段凝　閆明

摘 要：該研究采用盆栽試驗法，以紫花苜蓿（Medicago sativa）為材料，將煤矸石（CG）、粉煤灰（FA）和沙土（SS）按不同質(zhì)量配比設置T1（CG∶FA∶SS=75%∶25%∶0%）、T2（CG∶FA∶SS=60%∶25%∶15%）、T3（CG∶FA∶SS=45%∶25%∶30%）、T4（CG∶FA∶SS=30%∶25%∶45%）四組混合基質(zhì)以模擬，并以T5（CG∶FA∶SS=0%∶0%∶100%）為對照，AM真菌選用摩西斗管囊霉（F.m）和幼套近明球囊霉（C.e），通過單接菌和混合接菌，探索其對紫花苜蓿根系的侵染率、幼苗生長、抗氧化物酶活性和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)變化的影響。結果表明：（1）在五組基質(zhì)上，接種AM真菌顯著提高了紫花苜蓿根系的菌根侵染率和菌根依賴性，且基質(zhì)T4接種F.m+C.e[F.m∶C.e=1∶1（W/W）]的值最大（64.31%和86.24%）。（2）接種AM真菌不同程度提高了紫花苜蓿株高、基徑、葉面積和生物量，且混合接菌的效果優(yōu)于單接菌。（3）基質(zhì)中填加過量煤礦廢棄物抑制了植株根系的生長，接種AM真菌后顯著提高了紫花苜?？偢L、根表面積、根體積，降低了根平均直徑。（4）不同接菌處理的紫花苜蓿葉片POD、SOD、CAT活性以及可溶性糖、可溶性蛋白含量總體表現(xiàn)為F.m+C.e>C.e>F.m>non-AMF，且接種F.m+C.e的增長幅度最大。研究表明煤礦廢棄物復合逆境抑制紫花苜蓿的生長，接種AM真菌顯著提高了幼苗生長、抗氧化物酶活性和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，提高了植物抗逆性能，且以基質(zhì)T4接種F.m+C.e的效果最佳。

關鍵詞： 叢枝菌根真菌（AMF）， 煤礦廢棄物 ， 紫花苜蓿， 生長， 抗氧化系統(tǒng)， 滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)

中圖分類號：Q946

文獻標識碼：A

文章編號：1000-3142（2019）05-0650-11

Effects of AM fungi on growth and physiologicalcharacteristics of Medicago sativain different compositesubstrates in coal mining subsidence areas

DUAN Ning， YAN Ming*

（ School of Life Sciences， Shanxi Normal University， Linfen 041000， Shanxi， China ）

Abstract：To improve the growth and survival race of plants in coal mine waste， potting experiment in greenhouse was carried out to explore the effects of single and mixed inoculation with AM fungi（ Funneliformis mosseae， F.m and Claroideoglomus etunicatum， C.e） on the mycorrhizal colonization rate， seedling growth， antioxidant enzyme activity and osmotic adjustment substances of Medicago sativa in different compound substrates. The compound substrates were formed by mixing coal gangue（CG）， fly ash（FA） and sandy soil（SS） mixed in different proportions T1（CG∶FA∶SS=75%∶25%∶0%）， T2（CG∶FA∶SS=60%∶25%∶15%）， T3（CG∶FA∶SS=45%∶25%∶30%）， T4（CG∶FA∶SS=30%∶25%∶45%） and T5（CG∶FA∶SS=0%∶0%∶100%） was taken as control. The results were as follows： （1） Inoculation of AM fungi significantly increased the mycorrhizal colonization rate and mycorrhizal dependency of M.sativa’s root in five different compound substrates. However， the maximum mycorrhizal colonization rate and mycorrhizal dependency after inoculation of F.m+C.e [F.m∶C.e=1∶1（W/W）]（64.31% and 86.24%） occurred in T4 substrate. （2） Inoculation with AM fungi increased height， stem diameter， leaf area and biomass of M. sativato some degrees， and the effects of mixed inoculation were better than that of single inoculation. （3） Growth of plant roots were inhibited by excessively adding coal mine solid waste. However， inoculation of AM fungi could significantly promote total length， surface area and volume of root， and decreased root average diameter. （4） Comparative effects of different inoculation treatments on POD activity， SOD activity， CAT activity， soluble sugar content and soluble protein content of M. sativaleaves with were F.m + C.e > C.e > F.m>non-AMF， and the optimal effect was showed in inoculated with F.m +C.e. Our results suggested that growth of M. sativa was realistically inhibited in coal mine waste. However， AM fungi significantly enhanced resistance to stress by improved seedling growth， antioxidant enzyme activity， and osmotic adjustment substances， especially the combination of F.m+C.e and compound substrate T4 was the best.

