舒詩(shī)會(huì) 姚君亮 尹大全

摘 要 目的：采用LC-MS/MS法對(duì)拉科酰胺原料中基因毒性雜質(zhì)對(duì)甲苯磺酸甲酯進(jìn)行檢測(cè)。方法：采用 Agilent Eclipse XDB C18（2.1 mm×150 mm，3.5 mm.）柱，以5 mmol/L醋酸銨-0.1%甲酸為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，梯度洗脫，流速0.4 ml/min。質(zhì)譜采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式，離子對(duì)m/z 204.0/91.1。結(jié)果：本研究建立的方法線性范圍在2.5～100.0 ng/ml（R2=0.996），定量下限為2.62 ng/ml，日內(nèi)和日間精密度良好（RSD<5%），加標(biāo)回收率符合要求，24 h內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好。結(jié)論：本方法靈敏度高、選擇性好、樣品前處理簡(jiǎn)單，可以滿足拉科酰胺原料中痕量對(duì)甲苯磺酸甲酯的定量檢測(cè)要求。

關(guān)鍵詞 基因毒性雜質(zhì) 對(duì)甲苯磺酸甲酯 拉科酰胺 LC-MS/MS

中圖分類號(hào)：TQ460.72； O657.72 文獻(xiàn)標(biāo)示碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2019）15-0116-04

Determination of methyl p-toluenesulfonate in lacosamide by LC-MS/MS

SHU Shihui*， YAO Junliang， YIN Daquan

（Central Research Institute， Shanghai Pharmaceuticals Holding Co.， Ltd.， Shanghai 201203， China ）

ABSTRACT Objective： To establish an LC-MS/MS method for the determination of methyl p-toluenesulfonate in lacosamide. Methods： Chromatography separation was performed on Agilent Eclipse XDB C18 column （2.1 mm×150 mm， 3.5 mm） with gradient elution at speed 0.4 ml/min. Mass spectrometry was performed using multiple reaction monitoring （MRM） mode and ion pair m/z 204.0/91.1. Results： The linear range of methyl p-toluenesulfonate was at 2.5-100.0 ng/ml （R2=0.996） with a lower limit of quantitation of 2.62 ng/ml. The RSD of the recovery results obtained from intra- and inter-day precision study were less than 5%. The percentage recovery in drug samples was within the accepted range. The sample solution showed good stability within 24 h. Conclusion： This method has high sensitivity， good selectivity and simple sample preparation and is suitable for the quantitative determination of methyl p-toluenesulfonate in lacosamide drug substances.

KEy WORDS genotoxic impurity； methyl p-toluenesulfonate； lacosamide； LC-MS/MS

拉科酰胺是一種新型N-甲基-D-門冬氨酸受體甘氨酸結(jié)合位點(diǎn)拮抗劑，它主要用于治療癲癇和神經(jīng)性疼痛。由于拉科酰胺原料在工藝過程中使用了對(duì)甲苯磺酸和甲醇，反應(yīng)過程中可能會(huì)生成對(duì)甲苯磺酸甲酯（p-toluenesulfonate，PTSM），而對(duì)甲苯磺酸烷基酯一直被視為潛在基因毒性雜質(zhì)，這些物質(zhì)可與DNA發(fā)生烷基化反應(yīng)，從而可能成為癌癥的誘因。近些年來，各國(guó)藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)于基因毒性雜質(zhì)的管控要求是逐年提高，EMEA（歐洲藥品管理局）以及ICH相繼頒發(fā)了基因毒性雜質(zhì)研究相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則[1-2]。由于對(duì)潛在基因毒性雜質(zhì)進(jìn)行研究已成為申報(bào)文件的重要一環(huán)，因此，必須對(duì)拉科酰胺原料中的PTSM予以監(jiān)控。

目前，對(duì)甲苯磺酸酯類雜質(zhì)在其他藥品中的殘留雖已有用液相色譜[3]、氣質(zhì)聯(lián)用 [4-5]和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù) [6-9]進(jìn)行測(cè)定的報(bào)道，但拉科酰胺原料中磺酸酯類基因毒雜質(zhì)的分析尚未見有研究。眾所周知，樣品基質(zhì)對(duì)痕量雜質(zhì)測(cè)定具有非常顯著的影響，因此，很有必要對(duì)此類基因毒雜質(zhì)在拉科酰胺原料中的殘留量進(jìn)行仔細(xì)的研究。本研究嘗試采用HPLC-MS/MS法多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式測(cè)定拉科酰胺原料中痕量PTSM，旨在建立靈敏度高、選擇性好、操作簡(jiǎn)單的定量檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 儀器

1200高效液相色譜儀、6460 串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent公司）； CPA225D電子天平（德國(guó)Sartorius公司）；Advantage A10純水儀（美國(guó)Milli-Q公司）。

1.2 試藥

拉科酰胺原料（自制，批號(hào)119-38、119-39、100-100、100-101、100-110、100-117、100-124）；PTSM對(duì)照品（百靈威公司，純度98%，批號(hào) LU70L01）；甲酸（阿拉丁試劑（上海）有限公司，色譜純，批號(hào)J1529047）；甲醇（美國(guó)Merck公司，色譜純，批號(hào)1749207435）；水為自制高純水。