44 8.23±0.22 6.90±0.28雌性 4.73±0.36 5.80±0.34 4.87±018 5.40±0.40 5.15±0.45雄性 5.91±0.31 7.52±0.34 7.88±0.79 7.71±0.37 6.62±0.41雌性 5.61±0.40 6.70±0.38 6.08±0.90 6.23±0.50 5.49±0.43雄性 6.26±0.28 7.56±0.78 7.39±0.24 7.32±0.51 6.51±0.34雌性 5.46±0.53 6.34±0.44 6.05±0.70 6.68±0.42 5.57±0.79雄性 6.42±0.39 7.17±0.58 6.96±0.21 7.65±0.34 7.21±0.32雌性 5.60±0.18 7.01±0.38 5.95±0.49 6.29±0.18 5.65±0.27組別空白組清肺消炎丸組（10.125 g/kg）清肺消炎丸組（13.5 g/kg）清肺消炎丸組（18 g/kg）清肺消炎丸組（24 g/kg）動(dòng)物數(shù)8 8 8 8 8

表3 對(duì)幼齡小鼠飲水量的影響Tab.3 Effectonwater intakeof youngm icemL/d

表3 對(duì)幼齡小鼠飲水量的影響Tab.3 Effectonwater intakeof youngm icemL/d

注：給藥后1 d與空白組比較，*P＜0.05。

性別 給藥前1 d 給藥后1 d 給藥后3 d 給藥后5 d 給藥后7 d雄性 9.37±0.68 9.34±0.30 9.41±0.66 8.72±0.76 8.58±0.79雌性 8.71±0.73 8.84±0.36 9.02±0.67 8.33±0.72 8.34±0.72雄性 9.30±0.33 8.16±0.17* 8.99±0.35 9.33±0.51 8.12±0.37雌性 9.34±0.85 8.77±0.85 8.11±0.75 7.01±0.57 7.58±0.60雄性 9.10±0.70 8.63±0.89 8.82±0.70 8.58±0.18 8.49±0.18雌性 9.17±1.23 8.48±0.03 8.52±0.28 7.59±0.27 8.40±1.24雄性 8.81±0.81 9.13±0.70 9.17±0.38 7.69±0.28 7.69±0.29雌性 9.43±0.60 7.80±0.48 8.55±1.06 7.18±0.37 8.04±0.45雄性 9.14±0.10 8.40±0.77 8.35±0.33 7.37±0.13 8.06±0.11雌性 9.25±0.62 8.15±0.43 7.25±0.64 8.05±0.25 8.12±0.23組別空白組清肺消炎丸組（10.125 g/kg）清肺消炎丸組（13.5 g/kg）清肺消炎丸組（18 g/kg）清肺消炎丸組（24 g/kg）動(dòng)物數(shù)8 8 8 8 8

3.2 最大給藥量實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.2.1 清肺消炎丸對(duì)幼齡小鼠健康狀態(tài)的影響每次灌胃給藥后，與空白對(duì)照組小鼠比較，清肺消炎丸給藥組小鼠活動(dòng)行為均無(wú)異常。灌胃2 h后各組小鼠恢復(fù)進(jìn)食，均開(kāi)始正常飲食，并無(wú)顯著差異。實(shí)驗(yàn)觀察14 d期間，受試小鼠均未出現(xiàn)死亡，也未表現(xiàn)出明顯的中毒癥狀，并且觀察期間小鼠毛發(fā)光澤、活動(dòng)自如、進(jìn)食及大小便正常，精神狀態(tài)良好。

3.2.2 清肺消炎丸對(duì)幼齡小鼠體質(zhì)量的影響 由于實(shí)驗(yàn)小鼠為幼齡小鼠，正處于生長(zhǎng)發(fā)育階段，因此小鼠的體質(zhì)量是評(píng)價(jià)清肺消炎丸毒性的一個(gè)指標(biāo)。對(duì)各組小鼠的體質(zhì)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4所示，清肺消炎丸給藥后14 d內(nèi)，給藥組小鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)與空白對(duì)照組基本一致，均呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，清肺消炎丸組雄性小鼠除了灌胃后第1天和第3天差異有顯著性（P＜0.05），其他時(shí)段差異均無(wú)顯著性；清肺消炎丸組雌性小鼠在給藥后14 d內(nèi)，與空白對(duì)照組比較差異均無(wú)顯著性，說(shuō)明在小鼠的急性毒性最大給藥量實(shí)驗(yàn)中，清肺消炎丸不會(huì)影響幼齡小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育。