Key words： arbuscular mycorrhizal fungi（AMF）， coal mine waste， Medicago sativa， growth， antioxidant system， osmotic adjustment substance

煤炭開采造成大規(guī)模土地資源破壞，地表塌陷是最主要的表現(xiàn)形式，加劇了礦區(qū)地表水土流失、養(yǎng)分損失、植被受損（楊勤學等，2015），使原有的生態(tài)環(huán)境遭到破壞，加劇了我國日益緊張的人地矛盾。近年來，雖然國內(nèi)外諸多學者在礦區(qū)生態(tài)恢復、礦山廢棄地土壤質(zhì)地改良等方面取得了許多進展，但礦區(qū)復墾植被成活率低、抗逆性差，人工植被覆蓋度仍很低，植被重建的生態(tài)效應不明顯（畢銀麗，2017）。將粉煤灰、煤矸石作為填充基質(zhì)結合叢枝菌根微生物技術的復墾方式已經(jīng)受到廣泛關注。叢枝菌根（arbuscular mycorrhizal， AM）真菌作為自然界較為活躍的一類有機體，大約80%的陸生高等植物均能與其形成特定的“菌根”結構（周寶利等，2015）。大量研究表明，低磷條件下，接種AM真菌有助于促進宿主植物對磷、鉀等礦質(zhì)元素的吸收，提高植物的抗逆性，促進植物生長，改善土壤結構（Cheng et al.， 2012）。AM真菌的侵染能夠增加宿主植物不定根和側(cè)根的數(shù)量，改變植物的根系形態(tài)（畢銀麗等，2017，2014）。AM真菌分泌的球囊霉素相關土壤蛋白能增加土壤有機碳庫，增強土壤團聚體的穩(wěn)定性，對土壤具有改良效應（賀學禮等，2011）。

目前，關于AM真菌對以黑麥草、擰條為宿主植物的煤礦復墾區(qū)土壤結構和質(zhì)量的改良作用（王麗萍等，2012;孫金華等，2017）、AM真菌對以玉米為宿主植物的煤礦塌陷地受損傷植物根系的修復功能（Guo et al.， 2014）以及AM真菌對小麥礦質(zhì)營養(yǎng)的吸收作用（馬放等，2014）和玉米對重金屬的吸收與轉(zhuǎn)移（Radka & Miroslav， 2007）等方面研究眾多，而對于以紫花苜蓿（Medicago sativa）作為礦山植被復墾的先鋒植物研究較少，以及如何合理填充煤礦廢棄物以提高菌根與紫花苜蓿的共生性，改善植物營養(yǎng)生長，根系形態(tài)變化，提高植物的抗逆性能等方面鮮有報道。由于紫花苜蓿根系發(fā)達、固氮性強、適應范圍廣，本研究將其作為研究對象，將煤矸石、粉煤灰和沙土按不同質(zhì)量配比混合作為栽培基質(zhì)，通過接種AM真菌，研究不同復合基質(zhì)上接種AM真菌對紫花苜蓿生長以及抗逆性的影響，從而為菌根技術在煤礦沉陷區(qū)植被生長發(fā)育地運用提供理論與材料的支持，為煤礦廢棄地的土地復墾與生態(tài)恢復提供一種微生物綜合推廣應用模式，同時為解決煤礦開采所帶來的生態(tài)破壞與環(huán)境污染問題提供可行性途徑。

1 材料與方法

1.1 材料

盆栽試驗于2017年7—10月在山西師范大學試驗大棚中開展，紫花苜蓿種子購于臨汾市小麥研究所。供試菌種包括摩西斗管囊霉（Funneliformis mosseae， F.m）、幼套近明球囊霉（Claroideoglomus etunicatum， C.e），菌種信息見表1，購于北京市農(nóng)林科學院植物與營養(yǎng)資源研究所。選用高粱對兩種菌種進行擴繁，培養(yǎng)基質(zhì)、菌根真菌孢子、菌絲體和被侵染根段的混合物作為菌劑。

供試基質(zhì)由煤矸石（CG）、粉煤灰（FA）、沙土（V黃土∶V河沙=3∶1，SS）混合而成，煤矸石取自臨汾市煤運公司煤炭轉(zhuǎn)運站，粉煤灰取自臨汾市海資熱電廠。試驗前期將煤矸石過3 mm篩，粉煤灰、黃土、河沙均過1 mm篩，經(jīng)121 ℃高壓蒸汽滅菌鍋滅菌2 h，以殺滅土著AM真菌，風干1周后待用。

1.2 試驗設計

采用兩因素隨機區(qū)組設計，設置菌根和基質(zhì)兩個因素。接種菌劑設有4個水平：接種F.m、C.e、F.m+C.e [F.m∶C.e=1∶1（W/W）]和non-AMF。供試基質(zhì)依據(jù)CG、FA和SS的理化性質(zhì)將其按照質(zhì)量配比不同依次設置為T1（75%∶25%∶0%）、T2（60%∶25%∶15%）、 T3（45%∶25%∶30%）、T4（30%∶25%∶45%），T5（0%∶0%∶100%）作為對照，其基本理化性質(zhì)見表2，共同組成20個處理組，每個處理組設3個重復，共計60盆。試驗選擇規(guī)格為16 cm（盆口直徑）×11 cm（盆底直徑）×14 cm（高）的塑料花盆，每盆盛放1.6 kg基質(zhì)。

