白芨的種子組織培養(yǎng)及種植技術(shù)探討

邢鳳琴

(池州市青陽(yáng)縣南陽(yáng)林場(chǎng)，安徽 青陽(yáng) 242801)

1 引言

白芨屬于蘭科植物，分布于四川省以下的長(zhǎng)江流域及廣西云南貴州等省，有紫花三叉白芨和水白芨之分，其品質(zhì)前者優(yōu)于后者。野生情況下，大部分生長(zhǎng)在土壤濕度大、透氣性好且空氣濕潤(rùn)的靠蔭邊斜坡上。藥用價(jià)值高，主要是下面的莖塊，中醫(yī)用于止血生津，如胃、肺及腸道出血，也用于工業(yè)源料。由于人為因素及環(huán)境因素影響，資源已逐漸枯竭。藥農(nóng)主要是通過莖切塊繁殖，此法母體使用量大，成本高，繁殖速度慢，滿足不了市場(chǎng)的大量需求。種子繁殖在自然情況下對(duì)環(huán)境要求高，成活率低，主要原因是蘭科植物的種子屬于不完整胚胎，不帶坯乳，子房萌芽后后續(xù)營(yíng)養(yǎng)無(wú)法跟上，因而萌發(fā)后的幼苗很難成活。利用組織培養(yǎng)使種子萌發(fā)進(jìn)行繁殖，其速度快，適合大面積種植，也是目前主要發(fā)展方式。試驗(yàn)室主要分三個(gè)步驟：即一級(jí)苗、二級(jí)苗、三級(jí)苗，其培養(yǎng)基分別為如下。①一級(jí)苗(種子萌發(fā))階段培養(yǎng)基成分為：1/2MS+6-BA1.0 mg/L+ Naa0.15 mg/L+蔗糖30 g/L +瓊脂粉4.8 g/L 其pH:6.0②二級(jí)苗(壯苗)階段培養(yǎng)基成分為：4/5MS+ Naa0.5 mg/L+蔗糖30 g/L +瓊脂粉4.9 g/L 其pH:6.2③三級(jí)苗(成苗)階段培養(yǎng)基成分為：4/5MS+ Naa0.5 mg/L+蔗糖30 g/L +瓊脂粉5.0 g/L 其pH:6.2+。

2 白芨種子的采摘時(shí)間及注意事項(xiàng)

果莢采摘時(shí)，挑選形狀飽滿，色澤光潔的果莢。長(zhǎng)江中下流域在處暑與白露之間采摘白芨果實(shí)。原因是果實(shí)采摘過早，其果莢內(nèi)的種子成絮狀還未完全分離，難以播灑；采摘過晚，果莢容易裂開，無(wú)法對(duì)果莢進(jìn)行消毒，也就失去了做組織培養(yǎng)的價(jià)值。果莢內(nèi)沒有完全成熟的種子也可以在培養(yǎng)基上成活。

3 組織培養(yǎng)前果莢的處理

為消毒做好準(zhǔn)備：在不破壞果莢密封結(jié)構(gòu)的前提下，剪去果莢外一些不需要的東西，如果翼；留置約3 mm果柄，以便播種時(shí)方便夾住操作；將處理過的果莢用洗衣粉浸泡，并逐個(gè)地用小刷子將果莢外的污垢刷凈，清洗涼干備用(一般每人每天的使用量在50枚左右。多余的應(yīng)裝入保鮮袋放進(jìn)冰箱冷藏保存，及時(shí)用完)。

3.1 果莢消毒

果莢的消毒滅菌要在無(wú)菌條件下進(jìn)行。在無(wú)菌室中，將清洗過的果莢放入器皿中，加入75%酒精浸泡15 min，且無(wú)菌水沖洗3次。再加入0.4%的汞溶液中浸泡20 min，不停地?cái)嚢瑁蛊涑浞纸佑|溶液達(dá)到消毒徹底，之后用無(wú)菌水沖洗3次，控干水后放入無(wú)菌瓶中，用無(wú)菌紙壓住，擰緊蓋后倒置，使果莢上的殘余水份盡可能被吸收。