3.2.3 清肺消炎丸對(duì)幼齡小鼠臟器系數(shù)的影響（7、14 d） 正常小鼠各臟器與體質(zhì)量的比值比較恒定，小鼠中毒后，受損臟器質(zhì)量會(huì)發(fā)生改變，臟器系數(shù)也會(huì)隨之發(fā)生變化，臟器系數(shù)增大，表示臟器可能發(fā)生了充血、水腫或增生肥大等；臟器系數(shù)減小，表示臟器可能發(fā)生了萎縮及其他退行性改變，因此臟器系數(shù)是毒理實(shí)驗(yàn)中常用的指標(biāo)[12-14]。表5、表6為清肺消炎丸給藥7 d和14 d后對(duì)幼齡小鼠臟器系數(shù)的影響。結(jié)果表明，清肺消炎丸給藥7 d或14 d后，與空白對(duì)照組比較，各給藥組小鼠的臟器系數(shù)（肝、腎、腦、心、肺、脾）差異均無(wú)顯著性。

3.2.4 清肺消炎丸對(duì)幼齡小鼠肝功能的影響（7、14 d） AST、ALT、ALP和A/G是臨床上常用的評(píng)價(jià)肝功能的指標(biāo)[15]，ALT和AST主要分布在肝細(xì)胞內(nèi)，如果肝臟受損，肝細(xì)胞中的轉(zhuǎn)氨酶便進(jìn)入血液，使血液中的ALT和AST水平升高，因此AST和ALT是評(píng)判肝損傷的重要指標(biāo)[16-17]。因此本實(shí)驗(yàn)通過(guò)定期檢測(cè)小鼠血清中AST、ALT、ALP、TP和ALB等指標(biāo)評(píng)價(jià)清肺消炎丸對(duì)幼齡小鼠肝功能的影響。如圖1所示，清肺消炎丸給藥7 d或14 d后，雄性小鼠血清中的AST、ALT、ALP濃度以及A/G沒(méi)有發(fā)生顯著變化，說(shuō)明在小鼠急性毒性最大給藥量實(shí)驗(yàn)中清肺消炎丸對(duì)雄性小鼠的肝功能無(wú)顯著影響。如圖2所示，清肺消炎丸給藥7 d和14 d后，雌性小鼠血清中的AST、ALT濃度以及A/G沒(méi)有發(fā)生顯著變化，說(shuō)明極高劑量的清肺消炎丸沒(méi)有造成急性肝損傷；清肺消炎丸給藥7 d后，與空白對(duì)照組比較，雌性小鼠的ALP濃度顯著升高，但是給藥14 d后，ALP濃度又恢復(fù)正常，與空白對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性，說(shuō)明給藥后小鼠可能出現(xiàn)一過(guò)性肝功能異常，之后藥物經(jīng)過(guò)肝臟代謝，肝功能恢復(fù)正常。

表4 對(duì)幼齡小鼠體質(zhì)量的影響Tab.4 Influenceon bodyweightof youngm iceg

表4 對(duì)幼齡小鼠體質(zhì)量的影響Tab.4 Influenceon bodyweightof youngm iceg

注：與空白組比較，*P＜0.05。

給藥前1 d 給藥當(dāng)天 給藥后1 d 給藥后3 d 給藥后5 d 給藥后7 d 給藥后9 d給藥后11 d給藥后13 d給藥后14 d 22.74±0.34 20.55±028 24.00±0.25 28.60±0.41 31.72±0.37 33.40±0.34 34.67±0.35 37.28±0.37 38.52±0.53 39.13±0.60 22.67±0.41 20.51±0.29 23.07±0.39 25.90±0.73 28.06±0.82 29.12±0.63 30.60±0.57 30.91±0.67 31.97±0.62 32.63±0.62 22.28±0.25 19.92±0.22 22.86±0.27*27.41±0.40*30.13±0.55 33.15±0.61 35.87±0.64 37.42±0.53 38.20±0.56 38.77±0.82 23.00±0.39 20.29±0.32 22.96±0.45 25.77±0.42 26.82±0.44 27.90±0.52 29.21±0.49 29.89±0.63 30.73±0.77 30.78±0.79性別雄性雌性雄性雌性組別空白組清肺消炎丸動(dòng)物數(shù)8 8 8 8

表5 給藥7 d后對(duì)小鼠臟器系數(shù)的影響Tab.5 Effectof 7 daysafter adm inistration on organ coefficient inm icemg/g

表5 給藥7 d后對(duì)小鼠臟器系數(shù)的影響Tab.5 Effectof 7 daysafter adm inistration on organ coefficient inm icemg/g