播種前，挑選大小均一、顆粒飽滿的種子浸泡在10%H2O2中10 min進行表面消毒，再用去離子水沖洗數(shù)遍后至于室溫下進行催芽處理，待種子露白后播種。接種AM真菌采用層接法，準確稱取150 g菌劑均勻的撒施在已混合均勻的基質(zhì)表層，再在其上面播入已經(jīng)催芽的種子20粒，表層覆蓋一層薄薄的滅菌土，大約1 cm厚，不接菌對照組加入相同量已經(jīng)過高溫滅菌的菌劑。生長期間試驗大盆溫度范圍在15～30 ℃之間，每隔3 d澆水一次，保證基質(zhì)含水量是田間持水量的50%～70%，培養(yǎng)90 d后進行各項指標的測定。

1.3 測定方法

1.3.1 菌根侵染率和菌根依賴性 采用曲利苯藍染色法染色（趙斌和何紹江，2002），將紫花苜蓿根系洗凈加入10%的KOH，80 ℃水浴30 min后棄去KOH，清水輕輕漂洗根樣數(shù)次，至水不呈黃色即可。將根系剪成1 cm的小段，放入1%的曲利苯藍中染色，在顯微鏡下觀察并統(tǒng)計被侵染根段數(shù)，計算方法如下（王幼珊等，2012）：

菌根侵染率（%）=

∑（0×根段數(shù)+10×根段數(shù)+…+90×根段數(shù)+100×根段數(shù)）全部根段;

菌根依賴性=接種植物干重-未接種植物干重接種植物干重×100%。

1.3.2 生長指標 將紫花苜蓿地上部分和根系自莖基部剪開，放入烘箱105 ℃殺青30 min，再在75 ℃下烘干至恒重，分別稱其干重。用直尺測量株高;用精度0.02 mm的游標卡尺測量莖粗;用LI-3000C葉面積儀測定葉片面積;用Delta-TSCAN根系分析系統(tǒng)測量總根系長、根系表面積、根體積，根平均直徑。

1.3.3 葉片生理指標 測超氧化物歧化酶（SOD）活性用NBT法， 過氧化物酶（POD）活性用愈創(chuàng)木酚法，過氧化氫酶（CAT）活性用紫外吸收法（高俊鳳，2006），可溶性糖含量用蒽酮比色法，可溶性蛋白含量用考馬斯亮藍G-250染色法（張志良等，2009）。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 17對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，測定結果表示為平均值±標準誤，Duncans 法檢驗顯著性水平P<0.05各處理平均值間的差異顯著性，并采用雙因子方差分析基質(zhì)和菌劑的作用以及二者的交互作用，用Origin 8.5繪制柱狀圖。

2 結果與分析

2.1 接種AM真菌對紫花苜蓿根系菌根侵染率和菌根依賴性的影響

表3顯示，在五組基質(zhì)中，non-AMF處理的紫花苜蓿根系菌根侵染率和菌根依賴性為0，說明對照組未被AM真菌侵染。相同基質(zhì)中不同接菌處理的紫花苜蓿根系的菌根侵染之間具有顯著性差異（P<0.05）?；|(zhì)T1上接種AM真菌紫花苜蓿菌根侵染率最小，基質(zhì)T4上接種AM真菌根系的侵染效果最佳，且接種F.m+C.e的菌根侵染率最大，為64.31%。菌根依賴性的大小趨勢與侵染率保持一致，基質(zhì)T4上接種F.m+C.e紫花苜蓿根系的菌根依賴性最大，為86.24%，與接種C.e和F.m相比具有顯著性差異（P<0.05）。雙因子結果分析表明，基質(zhì)和菌劑對紫花苜蓿根系的菌根侵染率和菌根依賴性具有極顯著差異（P<0.001）基質(zhì)類型和接菌處理二者的交互作用對紫花苜蓿根系的菌根侵染率影響非常顯著（P<0.01），對菌根依賴性影響顯著（P<0.05）。

2.2 接種AM真菌對紫花苜蓿地上部生長的影響

表4顯示，各組基質(zhì)中接種AM真菌的紫花苜蓿株高與non-AMF相比具有顯著性差異（P<0.05），表現(xiàn)為F.m+C.e>C.e>F.m>non-AMF。接種F.m+C.e，基質(zhì)T4與T5的株高差異不顯著，基質(zhì)T4上接種F.m+C.e株高值最大與non-AMF相比增加了83.37%?；|(zhì)T1接種F.m的株高最小與non-AMF相比增加了34.02%。各組基質(zhì)接種AM真菌植株基徑大小與non-AMF相比差異顯著（P<0.05），但各接菌處理間沒有顯著性差異。五組基質(zhì)的基徑大小比為T4>T5>T3>T2>T1。基質(zhì)T4接種F.m+C.e的基徑最大比non-AMF高58.61%，基質(zhì)T1接種F.m的基徑增幅最小。植株的葉面積總體趨勢與株高和基徑一致，基質(zhì)T4接種F.m+C.e植株的葉面積最大較non-AMF增長了89.96%。基質(zhì)T1接種F.m+C.e的葉面積與non-AMF具有顯著性差異（P<0.05），接種C.e、F.m與non-AMF沒有顯著性差異。混合接菌基質(zhì)的紫花苜蓿地上部干重增長幅度大于單接菌，基質(zhì)T4接菌F.m+C.e的地上部干重最大，與non-AMF比較增加了215.38%。基質(zhì)T1接種AM真菌地上部干重增長幅度最小。雙因子分析結果表明，基質(zhì)和接菌處理對紫花苜蓿的株高、地上部干重具有極顯著影響（P<0.001），對基徑和葉面積具有非常顯著影響（P<0.01），二者交互作用對紫花苜蓿株高具有極顯著影響（P<0.001）， 對基徑、葉面積和地上部干重無顯著性影響。

