三種丙型肝炎病毒檢測(cè)方法結(jié)果分析

陳武轉(zhuǎn) 李錦霞 陶敏 常艷軍

摘要：目的：比較酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法、膠體金法檢測(cè)丙型肝炎抗體和熒光定量PCR法檢測(cè)HCV-RNA三種方法檢測(cè)丙型肝炎病毒的結(jié)果，為臨床提供參考數(shù)據(jù)。方法：采用ELISA法和膠體金法檢測(cè)2000例患者血清中丙型肝炎病毒抗體；用熒光定量PCR法檢測(cè)HCV抗體陽性患者血清HCV-RNA。結(jié)果：2000例患者ELISA檢測(cè)抗HCV陽性28例，陽性率為1.40%；膠體金法檢測(cè)抗HCV陽性27例，陽性率為1.35%；ELISA法檢測(cè)HCV抗體陽性者熒光定量PCR法HCV-RNA陽性5例，膠體金法檢測(cè)抗HCV陽性者熒光定量PCR法HCV-RNA陽性5例；熒光定量PCR法HCV-RNA檢測(cè)陽性患者ELISA法和膠體金法檢測(cè)結(jié)果均為陽性。結(jié)論：目前臨床檢測(cè)丙型肝炎病毒感染主要有ELISA法、膠體金法和熒光定量PCR法三種，ELISA法和膠體金法檢測(cè)HCV抗體陽性率基本一致；ELISA法和膠體金法HCV抗體陽性者熒光定量PCR法檢測(cè)HCV-RNA結(jié)果一致。

關(guān)鍵詞：丙型肝炎病毒 ELISA法膠體金法熒光定量PCR

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）主要經(jīng)輸血途徑傳播，母嬰垂直、吸毒等途徑也可傳播，感染者可引起丙型肝炎。我國(guó)HCV感染率約為3.2%，大約有3～4千萬感染者，是HCV感染的高流行的國(guó)家之一[1]，山西省運(yùn)城市中心醫(yī)院丙型肝炎抗體陽性率約為1.4%[2]。急性HCV感染者如不能及時(shí)給予有效的治療，部分患者會(huì)發(fā)生急性丙型肝炎，又有部分患者會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)槁员透窝?、進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化、肝癌，肝癌患者需要放療、化療等綜合治療，會(huì)給患者及其家庭帶來巨大的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，感染者也可能會(huì)繼續(xù)傳染給他人，嚴(yán)重威脅人類的生命健康。由于目前丙型肝炎病毒還沒有研制出有效的相關(guān)疫苗，因此，丙型肝炎病毒感染成為威脅人類的病毒之一，醫(yī)院有必要開展相應(yīng)的檢測(cè)方法，我院開展了用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）和膠體金法檢測(cè)血清中抗HCV，開展熒光定量PCR法檢測(cè)HCV-RNA，為臨床提供丙型肝炎病毒相關(guān)檢測(cè)。本課題選取山西省運(yùn)城市中心醫(yī)院來院就診患者，用ELISA法和膠體金法檢測(cè)其血清中丙型肝炎抗體，用熒光定量PCR檢測(cè)血清中HCV-RNA，并分析三種方法的檢測(cè)結(jié)果。

1資料與方法

1.1 一般資料回顧分析2018年7月至12月山西省運(yùn)城市中心醫(yī)院2000例住院和門診患者，其中，男988例，女1012例，年齡7～75歲。所有被選患者均進(jìn)行了ELISA法和膠體金法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體，抗HCV陽性患者進(jìn)行熒光定量PCR法HCV-RNA檢測(cè)。

1.2檢測(cè)方法

所有來院受試患者均早上空腹，在肘靜脈按標(biāo)準(zhǔn)步驟采血，分別采集3 ml兩管靜脈血于真空采血管，用低速離心機(jī)分離血清，ELISA法和膠體金法檢測(cè)血清中丙型肝炎病毒抗體用其中一管，熒光定量PCR法HCV-RNA檢測(cè)用另一管，三種檢測(cè)方法均嚴(yán)格按說明書操作規(guī)程進(jìn)行檢測(cè)。三種方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，均在分析前、分析中和分析后給予質(zhì)量控制，（1）分析前：標(biāo)本采集按操作規(guī)范采集、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境適宜，檢查移液器、洗板機(jī)、酶標(biāo)儀、PCR分析儀等儀器狀態(tài)；（2）分析中：實(shí)驗(yàn)過程能要正確選擇檢驗(yàn)試劑，且所選用的試劑盒在使用有效期內(nèi)，試劑盒包裝完整，無細(xì)菌污染。加樣過程中加樣準(zhǔn)確、嚴(yán)格孵育時(shí)間、保持實(shí)驗(yàn)過程中儀器運(yùn)行狀態(tài)；（3）分析后：檢測(cè)完成后，由檢驗(yàn)專業(yè)人員對(duì)報(bào)告進(jìn)行審查；所有檢驗(yàn)標(biāo)本均冷凍保存，以備再次核查。ELISA法檢測(cè)HCV抗體試劑盒購(gòu)自珠海麗珠試劑股份有限公司，膠體金法檢測(cè)HCV抗體試劑條購(gòu)自杭州艾康生物科技有限公司，熒光定量PCR法HCV-RNA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自湖南圣湘科技股份有限公司。