肝臟指數(shù) 腎臟指數(shù) 腦指數(shù) 心臟指數(shù) 肺指數(shù) 脾臟指數(shù)57.64±1.33 14.76±0.29 12.51±0.32 6.69±0.38 6.40±0.27 5.17±0.47 50.66±2.65 11.78±0.60 14.84±0.26 5.89±0.37 6.98±0.44 3.66±0.39 49.13±1.38 11.98±0.39 15.65±0.34 6.23±0.34 7.13±0.50 3.45±0.22 58.51±2.86 15.14±0.47 12.62±0.33 5.65±0.25 6.17±0.26 4.29±0.29性別雄性雌性雄性雌性組別空白組清肺消炎丸組動(dòng)物數(shù)6 6 6 6

表6 給藥14 d后對(duì)小鼠臟器系數(shù)的影響Tab.6 Effectof 7 daysafter adm inistration on organ coefficient inm icemg/g

表6 給藥14 d后對(duì)小鼠臟器系數(shù)的影響Tab.6 Effectof 7 daysafter adm inistration on organ coefficient inm icemg/g

肝臟指數(shù) 腎臟指數(shù) 腦指數(shù) 心臟指數(shù) 肺指數(shù) 脾臟指數(shù)56.04±1.10 15.95±0.26 11.21±0.15 5.56±0.16 5.79±0.21 2.72±0.15 49.08±1.19 12.16±0.38 14.42±0.30 5.97±0.16 7.03±0.14 3.73±0.20 49.77±1.15 11.68±0.33 13.67±0.25 5.54±0.16 6.53±0.23 3.24±0.16 55.15±1.00 16.19±0.35 11.32±0.19 6.05±0.17 6.27±0.12 2.92±0.11性別雄性雌性雄性雌性組別空白組清肺消炎丸組動(dòng)物數(shù)10 10 10 10

圖 1 對(duì)雄性小鼠血清 AST（A）、ALT（B）、ALP（C）和 A/G（D）含量的影響Fig.1 Effectof serum AST（A），ALT（B），ALP（C）and A/G（D）inmalem ice

圖 2 對(duì)雌性小鼠血清 AST（A）、ALT（B）、ALP（C）和 A/G（D）含量的影響Fig.2 Effectof serum AST（A），ALT（B），ALP（C）and A/G（D）in femalem ice

3.3.5 清肺消炎丸對(duì)幼齡小鼠腎功能的影響（7、14 d） BUN和SCr是臨床上常用的評(píng)價(jià)腎功能的指標(biāo)[18-19]。因此本實(shí)驗(yàn)通過(guò)定期檢測(cè)小鼠血清中BUN和SCr等指標(biāo)評(píng)價(jià)清肺消炎丸對(duì)小鼠腎功能的影響。如圖3、圖4所示，清肺消炎丸給藥7 d或14 d后，與空白對(duì)照組比較，幼齡小鼠血清中的BUN和SCr濃度均沒(méi)有發(fā)生顯著變化，說(shuō)明在小鼠急性毒性最大給藥量實(shí)驗(yàn)中清肺消炎丸對(duì)幼齡小鼠的腎功能無(wú)顯著影響。

圖3 對(duì)雄性小鼠血清BUN（A）和SCr（B）含量的影響Fig.3 Effectof serum BUN（A）和 SCr（B）inmalem ice

圖4 對(duì)雌性小鼠血清BUN（A）和SCr（B）含量的影響Fig.4 Effectof serum BUN（A）和 SCr（B）in femalem ice

3.2.6 清肺消炎丸對(duì)幼齡小鼠各臟器組織顯微結(jié)構(gòu)的影響（7、14 d） 清肺消炎丸給藥7 d和14 d后，分別處死各組小鼠并解剖，肉眼觀察小鼠的各主要臟器有無(wú)異常。結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，7 d和14 d各給藥組小鼠的肝、腎、腦、心、肺、脾等重要臟器均無(wú)異常。

幼齡小鼠肝、腎、肺和脾組織的HE染色顯微照片如圖5所示?？瞻讓?duì)照組和清肺消炎丸組無(wú)顯著差異，各組肝組織細(xì)胞均排列緊密，細(xì)胞形態(tài)良好，肝小葉結(jié)構(gòu)完整；腎組織結(jié)構(gòu)清晰，腎小球正常；肺組織肺泡結(jié)構(gòu)清晰，間隔正常，管壁結(jié)構(gòu)良好；脾組織淋巴細(xì)胞排列緊密，無(wú)淤血和點(diǎn)狀壞死；各組各個(gè)臟器無(wú)明顯炎性細(xì)胞浸出、纖維化和壞死等病理變化。說(shuō)明在小鼠急性毒性最大給藥量實(shí)驗(yàn)中清肺消炎丸對(duì)幼齡小鼠的各臟器無(wú)顯著影響。