2.3 接種AM真菌對紫花苜蓿根系生長的影響

表5顯示，接種AM真菌對不同基質(zhì)的紫花苜蓿根系總長、根表面積、根體積和根系干重均具有顯著性差異（P<0.05），總體趨勢表現(xiàn)為T4>T5>T3>T2>T1。不同接菌處理間根系總長和根表面積具有顯著性差異（P<0.05）?；|(zhì)T4上接菌的效果最佳，接種F.m+C.e較non-AMF增幅最大，根系總長增加了122.72%，根表面積增加了131%?；|(zhì)T1上接菌對根系生長的促進作用較小，接種F.m較non-AMF增幅最小，根系總長增加了30.08%，根表面積增加了25.65%。 對于根體積，盡管部分基質(zhì)上不同接菌處理間沒有顯著差異，但均表現(xiàn)出增長趨勢?；|(zhì)T4上接種F.m+C.e根體積比non-AMF增加132.33%?；|(zhì)T1上AM真菌對根體積的促進作用最小。對于根平均直徑，接種AM真菌五組基質(zhì)表現(xiàn)為T1>T2>T3>T4>T5，基質(zhì)T5上接種F.m+C.e的根平均直徑最小，但基質(zhì)T4接種F.m+C.e根平均直徑降低幅度最大，與non-AMF相比降低了57.78%?；|(zhì)T4接種F.m+C.e的根系干重最大，與non-AMF相比增加了204%?；|(zhì)T1接菌AM真菌根系干重增幅最小，接菌F.m+C.e和C.e沒有顯著性差異。雙因子分析結果表明，基質(zhì)和接菌處理對紫花苜蓿的根系總長、根表面積、根體積、根平均直徑以及根干重具有極顯著影響（P<0.001），二者交互作用對紫花苜蓿根系總長、根體積具有極顯著影響（P<0.001），對根表面積、根平均直徑、根干重有非常顯著影響（P<0.01）。

2.4 接種AM真菌對紫花苜蓿葉片生理指標的影響

2.4.1 接種AM真菌對紫花苜蓿葉片POD、SOD、CAT活性的影響 圖1顯示，與non-AMF相比，接種AM真菌對紫花苜蓿葉片的抗氧化物酶活性提高具有顯著促進作用。同一基質(zhì)不同接菌處理的紫花苜蓿葉片POD、SOD、CAT活性大小趨勢為F.m

2.4.2 接種AM真菌對紫花苜蓿葉片可溶性糖和可溶性蛋白含量的影響 圖2顯示，接種AM真菌在五組基質(zhì)，葉片的可溶性糖和可溶性蛋白含量總體表現(xiàn)為T1C.e>F.m>non-AMF?；|(zhì)T4接種AM真菌葉片的可溶性糖含量差異最顯著，且接F.m+C.e效果最佳，與non-AMF相比增加了110.58%，接種AM真菌對基質(zhì)T1葉片可溶性糖含量效果最差。對于可溶性蛋白含量，部分接菌處理間沒有顯著性差異，但均呈現(xiàn)增長的趨勢。接種F.m+C.e葉片的可溶性蛋白含量顯著高于其它處理，其中T4基質(zhì)接種F.m+C.e含量最高為8.08 mg·g-1，與non-AMF相比提高58.06%。

3 討論與結論

侵染率是反應宿主植物與AM真菌之間共生關系的重要指標，菌根侵染率越高，表明其與宿主植物的共生性越好，對促進植物生長，提高植物抗逆性的可能越大（李建華等，2009）。本研究結果表明，不同復合基質(zhì)中AM真菌均能與紫花苜蓿建立良好的共生關系，適量減少煤矸石填加量有助于提高植物的菌根侵染率和菌根依賴性，這可能由于煤矸石的重金屬含量高、物理結構差、微生物活性低（魏懷建等，2015），過量填加會對植物根系造成損傷，且水分和養(yǎng)分的保蓄能力差，不能為宿主植物和菌根的共生提供相對穩(wěn)定的環(huán)境。五組基質(zhì)相比，T4基質(zhì)更有利于AM真菌對紫花苜蓿根系的侵染，這可能與基質(zhì)的酸堿性、有機質(zhì)和礦物質(zhì)含量、水分的儲存等綜合作用有關。比較3種接菌處理，F(xiàn).m+C.e的效果最佳。任禛等（2015）研究表明，雖然不同菌劑間存在著對生態(tài)位點和光合產(chǎn)物的競爭性，但不同菌劑之間的協(xié)同效應要強于其競爭性，因而混合菌劑表現(xiàn)出了高的侵染率。畢銀麗等（2005）研究發(fā)現(xiàn)，菌根與基質(zhì)間具有一定的選擇性，不同的基質(zhì)對AM真菌的生態(tài)適應性不同，與宿主植物的共生性不同，因而對宿主植物的菌根侵染率和菌根依賴性大小不同。