3.2 播種

準(zhǔn)備一個(gè)用酒精清洗消毒過的直徑8～10 cm小鐵盤，用于切割果莢。用消過毒的鑷子每次從無(wú)菌瓶中取出果莢5～8枚放置于盤中備用，將盛果莢的瓶擰緊放在無(wú)菌操作臺(tái)一邊待用。用鑷子夾住果莢的果柄，讓果莢在酒精燈上灼燒片刻，目的是消毒，注意不要燒熱果莢，以免燙傷莢內(nèi)種子。然后在小鐵盤中用手術(shù)刀將果莢攔腰切成兩段。用鑷子夾住斷面的另一端，在盛有培養(yǎng)基的瓶口輕輕敲擊，讓果莢中的絮狀種子隨著震動(dòng)而均勻?yàn)⒙溆谂囵B(yǎng)基表面上，每種植完一瓶后，將瓶蓋內(nèi)側(cè)放于酒精燈上灼燒片刻，以達(dá)到清毒目的即可，然后擰緊瓶蓋。并在瓶的側(cè)面橫向四面拍擊，使得種子更均勻分布在培養(yǎng)基表面。

4 種子的養(yǎng)護(hù)

種子播種后放于培養(yǎng)室中先進(jìn)行暗培養(yǎng)，室溫控制在白天23 ℃，夜晚18 ℃，直至種子萌芽。7 d左右種子吸飽水份，絮狀種子開始膨脹。20 d后開始光照，光照時(shí)長(zhǎng)由6 h逐漸遞增至12 h，光照強(qiáng)度由1400LX逐漸遞增到2000LX，如果是采用雙管照明的，前期可以關(guān)閉一只燈管來控制光照。萌芽出的種苗成米白色的細(xì)葉芽，經(jīng)過一段時(shí)間的光照，米白色細(xì)葉芽轉(zhuǎn)變?yōu)槟劬G色。50 d以后便可以分瓶壯苗，培養(yǎng)二級(jí)苗。(長(zhǎng)期控制種苗的方法:為調(diào)節(jié)苗木的供需，在一定的時(shí)候要控制苗木的生長(zhǎng)，關(guān)鍵要：一是控制溫度，溫度應(yīng)控制在5～10 ℃之間；二是降低光照強(qiáng)度，光照強(qiáng)度應(yīng)保持在600～1400LX)。

5 種苗的培養(yǎng)

5.1 第一次分苗

白芨種子因其細(xì)小，在播種過程中會(huì)過于密集，導(dǎo)致種子萌發(fā)后種苗堆集在一起。隨著種苗逐漸生長(zhǎng)過程中，容器溶液表面積不夠，營(yíng)養(yǎng)基供養(yǎng)分不足，且無(wú)法確定其數(shù)量。因此須要更換培養(yǎng)基供幼芽養(yǎng)分，讓其生根壯苗。要注意的是:①分苗時(shí)每夾幼苗數(shù)量在2～4株，多于4株會(huì)在生長(zhǎng)壯大的過程中產(chǎn)生并根現(xiàn)象，會(huì)給第二次分苗造成難度；②是注意每瓶數(shù)量。以直徑7 cm的苗瓶為例，每瓶應(yīng)控制在120～150株左右，越少越好，但過少會(huì)浪費(fèi)器材且不經(jīng)濟(jì)。過密會(huì)影響苗的生長(zhǎng)；③溫度應(yīng)控制在18～23 ℃，光照強(qiáng)度白天在23 ℃，晚上18 ℃左右。光照時(shí)長(zhǎng)為12 h，光照強(qiáng)度在2000LX左右，35 d以后便可以進(jìn)行第二次分苗。

5.2 第二次分苗

當(dāng)苗長(zhǎng)至2～3 cm后，便可以進(jìn)行第二次分苗。以直徑7 cm的苗瓶為例，每瓶應(yīng)控制在7簇，每簇4株左右，每瓶保持在30株左右。3次分苗后50 d左右，苗的基部開始長(zhǎng)出類似于球狀的莖塊。對(duì)于瓶苗來說，苗出瓶后移栽的成活率完全取決于小球在瓶中的生長(zhǎng)情況。第二次分苗，培養(yǎng)室的溫度白天應(yīng)控制在25 ℃，晚上20 ℃，光照時(shí)長(zhǎng)前期為12 h，后期為14 h，光照強(qiáng)度2800LX。

5.3 第三次分苗(即馴化)