4 討論

圖5 幼齡小鼠肝、腎、肺和脾組織切片HE染色照片（×100，左下角為×400）Fig.5 HE staining of liver，kidney，lung and spleen in youngm ice（×100，lower left corner ×400）

清肺消炎丸是在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，按照“君臣佐使”的組方原則，選擇適宜的藥味與劑量配伍而成的一種中成藥，是目前兒科臨床的常用藥。從中醫(yī)角度來(lái)講，清肺消炎丸主治清肺化痰，止咳平喘，主方為漢代醫(yī)圣張仲景《傷寒論》“麻杏石甘湯”加減，方中麻黃宣肺平喘，為君藥；杏仁、牛蒡子、葶藶子降氣平喘，一升一降，調(diào)暢氣機(jī)；石膏清瀉肺火，地龍化痰平喘，共為臣藥；人工牛黃，羚羊角清熱解毒[20]。小兒純陽(yáng)體質(zhì)，肺脾不足，肝常有余，故容易外感六淫邪氣；加之喂養(yǎng)不當(dāng)，容易形成食積；外感邪氣，郁閉肺氣，日久化熱，肺氣失宣，故而出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽、咳黃白黏痰、喘息、鼻翼煽動(dòng)，即所謂小兒喘嗽，熱盛至極，肝風(fēng)內(nèi)動(dòng)，則會(huì)抽搐。清肺消炎丸解小兒肺氣郁閉，加地龍化痰平喘，葶藶子和牛蒡子降肺止咳，牛黃、羚羊角為寒涼之物，歸肝經(jīng)，最善解肝熱動(dòng)風(fēng)，所以清肺消炎丸可用于治療小兒高熱引起的肺炎喘嗽且伴有高熱抽搐等熱盛動(dòng)風(fēng)之癥。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究已經(jīng)顯示，清肺消炎丸具有多種抗炎成分，包括牛蒡子苷、牛蒡子苷元、綠原酸、麻黃堿、膽酸、介子酸等[21-23]。如牛蒡子苷在人體內(nèi)分解為牛蒡子苷元發(fā)揮抗炎作用，而牛蒡子苷元可能是通過(guò)調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答起到抗炎作用；綠原酸是通過(guò)抑制COX-2、NF-κBp65發(fā)揮抗炎作用[24]。研究表明清肺消炎丸可以有效減少枸櫞酸誘發(fā)的豚鼠咳嗽次數(shù)，顯著延長(zhǎng)咳嗽潛伏期；有效緩解乙酰膽堿引起的豚鼠離體氣管平滑肌收縮；有效延長(zhǎng)組胺致喘的豚鼠哮喘潛伏期[25]。此外，清肺消炎丸可以有效緩解肺心病患者的咳嗽、喘息等癥狀，改善患者肺功能，降低并發(fā)癥發(fā)生率且安全性較高，還能提高肺心病患者急性感染后CD4+、CD4+/CD8+比值，具有一定免疫調(diào)節(jié)作用[26-27]。因此，清肺消炎丸具有鎮(zhèn)咳，祛痰，平端，抗炎等多種藥理作用，值得臨床廣泛應(yīng)用。

為了更好地評(píng)價(jià)清肺消炎丸的用藥安全性，本文研究了其對(duì)幼齡小鼠的LD50預(yù)試和最大給藥量實(shí)驗(yàn)。LD50預(yù)試中，受試小鼠均未出現(xiàn)死亡，也未表現(xiàn)出明顯的中毒癥狀，其毒性較小，無(wú)法測(cè)出LD50。而LD50預(yù)試中幼齡小鼠1 d的最高給藥劑量為48 g/kg，相當(dāng)于6～12歲兒童（體質(zhì)量按35 kg計(jì)算，用量為40丸/次，3次/日，5 g/60丸）臨床用藥量的168倍，其毒性反應(yīng)對(duì)其他安全性實(shí)驗(yàn)及臨床的提示意義已不大，故直接進(jìn)行最大給藥量實(shí)驗(yàn)。在最大給藥量實(shí)驗(yàn)中，幼齡小鼠1 d的給藥劑量為72 g/kg，相當(dāng)于6歲至12歲兒童臨床用藥量的252倍，但是清肺消炎丸不會(huì)影響幼齡小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育、肝腎功能以及各臟器的組織形態(tài)學(xué)。本研究表明清肺消炎丸的毒性極低，在兒科應(yīng)用具有較高的臨床安全性。