不同基質(zhì)接種AM真菌均能夠增加植株的高度、基徑、葉面積和生物量，煤矸石填加量越大AM真菌對宿主植物生長的促進作用越弱，適量填加煤矸石的基質(zhì)AM真菌對植物生長的促進作用大于純沙土基質(zhì)。這可能是由于填加過量煤矸石抑制了AM真菌對根系的侵染，從而抑制了植物的生長，而合理填加煤矸石、粉煤灰豐富了基質(zhì)中的礦質(zhì)元素和有機質(zhì)，并通過菌根作用促進植物吸收。于淼等（2013）研究表明，在一定的閾值內(nèi)接種AM真菌能夠提高宿主植物對微量礦質(zhì)元素的吸收，同時抑制有害金屬元素的吸收。Hallett et al.（2009）研究證明，菌根侵染率的大小決定著菌根對宿主植物生長促進作用的大小。另有研究（Enkhtuya et al.， 2005）顯示，較低的菌根侵染率能夠

促進植物生長，而較高的侵染率對植物生長的促進作用不顯著，這也說明侵染率大小并不能完全反應菌根對植物生長的作用。

根系是植物吸收水分、養(yǎng)分以及合成多種氨基酸的重要器官。本研究發(fā)現(xiàn)，不接種AM真菌紫花苜蓿根系也能較好生長，這可能與其自身較強的耐受力有關。接種AM真菌顯著提高了紫花苜蓿的根系總長、根表面積、根體積，AM真菌通過菌絲分泌物影響宿主植物根系的分泌物組成和數(shù)量，改變植物根際環(huán)境（祖艷群等，2015）從而促進宿主植物根系生長，這與張中峰等（2015）研究結果保持一致。復合基質(zhì)的配比不同AM真菌對宿主植物根系生長的促進作用不同，基質(zhì)T4總根長、根表面積、根體積最大，這可能是由于T4的土壤理化性質(zhì)相對適宜、儲水性好、通透性強，提高了菌根與宿主植物的聯(lián)合作用，促進了根系的生長。接種AM真菌顯著減小了根系平均直徑，這與高雁琳等（2016）研究結果一致。基質(zhì)T5的根系平均直徑小于基質(zhì)T4，這可能由于T5基質(zhì)與T4相比，土壤貧瘠、質(zhì)地均一、粒徑小、吸水性強，根系需穿透土壤中有機物的顆粒間隙吸收養(yǎng)分和水分供應植物的生長。同一基質(zhì)3種接菌處理紫花苜?？偢L、根表面積、根體積大小為F.m+C.e>C.e>F.m，根系平均直徑的大小為F.m+C.e

抗氧化物酶是反應植物代謝和抗逆性的指標，對細胞膜具有保護作用。自然狀態(tài)下，植物體的抗氧化物酶活性維持在較穩(wěn)定的水平，當植物體受到逆境脅迫時，細胞的活性氧含量就會升高，抵御過量的氧自由基對細胞造成的傷害，維持生理平衡（王定景等，2012）。本研究結果表明，無論是否進行接菌處理，五組基質(zhì)的葉片POD、SOD、CAT活性大小趨勢為T1

逆境脅迫促使植物細胞積累一些滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)來維持細胞膨壓對某些生理功能的調(diào)控，緩解其對植物造成的傷害（康云艷等，2011），可溶性糖和可溶性蛋白是重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。本研究結果表明，接種AM真菌能夠提高葉片可溶性糖和可溶性蛋白的含量，且適量填加煤礦固體廢棄物的基質(zhì)接種AM真菌有助于葉片可溶性糖和可溶性蛋白含量的增加，可見一定的脅迫有助于提高AM真菌對植物的抗逆性能。趙霞等（2017）研究證明，具有一定鹽堿脅迫的基質(zhì)接種AM真菌對紫花苜蓿滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)積累的作用大于正?；|(zhì)。前人在番茄（Wang et al.， 2011）、羊草（劉濱碩等，2014）等的研究中也得到類似結果。此外，混合接菌更有助于紫花苜蓿體內(nèi)滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的積累，維持細胞正常代謝，降低復合基質(zhì)這一特殊的立地環(huán)境對細胞造成的傷害，這與趙琦等（2015）研究結果一致。