第二次分苗后約105 d左右，此進(jìn)苗的基部大部分都生長(zhǎng)有小球，當(dāng)?shù)谝黄尤~，和第二片子葉開始枯黃時(shí)便可以開瓶進(jìn)行第三次分苗，移栽入大棚，在大棚環(huán)境下進(jìn)行養(yǎng)護(hù)，先進(jìn)行馴化(煉苗)后，再經(jīng)過在自然環(huán)境的土壤中吸收養(yǎng)分，讓種苗逐漸適應(yīng)在非培養(yǎng)基的自然環(huán)境下生長(zhǎng)。

5.3.1 煉苗

移栽之前要先煉苗，就是將瓶苗無(wú)菌培養(yǎng)室移至室外，打開瓶蓋，讓種苗在散射光下充分接觸空氣，適應(yīng)自然環(huán)境，注意不要讓苗放在陽(yáng)光下直接照射。煉苗選擇在18～25 ℃時(shí)為好，時(shí)間一般在4～7 d為宜。

5.3.2 移栽入大棚

先將苗從培養(yǎng)瓶中取出，在清潔的流水下洗凈種苗根部的培養(yǎng)基。如仍有2～4株連在一起的簇苗，只要洗凈培養(yǎng)基即可，不要將其分開，以免弄傷苗基部小球，影響成活率。栽入苗床以4～5株為一簇，約間隔7 cm，深度以小球不露在外面為準(zhǔn)。

5.3.3 育苗大棚

大棚約高2～3 m，應(yīng)采用雙層骨架，即遮陽(yáng)網(wǎng)在上一層，塑料薄膜在下一層，中間間隔50 cm左右。這樣大棚在高溫情況下，內(nèi)外層溫度會(huì)相差7～10 ℃，利于幼苗生長(zhǎng)。

5.3.4 幼苗期的管理

種苗移栽結(jié)束后應(yīng)立即用殺菌劑加殺蟲劑(用量按藥說明書使用)稀釋的水澆透，防止因分根破損引起爛根，待幼苗葉干后隨即噴一次MS營(yíng)養(yǎng)液，保證營(yíng)養(yǎng)助其生新根，提高成活率。每間隔7～10 d噴一次葉面肥，有蘭科作物的葉面肥，或中藥材專用肥均收到良好效果。如此養(yǎng)護(hù)需經(jīng)過兩年，幼苗才能移栽到大田(養(yǎng)護(hù)一年的幼苗，經(jīng)試驗(yàn)成活率不是很高)。第二年養(yǎng)護(hù)時(shí)大棚可揭去薄膜，但一定要蓋上遮陽(yáng)網(wǎng)防止爆曬，除自然雨水外，平時(shí)應(yīng)關(guān)注苗床濕度，不易過干，也不能積水。管理上基本和第一年幼苗相同。

5.4 第四次分苗(移栽入大田)

經(jīng)過3次分苗后的新苗已經(jīng)長(zhǎng)大，已逐漸適應(yīng)自然環(huán)境，可以移栽入大田生長(zhǎng)和管理。長(zhǎng)江流域應(yīng)選擇在4月下旬～5月上中旬份(視溫度而定，日夜溫度應(yīng)在15～25 ℃左右)。

5.4.1 苗床的準(zhǔn)備

大田應(yīng)在上年冬天進(jìn)行深耕，并施足腐熟的基肥(人畜肥及油餅均可)，讓土壤充分吸收。經(jīng)過施足基肥的土壤經(jīng)過霜凍，會(huì)疏松透氣且減少來年病蟲害。栽苗前再進(jìn)行1次翻挖整理，使垅畦寬度為100 cm，高度為15 cm，排水溝保持暢通，防止苗床積水。

5.4.2 病蟲害管理

白芨的病害主要為葉斑病和根枯病。前者癥狀是葉背面出現(xiàn)粉狀黃色斑點(diǎn)，并逐漸擴(kuò)散嚴(yán)重者導(dǎo)致白芨苗整株死亡。后者表現(xiàn)爛根現(xiàn)象，植株從基部逐漸枯黃直至整株死亡。防治方法主要是每間隔40 d噴1次殺菌劑加殺蟲劑。

6 結(jié)語(yǔ)

如今組織培養(yǎng)已經(jīng)成為我國(guó)培養(yǎng)白芨的重要方式之一。對(duì)于白芨的種子組織培養(yǎng)和種植技術(shù)進(jìn)行深入的研究，能夠有效提升我國(guó)白芨的繁殖速度以及存活率，從而進(jìn)一步擴(kuò)大種植面積。