不同基質對β-受體激動劑回收率的影響

張慧利，張 佳，左英芳，成林林，屈俊成，楊美榮

（焦作市畜產(chǎn)品質量安全監(jiān)測中心，河南焦作 454000）

1 前言

β-受體激動劑是一類人工合成的苯乙胺類物質，能刺激動物體神經(jīng)系統(tǒng)，使之產(chǎn)生興奮從而提高機能狀態(tài)的一類藥物。它可促進動物（如豬、牛、羊等）的生長，且由于胴體組成的重新分區(qū)，能減少脂肪沉積，提高肌肉質量，被大量應用于畜牧生產(chǎn)，以促進家畜生長和改善肉質。但人體食用含有一定量β-受體激動劑的動物性食品會出現(xiàn)肌肉興奮性增強、分解脂肪成游離酸進入血液、內臟橫紋肌和平滑肌興奮性增強等中毒癥狀。因此，準確檢測畜產(chǎn)品中β-受體激動劑顯得尤為重要。

2 試劑、材料與溶劑

除特別注明外，以下試劑均為分析純；水為符合GB/T 6683規(guī)定的一級水。

克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇對照品（純度均大于98.0%）；乙酸乙酯；甲醇（色譜純）；乙腈（色譜純）；甲酸（色譜純）；氨水；碳酸鈉；混合型陽離子交換固相萃取柱（規(guī)格60mg，3ml）；微孔濾頭（孔徑0.22μm）孔徑0.22μm

3 儀器與設備

液相色譜-串聯(lián)質譜儀（配電噴霧離子源，美國Waters公司W(wǎng)aters ACQUTYTMUPLC-Xevo TQ-S）、天平（感量0.01g）、渦旋混合器、振蕩器、組織均漿機、離心機、氮吹儀、固相萃取裝置

4 方法與步驟

4.1 樣品前處理

豬肉、牛肉、羊肉共三組，每組六個平行樣。準確秤取2（±0.02）g樣品于50ml離心管中，加入5ml10%碳酸鈉溶液，10ml乙酸乙酯提取，渦旋振蕩10min，12000r/min離心10min，重復提取一次，合并兩次上清液；向合并的上清液中加入0.1mol/L鹽酸溶液5mL，渦旋混勻，震蕩10min，5000r/min離心5min，重復提取一次，合并兩次水相，備用。

4.2 凈化

使用Oasis MCX 3cc（60mg）柱子，依次用3ml甲醇、水活化，取全部備用液過柱，依次用3ml水、甲醇淋洗，用5%氨化甲醇溶液3ml洗脫。

4.3 濃縮

洗脫液于50℃下氮氣吹干后，殘余物用甲醇-0.1%甲酸水溶液（5±95，V/V）1ml充分溶解后，15000r/min高速離心10min，取上清液過0.22μm濾膜，上機測定。

4.4 色譜條件

儀器：Waters公司UPLC Xevo TQ-S液質聯(lián)用儀；色譜柱：BEH C18（50×2.1mm，1.7μm）；流動相：A相乙腈溶液、B相0.1%甲酸水溶液；流速：0.4ml/min；柱溫：30℃；進樣量：5μl。

4.5 標準品制備與添加

分別稱取鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇約10.0mg，置不同100ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋成濃度為100μg/ml的標準儲備液。分別準確量取鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇儲備液于同一100mL容量瓶中，用甲醇稀釋成濃度為20ng/ml的混合標準中間工作液。準確吸取混合標準中間工作液100μl添加到不同基質的空白樣中。

4.6 方法定量計算

空白添加法單點校正：

5 結果

經(jīng)上機檢測，不同基質對超高效液相色譜-串聯(lián)質譜法測定β-受體激動劑回收率的影響如下：

表1 不同基質對液質方法測定β-受體激動劑回收率的影響

綜上，基質不同，回收率不同?；厥章视纱蟮叫∫来螢樨i肉、牛肉、羊肉。

6 分析

基質效應是指在樣品測試過程中，由于待測物以外其他物質的存在或者其他的物理、化學因素，直接或間接影響待測物響應的現(xiàn)象。樣品中含有的內源性物質、體內藥物的多個代謝產(chǎn)物或其他同類藥物可引起基質效應，如動物組織中蛋白質、脂肪、其他內源性物質等的影響。因豬肉、牛肉、羊肉中蛋白質、脂肪、脂肪、無機鹽等含量不一致，進而影響回收率。消除基質效應，可采用最大限度地去除基質成分，如沉淀蛋白法、液液萃取、固相萃取法；柱切換技術，即將大分子、無機鹽等與待測物分離，排除內源性物質干擾；優(yōu)化色譜質譜條件，因ESI源受基質影響較大，可選擇合適的有機相、加入甲酸等，改善分離增加保留時間減少共流出物，梯度洗脫等；也可采用內標法消除基質效應，提高動物組織中提取β-受體激動劑殘留的回收率，使檢測更準確。