綜上所述，AM真菌對以煤礦廢棄物為填充基質(zhì)的采煤沉陷地的植被重建具有潛在的應用價值，紫花苜蓿作為先鋒物種有助于提高復墾植被成活率，提高植被覆蓋度，增強植被重建的持續(xù)效果。但室內(nèi)模擬與野外實地試驗存在一定的差異，接下來應結合相應的工程措施具體應用于野外實地，探討“基質(zhì)-紫花苜蓿-菌種”組合在煤礦沉陷區(qū)生態(tài)恢復的實際作用效果。

參考文獻：

BI YL，2017. Research advance of application of arbuscular mycorrhizal fungi to ecological remediation in subsided land of coal mining areas [J]. Mycosystema，36（7）： 800-806.[畢銀麗， 2017. 叢枝菌根真菌在煤礦區(qū)沉陷地生態(tài)修復應用研究進展 [J]. 菌物學報， 36（7）：800-806.]

BI YL，SUN JH，ZHANG J，et al.，2017. Remediation effects of plant root growth inoculated with AM fungi on simulation subsidence injured [J]. J Chin Coal Soc，42（4）： 1013-1020.[畢銀麗， 孫金華， 張健， 等， 2017. 接種叢枝菌根真菌對模擬開采傷根植物的修復效應 [J]. 煤炭學報， 42（4）：1013-1020.]

BI YL，WANG J，F(xiàn)ENG YB，2014. Effect of arbuscular mycorrhiza on rootself-

repairing action of Amorpha fruticosa[J]. J Chin Coal Soc，39（8）： 1758-1764.[畢銀麗， 王瑾， 馮顏博， 2014. 接種叢枝菌根真菌對干旱區(qū)采煤沉陷地紫穗槐根系修復的影響 [J]. 煤炭學報， 39（8）：1758-1764.]

BI YL，WU FY，LIU BH，2005.Preliminary study on ecological adaptability of arbuscular mycorrhizal fungi in coal solid wastes [J].Mycosystema，24（4）： 570-575.[畢銀麗， 吳福勇， 柳博會， 2005. AM真菌在煤礦廢棄物中生態(tài)適應性的初步研究 [J]. 菌物學報， 24（4）：570-575.]

CHENG L，BOOKER FL，BOOKER TC，et al.，2012.Arbuscular mycorrhizal fungi increase organic carbon decomposition under evevated CO2 [J].Science，337（6098）： 1084-1087.

ENKHTUYA B，POSCHL M，VOSATKA M，2005.Native grass facilitates mycorrhizal colonisation and P uptake of tree seedlings in two anthropogenic substrates [J].Water Air Soil Poll，166（14）： 217-236.

FAN JH，LI GL，GAO Q，2011.Effects of different substrate with different arbuscular mycorrhizal fungi on the infection and growth to Amurcorktree [J].N Hortic，2（2）： 1-5. [范繼紅， 李桂伶， 高瓊， 2011. 不同基質(zhì)接種不同叢枝菌根真菌對黃檗幼苗侵染及生長的影響 [J]. 北方園藝， 2（2）：1-5.]

GUO W，ZHAO R，F(xiàn)U R，et al.，2014.Contribution of arbuscular mycorrhizal fungi to the development of maize（Zea maysL. ） grown in three types of coal mine spoils [J].Environ Sci Poll Res，21（5）： 3592-3603.

GAO JF，2006.Experimental guidance of plant physiology [M].Beijing： Higher Education Press： 211-218.[高俊鳳， 2006. 植物生理學試驗指導 [M]. 北京：高等教育出版社：211-218.]

GAO YL，LI JM，YAN M，2016.Effects of AMF inoculation the roots growth and antioxidant enzyme activity of Sorghum bicolor × S.sudanense in solid wastes [J].Jiangsu J Agric Sci，44（12）： 452-456. [高雁琳， 李鈞敏， 閆明， 2016. 接種AMF對煤礦廢棄物上高丹草根系生長及抗氧化酶系統(tǒng)的影響 [J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學， 44（12）：452-456.]

GUO SX，CHEN DM，LIU RJ，2010.Effects of arbuscular mycorrhizal fungi on antioxidant enzyme activity in peony seedlings under salt stress [J].Acta Hortic Sin，37（11）： 1796-1802. [郭紹霞， 陳丹明， 劉潤進， 2010. 鹽水脅迫下接種AM真菌對牡丹幼苗抗氧化酶活性的影響 [J]. 園藝學報， 37（11）：1796-1802.]

HE XL，CHEN C，HE B，2011.Spatial distribution of arbuscular mycorrhiza fungi and glomalin of Hippopae rhamnoidesL.in farming-pastoral zone from the two northern provinces of China [J].Acta Ecol Sin，31（6）： 1653-1661. [賀學禮， 陳程， 何博， 2011. 北方兩省農(nóng)牧交錯帶沙棘根圍AM真菌與球囊霉素空間分布 [J]. 生態(tài)學報， 31（6）：1653-1661.]

