羅小懷 桂普國 杜一鴻

肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是具有高發(fā)病率惡性腫瘤之一，我國肝癌發(fā)病率的增速是世界平均水平的2倍左右，已成為嚴(yán)重危害我國居民健康的主要問題[1-2]。由于各種因素的影響，肝癌患者確診時(shí)大多數(shù)已經(jīng)屬于中晚期患者，導(dǎo)致預(yù)后比較差[3-4]。肝癌的影像學(xué)檢查有一定的誤差性，病理學(xué)檢查也存在檢查的創(chuàng)傷性、閱片者自身偏倚等不足[5]。近年來，隨著現(xiàn)分子生物學(xué)技術(shù)、現(xiàn)代免疫組織化學(xué)的不斷發(fā)展，通過檢測腫瘤標(biāo)志物與腫瘤細(xì)胞特異抗原等來診斷蛋白水平的變化已成為了可能[6]。甲胎蛋白(alphafetoprorein，AFP)作為肝癌的腫瘤標(biāo)志物具有很好的診斷與評估效果，但因其靈敏度和特異度不高，在臨床上的應(yīng)用具有一定的限制[7-8]。HSP90是熱休克蛋白(heat shock protein,HSP)家族中廣泛存在于原核和真核細(xì)胞質(zhì)中的高度保守的同源二聚體分子伴侶，人HSP90分為HSP90α和HSP90β兩類，HSP90α不僅位于細(xì)胞內(nèi)，也可分泌至細(xì)胞外甚或存在于細(xì)胞表明，與腫瘤高侵襲性及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[9-10]。HSP90α在肝癌組織中過表達(dá)[11]，但HSP90α與肝癌的預(yù)后相關(guān)性及其與其他指標(biāo)的聯(lián)合檢測價(jià)值還有待分析。本研究收集相關(guān)肝癌病例，探討HSP90α聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物水平檢測在肝癌患者預(yù)后評估中的應(yīng)用?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

使用回顧性、總結(jié)研究方法，2014年7月至2017年2月選擇在我院診治的肝癌患者76例作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床、隨訪與病理學(xué)資料完整；在取樣本前都無進(jìn)行藥物或者其他方法治療；無嚴(yán)重心、肝、腎及血液系統(tǒng)等重要臟器疾??；年齡18～85歲；醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)了此次研究標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床、隨訪與病理學(xué)資料存在缺項(xiàng)或者不明確者；患有其他惡性腫瘤患者原發(fā)于肝癌；其他部位轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的肝癌病例；未行手術(shù)或活檢病例。

1.2 免疫組化分析

取所有患者的原發(fā)癌組織標(biāo)本(癌癥組)與癌旁組織標(biāo)本(癌旁組，癌旁標(biāo)本為相應(yīng)的腸管組織，距離癌灶最邊緣2 cm處，病理證實(shí)無腫瘤侵犯)。顯微鏡及病理圖像分析系統(tǒng)(日本Olympus)；手術(shù)轉(zhuǎn)輪切片機(jī)(德國LeicaRM2235)；微量移液器(美國Axg公司)；塑料孵育盒(北京中山金橋生物技術(shù)有限公司)。羊抗人HSP90α、AFP多克隆抗體均為美國Santa Cruz公司產(chǎn)品，SP試劑盒為福建邁新產(chǎn)品。

所有標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定24 h，分別取癌灶組織、癌旁組織，然后裁剪成大小為1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm的組織塊，脫水、透明、浸蠟、包埋、連續(xù)切片(4 μm)，然后進(jìn)行免疫組化染色。

HSP90α與AFP都以細(xì)胞膜或(和)細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽性反應(yīng)，隨機(jī)觀察5個(gè)400倍視野，每個(gè)視野計(jì)算100個(gè)細(xì)胞，無細(xì)胞染色為未表達(dá)，小于10%的腫瘤細(xì)胞染色為弱表達(dá)，10%～50%的細(xì)胞染色為中度表達(dá)，大于50%的細(xì)胞染色為強(qiáng)表達(dá)，中度表達(dá)與強(qiáng)表達(dá)都定義為陽性。

1.3 調(diào)查與隨訪分析

收集兩組的臨床資料信息，進(jìn)一步調(diào)閱肝癌患者的病史，通過查閱住院、門診病歷，或電話隨訪等方式對患者進(jìn)行隨訪，核定診斷并進(jìn)行組織學(xué)病理分型。隨訪至2018年3月，所有患者在隨訪中都積極遵醫(yī)囑進(jìn)行治療，記錄患者的生存與死亡情況。生存時(shí)間定義為從手術(shù)至患者死亡的時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 一般資料情況

在76例患者中，男性40例，女性36例；年齡35～81歲，平均年齡(53.19±11.34)歲；平均體重指數(shù)為(22.51±1.62)kg/m2；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有42例，無34例；分化程度：高分化20例，中分化20例，低分化36例；浸潤深度：<肌層26例，≥肌層50例；所有患者都給予積極的對癥治療，包括手術(shù)治療、化療、靶向治療等。

2.2 HSP90α與AFP陽性率對比

癌癥組的HSP90α與AFP陽性率分別為85.5%和96.1%，癌旁組分別為7.9%和6.6%，對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 不同組織樣本HSP90α與AFP陽性率對比(例，%)

