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      miR-200b-3p在潰瘍性結腸炎患者血清中的表達及意義

      2019-09-04 02:55:22
      國際消化病雜志 2019年4期
      關鍵詞:活動期內(nèi)鏡程度

      潰瘍性結腸炎(UC)易復發(fā),若治療后腸黏膜愈合則可降低住院率和手術相關風險[1-2]。目前,臨床常通過評估腸道炎性反應來判斷腸黏膜的愈合狀況,但存在一定的不足。UC活動指數(shù)、Mayo評分及Truelove-Witts分級等臨床評分可反映UC患者的主觀癥狀和總體幸福感,此外,部分緩解期UC患者仍可能存在持續(xù)的黏膜炎性反應[3]。部分血清學標志物反映的是全身性的炎性反應狀態(tài),對腸道炎性反應狀態(tài)的判斷缺乏特異性[4]。腸鏡是判斷UC患者腸道黏膜狀況的金標準[5],但其屬于侵入性檢查,耗時較長且不能實時評估UC患者的黏膜病變情況[6]。

      UC相關黏膜發(fā)育異常(UC-DYS)是UC患者的遠期并發(fā)癥,隨著UC患者的病程延長,UC-DYS的發(fā)病率逐漸升高。目前臨床常用普通白光內(nèi)鏡檢查UC患者的黏膜病變情況,容易忽視多灶性損傷,致使UC-DYS的篩查率較低,隨著UC-DYS患者病程延長易進展為UC相關結直腸癌。微RNA(miRNA)是一類由20~25個核苷酸組成的非編碼RNA,主要負責調(diào)控細胞的增殖、分化、轉移及凋亡等,參與機體多種生理活動[7-8]。近年來有研究顯示,miR-200b-3p在UC-DYS組織中高表達,但并未闡明miR-200b-3p與UC內(nèi)鏡下狀態(tài)及嚴重程度的關系[9]。本研究通過比較UC患者與健康者血清miR-200b-3p的相對表達量,以期闡明miR-200b-3p與UC內(nèi)鏡下狀態(tài)、嚴重程度及UC-DYS的關系。

      1 資料與方法

      1.1 一般資料

      選擇2015年8月至2018年9月監(jiān)利縣人民醫(yī)院收治的92例UC患者(UC組)作為研究對象。根據(jù)《炎癥性腸病診斷與治療的共識意見(2012年·廣州)》[10]進行UC診斷,并經(jīng)內(nèi)鏡及組織病理學檢查確診。納入標準:(1)年齡18~70歲;(2)臨床資料完整;(3)簽署知情同意書。排除標準:(1)合并嚴重感染;(2)合并腫瘤及自身免疫性疾?。?3)嚴重肝、腎功能不全;(4)服用非甾體抗炎藥物。另擇36例同期健康體檢者(對照組)及44例經(jīng)病理活組織檢查確診的UC-DYS患者(UC-DYS組)作為對照。UC組男性48例,女性44例,平均年齡(45.22±9.74)歲;內(nèi)鏡下緩解期患者35例,內(nèi)鏡下活動期患者57例,其中輕、中度患者37例,重度患者20例。對照組男性22例,女性14例,平均年齡(46.07±9.16)歲。UC-DYS組男性25例,女性19例,平均年齡(47.30±10.28)歲;37例(84.09%)低度異型增生,7例(15.91%)高度異型增生。3組受試者在性別(χ2=0.896,P=0.639)、年齡(F=0.680,P=0.508)方面的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。

      1.2 方法

      1.2.1 信息收集 收集受試者的性別、年齡、內(nèi)鏡下狀態(tài)、疾病嚴重程度等信息。

      1.2.2 內(nèi)鏡下活動度分級及潰瘍性結腸炎內(nèi)鏡下嚴重度指數(shù) 采用潰瘍性結腸炎內(nèi)鏡下嚴重度指數(shù)(UCEIS評分)對UC患者受累腸段病變嚴重處進行評分,從血管紋理、出血情況、糜爛和潰瘍這3個方面對受累腸段進行評估。血管紋理評分范圍為0~2分,出血情況為0~3分,糜爛和潰瘍?yōu)?~3分,分數(shù)越高代表越嚴重。內(nèi)鏡下緩解期UC患者的UCEIS評分為0~1分,0分為腸鏡下未見異常,表示黏膜愈合;1分為鏡下炎性細胞浸潤,表示黏膜病變。內(nèi)鏡下活動期UC患者的UCEIS評分為2~8分,其中輕、中度患者的UCEIS評分為2~6分,重度患者的UCEIS評分為7~8分[11]。

      1.2.3 RT-qPCR法檢測血清miR-200b-3p的相對表達量 抽取受試者肘靜脈血10 mL,3 500 r/min離心15 min,提取血清至EP管中,低溫環(huán)境下保存待檢。采用miRNAesy Kit試劑盒(購自英國Qiagen公司)提取總RNA,若OD260/280范圍在1.75~1.95之間,則進行后續(xù)操作。將2 μg總RNA置于逆轉錄試劑盒中合成cDNA。取cDNA進行實時熒光定量PCR反應,反應條件為90 ℃ 15 min預變性;95 ℃ 15 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 20 s,共40個循環(huán)?!鳌鰿t=(Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因)實驗組-(Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因)對照組,采用2-△△Ct表示miR-200b-3p的相對表達量。引物序列見表1。

      表1 引物序列

      1.3 統(tǒng)計學方法

      2 結果

      2.1 3組的血清miR-200b-3p表達

      對照組、UC組和UC-DYS組血清miR-200b-3p的相對表達量分別為1.24±0.40、3.49±1.02和4.80±0.91,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。UC組的血清miR-200b-3p相對表達量高于對照組,但低于UC-DYS組,差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。