HALLETT PD，F(xiàn)EENEY DS，BENGOUGH AG，et al.，2009.Disentangling the impact of AM fungi versus roots on soil structure and water transport [J].Plant Soil，314： 183-196.

HAN B，HE CX，GUO SR，et al.，2011.Effects of arbuscular mycorrhizal fungi on osmoregulation substance contents and antioxidant enzyme activities of cucumber seedlings under salt stress [J]. Acta Bot Boreal-

Occident Sin，31（12）： 2492-2497. [韓冰， 賀超興， 郭世榮， 2011. 叢枝菌根真菌對鹽脅迫下黃瓜幼苗滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量和抗氧化酶活性的影響 [J]. 西北植物學報， 31（12）：2492-2497.]

HAN TT，WANG WH，GUO SX，2011.Effects of arbuscular mycorrhizal fungi on photosynthetic characteristics of Coleus blumei[J].J Qingdao Agric Univ （Nat Sci Ed）， 28（1）： 9-12. [韓婷婷， 王維華， 郭紹霞， 2011. AM真菌對彩葉草光合特性的影響 [J]. 青島農(nóng)業(yè)大學學報（自然科學版）， 28（1）：9-12.]

KANG YY，YANG X，GUO SR，et al.，2011.Effects of 24-

Epibrassinolide on carbohydrate metabolism and enhancement of tolerance to root-zone hypoxia in cucumber（Cucumis sativusL.） [J].Sci Agric Sin，44（12）： 2495-2503. [康云艷， 楊暹， 郭世榮， 等， 2011. 24-表油菜素內(nèi)脂對低氧脅迫下黃瓜幼苗碳水化合物代謝的影響 [J]. 中國農(nóng)業(yè)科學， 44（12）：2495-2503.]

LI JH，GAO CH，LU CD，et al.，2009.Ecological effects of arbuscular mycorrhizal and rhizobium on mining land reclamation [J].Soil Fert Sci Chin，（5）： 77-80. [李建華， 郜春花， 盧朝東， 等， 2009. 叢植菌根和根瘤菌雙接菌對礦區(qū)土地復墾的生態(tài)效應 [J]. 中國土壤與肥料， （5）：77-80.]

LIU BS，KANG CL，WANG X，et al.，2014.Physiological and biochemical response characteristics of Leymus chinensisto saline-alkali stress [J].Trans Chin Soc Agric Eng，30（23）： 166-173. [劉濱碩， 康春莉， 王鑫， 等， 2014. 羊草對鹽堿脅迫的生理生化響應特征 [J]. 農(nóng)業(yè)工程學報， 30（23）：166-173.]

MA F，SU M，WANG L，et al.，2014.Effects of arbuscular mycorrhizal funfi（AMF） on the growth of wheat [J].Acta Ecol Sin，34（21）： 6107-6114. [馬放， 蘇蒙， 王立， 等， 2014. 叢枝菌根真菌對小麥生長的影響 [J]. 生態(tài)學報， 34（21）：6107-6114.]

RADKA S，MIROSLAV V，2007.Differences in the effects of three arbuscular mycorrhizal fungal strains on P and Pb accumulation by maize plants [J].Plant Soil，296（1/2）： 77-83.

REN Z，XIA TY，CHEN LJ，et al.，2015.Effect of different AMF on physiological related indexes of corn [J].SW Chin J Agric Sci，28（2）： 563-568. [任禛， 夏體淵， 陳麗娟， 等， 2015. 不同叢枝菌根真菌對玉米生理相關指標的影響 [J]. 西南農(nóng)業(yè)學報， 28（2）：563-568.]

SUN JH，BI YL，WANG JW，et al.，2017.Effects of arbuscular mycorrhizal fungi on the growth of Caragana korshinskiiKom. and soil improvement of coal mining subsidence in the Loess Area of West China [J].Acta Ecol Sin，37（7）： 2300-2306. [孫金華， 畢銀麗， 王建文， 等， 2017. 接種AM菌對西部黃土區(qū)采煤沉陷地檸條生長和土壤的修復效應 [J]. 生態(tài)學報， 37（7）：2300-2306.]

WANG LP，ZHANG H，QIAN KM，et al.，2012.Role of arbuscular mycorrhizal fungi in reclaimed mine soil system carbon sequestration [J].J Chin Univ Min Technol，41（4）： 635-640. [王麗萍， 張弘， 錢奎梅， 等， 2012. 叢枝菌根真菌對礦區(qū)修復系統(tǒng)固碳的作用 [J]. 中國礦業(yè)大學學報， 41（4）：635-640.]

WANG YS，ZHANG SB，ZHANG MQ，2012.Arbuscular mycorrhizal fungi resources and germplasm resources in China [M].Beijing： China Agriculture Press： 166-168.[王幼珊， 張淑彬， 張美慶， 2012. 中國叢枝菌根真菌資源與種質(zhì)資源 [M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社：166-168.]