2.3 隨訪情況

隨訪至2018年3月，76例患者中，死亡20例，生存56例，生存率為73.7%，中位生存時(shí)間為(28.33±4.19)個(gè)月。

2.4 HSP90α、AFP與生存情況的相關(guān)性

在76例患者中，HSP90α、AFP陽性患者的生存率均顯著低于陰性患者(P<0.05)。見表2。以隨訪生存率作為因變量，以調(diào)查的內(nèi)容與HSP90α、AFP表達(dá)作為自變量，Cox回歸模型分析顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、HSP90α、AFP陽性為影響肝癌患者預(yù)后生存的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表3。

表2 HSP90α、AFP與肝癌患者生存情況的相關(guān)性(例，%)

表3 影響肝癌預(yù)后生存的危險(xiǎn)因素分析

2.5 評估價(jià)值

HSP90α預(yù)測患者預(yù)后生存的敏感性、特異性為83.3%和76.7%，AFP預(yù)測的敏感性、特異性為66.7%和100.0%，HSP90α聯(lián)合AFP預(yù)測的敏感性、特異性為96.7%和100.0%。

3 討論

肝癌為臨床上比較常見的惡性腫瘤，不過早期癥狀不明顯，發(fā)現(xiàn)病情時(shí)多為癌癥中晚期，使得死亡率一直居高不下[12]。在常規(guī)檢查中，影像學(xué)檢查上傾向于良性腫瘤的表現(xiàn)，細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)多需要石蠟組織病理檢測后才可以確診[13]。目前肝癌發(fā)病機(jī)理尚未完全了解，肝癌的發(fā)生歸因于基因一環(huán)境的相互作用[14]。AFP是目前對肝癌診斷、評估和隨訪最常用的指標(biāo)，但AFP檢出肝癌有很好的敏感性，但是特異性不夠；對于預(yù)后生存的預(yù)測特異性佳，但是敏感性不足。比如AFP水平尤其是在肝癌早期呈現(xiàn)低敏感性，而在肝硬化患者中確可表達(dá)為陽性，因此其在臨床應(yīng)用中存在一定的不足[15]。

HSP是機(jī)體在應(yīng)激狀態(tài)下合成的1組蛋白質(zhì)分子，被稱為分子伴侶或伴侶蛋白，參與細(xì)胞的生長和發(fā)育過程。HSP90α的分子量約為83～90 kD，由732個(gè)氨基酸組成，HSP90α參與PI3K-Akt信號通路和許多其他惡性腫瘤相關(guān)途徑，并與腫瘤轉(zhuǎn)移行為密切相關(guān)[16-17]。本研究顯示癌癥組的HSP90α與AFP陽性率分別為85.5%和96.1%，癌旁組分別為7.9%和6.6%，對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明HSP90α在肝癌中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況。有研究表明用HSP90α抗體抑制HSP90α，可以阻止細(xì)胞的侵襲遷移及癌癥的轉(zhuǎn)移；用HSP90α抑制劑也可有效抑制HSP90α客白的致瘤活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡[18]。

肝癌一旦發(fā)生其他臟器的轉(zhuǎn)移則明顯影響患者預(yù)后。本研究顯示在76例患者中，HSP90α、AFP陽性患者的生存率都顯著低于陰性患者(P<0.05)；Cox回歸模型分析顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、HSP90α、AFP陽性為影響肝癌患者預(yù)后生存的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。HSP90α在多數(shù)腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)量為細(xì)胞的2～10倍，可參與了腫瘤進(jìn)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[19]。有研究顯示HSP90α在胃癌、乳腺癌等腫瘤中高表達(dá)，并與腫瘤分級分期及預(yù)后密切相關(guān)，高表達(dá)的HSP90預(yù)示著腫瘤的預(yù)后不良[20]。

尋找有效、安全的預(yù)測肝癌患者預(yù)后的方法，對于降低肝癌的死亡率意義重大[21]。理想的肝癌標(biāo)志物應(yīng)具有較高的靈敏度與特異度。AFP在我國仍是臨床上非常重要的肝癌診斷指標(biāo)，但是其預(yù)測預(yù)后的價(jià)值還有所不足[22]?，F(xiàn)代研究表明肝癌的發(fā)展是1個(gè)多因素、多步驟的調(diào)控過程所有這些步驟均由生長因子、細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)間的相互作用所調(diào)控[23]。HSP90α與腫瘤高侵襲性及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，許多腫瘤細(xì)胞中HSP90α的表達(dá)升高，且表達(dá)與細(xì)胞多個(gè)部位，具有很好的早期檢測與預(yù)測價(jià)值[24-25]。本研究顯示HSP90α預(yù)測患者預(yù)后生存的敏感性、特異性為83.3%和76.7%，AFP預(yù)測的敏感性、特異性為66.7%和100.0%，HSP90α聯(lián)合AFP預(yù)測的敏感性、特異性為96.7%和100.0%，表明聯(lián)合檢測具有更好的預(yù)測預(yù)后價(jià)值。

總之，HSP90α與AFP在肝癌患者中都呈現(xiàn)高表達(dá)水平，與患者預(yù)后生存顯著相關(guān)，兩者聯(lián)合檢測可有效預(yù)測肝癌患者的預(yù)后生存情況。