3 結(jié)果

2000例患者ELISA檢測(cè)抗HCV陽性28例，陽性率為1.40%；膠體金法檢測(cè)抗HCV陽性27例，陽性率為1.35%；ELISA法檢測(cè)HCV抗體陽性者熒光定量PCR法HCV-RNA陽性5例，膠體金法檢測(cè)抗HCV陽性者熒光定量PCR法HCV-RNA陽性5例；熒光定量PCR法HCV-RNA檢測(cè)陽性患者ELISA法和膠體金法檢測(cè)結(jié)果均為陽性。

4討論

丙型肝炎病毒可引起丙型肝炎，急性丙型肝炎病毒感染者如不能早期診斷，得不到有效的治療可發(fā)展為慢性丙型肝炎、進(jìn)一步可發(fā)展為肝硬化，甚至部分患者發(fā)展為肝癌，最后給患者的健康和其家庭的生活質(zhì)量造成嚴(yán)重的危害，因此，必須加大對(duì)HCV感染的檢測(cè)。目前臨床上主要用ELISA法和膠體金法檢測(cè)HCV抗體，其中ELISA法試劑成本低，所用儀器不復(fù)雜，一般臨床醫(yī)院都可提供相應(yīng)試劑盒設(shè)施，也適用于批量標(biāo)本檢測(cè)，是目前用于血液篩查和臨床檢測(cè)最廣泛的檢測(cè)HCV抗體的方法，但對(duì)于標(biāo)本量特別少的機(jī)構(gòu)和急診檢測(cè)就不太適合；膠體金法檢測(cè)抗HCV的原理是用膠體金作為標(biāo)記抗體，當(dāng)樣品中有抗HCV時(shí)則與HCV抗原結(jié)合后而出現(xiàn)紅色線，此法操作簡(jiǎn)單、快速、無需特殊的儀器，10min可以判讀結(jié)果，是一種優(yōu)化的方法，一般臨床醫(yī)院甚至診所基本都能滿足相應(yīng)的條件，對(duì)于急診和標(biāo)本量特別少的機(jī)構(gòu)來說有其優(yōu)點(diǎn)，但對(duì)于弱陽性的表現(xiàn)度較差，容易造成弱陽性標(biāo)本的漏讀和誤讀，陽性率低于ELISA法。本課題ELISA法檢出抗HCV陽性28例，陽性率為1.40%，而膠體金法檢測(cè)抗HCV陽性為27例，陽性率為1.35%，可見，膠體金法陽性率略低于ELISA法，而且膠體金法與ELISA法比較試劑成本偏高、靈敏度相對(duì)較低，性價(jià)比跟準(zhǔn)確度方面都略遜于傳統(tǒng)的ELISA法。膠體金和ELISA法檢測(cè)出抗HCV陽性也可能是曾經(jīng)感染過，要確定有丙肝感染還需進(jìn)行HCV-RNA檢測(cè)，本課題熒光定量PCR法測(cè)HCV-RNA陽性5例。HCV是嗜肝臟病毒，主要在肝臟中復(fù)制，血液內(nèi)的含量與丙型肝炎的輕重有關(guān)[3]，也是反映HCV傳染性的指標(biāo)[4]。熒光定量PCR與ELISA法和膠體金法檢測(cè)HCV感染方法相比較，環(huán)境要求高，在全封閉的環(huán)境下進(jìn)行HCV-RNA及產(chǎn)物的擴(kuò)增檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)了PCR的擴(kuò)增、探針的雜交及產(chǎn)物分析一體化，大大減少了實(shí)驗(yàn)室污染因素，檢測(cè)過程操作簡(jiǎn)便、速度快，對(duì)整個(gè)反應(yīng)過程實(shí)現(xiàn)了實(shí)時(shí)監(jiān)控，是目前診斷丙肝病毒感染的重要參考指標(biāo)，還可以對(duì)丙肝患者治療進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

由此可見，丙型肝炎病毒檢測(cè)對(duì)人群健康具有重要的作用，目前臨床檢測(cè)丙型肝炎病毒感染主要有ELISA法、膠體金法和熒光定量PCR法三種，ELISA法和膠體金法檢測(cè)HCV抗體陽性率基本一致；ELISA法和膠體金法HCV抗體陽性者熒光定量PCR法檢測(cè)HCV-RNA結(jié)果一致。對(duì)于篩查丙肝感染者可選擇膠體金和ELISA法，急診、標(biāo)本量少者可選擇膠體金法。對(duì)于有條件者可開展HCV-RNA檢測(cè)，為臨床提供有效的檢測(cè)方法。無論哪種方法，均需進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

參考文獻(xiàn)：

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