      2.2 不同UC內(nèi)鏡下狀態(tài)及嚴重程度的患者的血清miR-200b-3p表達

      內(nèi)鏡下活動期的UC患者血清miR-200b-3p的相對表達量為4.03±0.78,高于內(nèi)鏡下緩解期者(2.60±0.71),差異有統(tǒng)計學意義(t=-8.845,P<0.001)。在內(nèi)鏡下活動期UC患者中,重度患者血清miR-200b-3p的相對表達量為4.73±0.47,高于輕、中度患者(3.65±0.64),差異有統(tǒng)計學意義(t=-6.619,P<0.001)。

      2.3 miR-200b-3p與UCEIS的相關性分析

      UC組患者血清miR-200b-3p的相對表達量與UCEIS呈正相關關系(rs=0.912,P<0.001)。見圖1。

      圖1 血清miR-200b-3p的相對表達量與UCEIS的相關性分析

      2.4 miR-200b-3p診斷UC內(nèi)鏡下狀態(tài)、嚴重程度及UC-DYS的效能

      miR-200b-3p診斷UC內(nèi)鏡下狀態(tài)、嚴重程度及UC-DYS的ROC曲線下面積(AUC)分別為0.911(95%CI:0.834~0.961)、0.914(95%CI:0.809~0.972)和0.824(95%CI:0.750~0.884)。當miR-200b-3p>3.57時診斷UC內(nèi)鏡下狀態(tài)有較高的準確度,其敏感度和特異度分別為77.19%和88.57%。當miR-200b-3p>4.08時診斷活動期UC嚴重程度具有較高的準確度,其敏感度和特異度分別為100.00%和72.97%。當miR-200b-3p>3.81時診斷UC-DYS有較高的準確度,其敏感度和特異度分別為95.45%和58.70%。見圖2和表2。

      圖2miR-200b-3p診斷UC內(nèi)鏡下狀態(tài)、嚴重程度及UC-DYS的ROC曲線AUC內(nèi)鏡下狀態(tài)B活動期UC嚴重程度CUC-DYS

      表2 miR-200b-3p診斷UC內(nèi)鏡下狀態(tài)、嚴重程度及UC-DYS的效能

      3 討論

      miR-200b-3p參與機體多種生理活動,有研究表明其可參與調(diào)節(jié)單核細胞及巨噬細胞的分化[12]。此外,有多項研究表明miR-200b-3p與前列腺癌、結直腸癌、乳腺癌、口腔鱗狀細胞癌及膠質(zhì)瘤等發(fā)生有關[13-17]。miR-200b參與炎癥性腸病(IBD)腸上皮細胞的生長,其在IBD病變的黏膜中表達量降低[18]。miR-200b-3p屬于miR-200b的一員,但有研究表明其在UC-DYS患者的病變黏膜中呈高表達[9]。本研究選取92例UC患者和44例UC-DYS患者作為研究對象,通過分析兩組患者血清miR-200b-3p的表達水平,以期闡明miR-200b-3p與UC發(fā)生、發(fā)展的關系。

      本研究結果顯示,對照組、UC組和UC-DYS組的血清miR-200b-3p相對表達量的差異均有統(tǒng)計學意義。UC組的血清miR-200b-3p相對表達量高于對照組,但低于UC-DYS組。但Lewis等[9]的研究表明,UC患者與UC-DYS患者的血清miR-200b-3p表達量差異無統(tǒng)計學意義,這可能與樣本量、人種及個體差異有關,需進一步研究驗證。此外,本研究比較了內(nèi)鏡下不同狀態(tài)及不同嚴重程度的UC患者血清miR-200b-3p的相對表達量,結果顯示內(nèi)鏡下活動期UC患者的血清miR-200b-3p相對表達量高于內(nèi)鏡下緩解期者;而在內(nèi)鏡下活動期UC患者中,重度患者的血清miR-200b-3p相對表達量高于輕、中度患者。上述結果表明miR-200b-3p與UC發(fā)生、發(fā)展密切相關。

      目前臨床上常用Mayo內(nèi)鏡評分和UCEIS評分評價UC患者的黏膜病變程度,但由于Mayo內(nèi)鏡評分以黏膜脆性為分級標準,容易受到臨床醫(yī)師的主觀影響,致使各醫(yī)師對UC患者的評估結果并不一致[19]。而UCEIS主要從血管紋理、出血情況、糜爛和潰瘍這3個方面評價黏膜病變情況,對黏膜病變程度的評價更為細致、全面[20]。另有研究表明,UCEIS評分在評價UC患者臨床轉歸及遠期預后方面的準確度高于Mayo內(nèi)鏡評分[11]。此外,本研究表明miR-200b-3p評價UC內(nèi)鏡下狀態(tài)、嚴重程度及UC-DYS均有較高的臨床價值。本研究的樣本量偏小,且為單中心研究,可能因樣本量小及個體差異等原因導致研究結果出現(xiàn)偶然性和隨機性。后續(xù)需擴大樣本量,進行多中心研究,同時進行多因素回歸分析以進一步闡明miR-200b-3p與UC內(nèi)鏡下狀態(tài)、嚴重程度及UC-DYS的關系。

      綜上所述,miR-200b-3p與UC的發(fā)生、發(fā)展密切相關。檢測UC患者血清miR-200b-3p的表達量有助于了解其UC內(nèi)鏡下狀態(tài)、嚴重程度及UC-DYS的發(fā)生情況。

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