WEI HJ，LI YC，WANG N，et al.，2015.Relationship between physical properties and organic-mineral complexes of reclaimed soil back-filled with coal gangue under various vegetationrestoration models [J].Bull Soil Water Conserv，35（6）： 207-212. [魏懷建， 李玉成， 王寧， 等， 2015. 不同植被恢復模式下煤矸石充填復墾土壤物理性質(zhì)與有機無機復合體的關系 [J]. 水土保持通報， 35（6）：207-212.]

WANG DJ，SI QY，GONG N，et al.，2012.Effects of salicylic acid on antioxidant enzymes of Anoectochilus roxburghiiunder heat stress [J].Guizhou Agric Sci，40（5）： 39-42. [王定景， 司慶永， 龔寧， 等， 2012. 高溫脅迫下外源水楊酸對金線蘭抗氧化酶活性的影響 [J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學， 40（5）：39-42.]

WANG X，GENG S，RI YJ，et al.，2011.Physiological responses and adaptive strategies of tomato plants to salt and alkali stresses [J].Sci Hortic，130（1）： 248-255.

YANG QX，ZHAO BQ，GUO DG，2015.A review on vegetation of opencast coal mine areas in northern China [J].Chin J Ecol，34（4）： 1152-1157. [楊勤學， 趙冰清， 郭東罡， 2015. 中國北方露天煤礦區(qū)植被恢復研究進展 [J]. 生態(tài)學雜志， 34（4）：1152-1157.]

YU M，BI YL，ZHANG CQ，et al.，2013.Metal elements utilization by mycorrhizal fungi in fly ash reclamation [J].J Chin Coal Soc，38（9）： 1675-1680. [于淼， 畢銀麗， 張翠青， 等， 2013. 菌根真菌對粉煤灰填充復墾中金屬元素的利用 [J]. 煤炭學報， 38（9）：1675-1680.]

ZHANG ZL，QU WQ，LI XF，2009.Experimental guidance of plant physiology [M].4th ed. Beijing： Higher Education Press： 103-125. [張志良， 瞿偉菁， 李小芳， 2009. 植物生理學試驗指導 [M]. 4版. 北京：高等教育出版社：103-125.]

ZHANG ZF，ZHANG JC，HUANG YQ， et al.，2015.Effects of water stress and mycorrhizal fungi on root morphology of Cycloba-lanopsisglaucaseedlings [J].Chin J Ecol，34（5）： 1198-1204. [張中峰， 張金池， 黃玉清， 等， 2015. 水分脅迫和接種菌根真菌對青岡櫟根系形態(tài)的影響 [J]. 生態(tài)學雜志， 34（5）：1198-1204.]

ZHANG H，SUN JQ，BAO YY，2015.Advances in studies on plant secondary metabolites influenced by arbuscular mycorrhizal fungi [J].J Agric Biotechnol，23（8）： 1039-1103. [張華， 孫紀全， 包玉英， 2015. 叢枝菌根真菌影響植物次生代謝產(chǎn)物的研究進展 [J]. 農(nóng)業(yè)生物技術學報， 23（8）：1039-1103.]

ZHAO B，HE SJ，2002.Mycrobiology experiment [M].Beijing： Science Press： 51-53. [趙斌， 何紹江， 2002. 微生物學試驗 [M]. 北京：科學出版社：51-53.]

ZHAO X，YE L，NA XW，et al.，2017.Influence of arbuscular mycorrhizal fungus on the osmotic adjustment substance and antioxidant system of Medicago sativaunder salt-alkaline stree [J].Jiangsu J Agric Sci，33（4）： 782-787. [趙霞， 葉林， 納學偉， 等， 2017. 鹽堿脅迫下叢枝菌根真菌對紫花苜蓿滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)及抗氧化能力的影響 [J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學報， 33（4）：782-787.]

ZHAO Q，BAO YY， 2015.Effect of arbuscular mycorrhizal fungi on growth and two phenolic acids of Medicago sativa under various mixed salt-alkaline stresses [J].Acta Bot Boreal-OccidentSin，35（9）： 1829-1836. [趙琦， 包玉英， 2015. 混合鹽堿脅迫下叢枝菌根真菌對紫花苜蓿生長及2種酚酸含量的影響 [J]. 西北植物學報， 35（9）：1829-1836.]

ZHOU BL，ZHENG JD，BI XH，et al.，2015.Effects of mycorrhizal fungi on eggplant Verticilliumwilt and eggplant growth [J].Chin J Ecol，34（4）： 1026-1030. [周寶利， 鄭繼東， 畢曉華， 等， 2015. 叢枝菌根真菌對茄子黃萎病的防治效果和茄子植株生長的影響 [J]. 生態(tài)學雜志， 34（4）：1026-1030.]

ZU YQ，LU X，ZHAN FD，et al.，2015.A review on roles and mechanisms of arbuscular mycorrhizal fungi in phytoreme-diationof heavy metals polluted soils [J].Plant Physiol J，51（10）： 1538-1548. [祖艷群， 盧鑫， 湛方棟， 等， 2015. 叢枝菌根真菌在土壤重金屬污染植物修復中的作用及機理研究進展 [J]. 植物生理學報， 51（10）：1538-1548.]