林佩玲 方金通 吳錦輝 黃培衛(wèi) 解欣斐

摘 要 為了解大亞灣地區(qū)水產(chǎn)品中違禁漁藥殘留情況，以7種較常見水產(chǎn)品作為研究對象，采用酶聯(lián)免疫分析法檢測試劑盒對其進行藥物殘留檢測。結(jié)果顯示，7個品類的4種藥物殘留分析中，只有網(wǎng)箱養(yǎng)殖的虎龍斑和黑鯛存在氯霉素殘留（高于檢測限濃度0.025 μg·L-1），呋喃唑酮、孔雀石綠和磺胺類（檢測限濃度分別為0.04 μg·L-1、0.375 μg·L-1、2 μg·L-1）在所有樣品中均未檢出。

關(guān)鍵詞 水產(chǎn)品;藥物殘留，酶聯(lián)免疫分析法;大亞灣

中圖分類號：X714 文獻標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.23.058

近年來，隨著我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，水產(chǎn)品種和數(shù)量不斷增加，我國已經(jīng)成為了世界水產(chǎn)品的消費大國和出口大國。但是養(yǎng)殖品種與養(yǎng)殖數(shù)量的增加勢必會造成各種養(yǎng)殖病害發(fā)生頻率的上升。對養(yǎng)殖水產(chǎn)品使用魚類藥物可以在一定程度上抑制水產(chǎn)動物的病害發(fā)生，但近些年來，部分養(yǎng)殖戶為了追求高收入，濫用魚類藥物，對我國經(jīng)濟造成了很大的損失，并對食品安全和環(huán)境造成了潛在威脅。在這種嚴峻的形勢下，采用一種簡便、快速的分析方法對水產(chǎn)品中藥物殘留進行檢測變得尤為重要。免疫分析法是利用抗原-抗體特異性反應(yīng)來檢測各種目標(biāo)分析物的分析方法。這類方法具有操作簡便、經(jīng)濟、靈敏度高、適合現(xiàn)場對大量樣品進行快速篩檢等優(yōu)點，常見的主要有酶聯(lián)免疫分析法、放射免疫分析法、熒光免疫分析、免疫親和色譜等。其中ELISA由于特異性強、操作簡便等特點成最常使用的方法之一[1]。Pimpitak等[2]介紹了免疫法間接測定呋喃它酮代謝物，但這種方法操作復(fù)雜、耗時較長，衍生化不完全易造成回收率偏低。2012年，Yan等[3]首次建立了免疫法直接測定呋喃它酮代謝物殘留量。譚慧等[4]建立了水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的間接酶聯(lián)免疫測定方法，該方法的檢測限可達0.01 μg·kg-1。王瑋[5]將免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)運用到氯霉素藥物殘留檢測中，制定了相關(guān)的檢測方法，試驗表明在對水產(chǎn)品樣品的實際檢測中有較好的可靠性和推廣性。多種磺胺藥物的ELISA檢測方法已經(jīng)建立，并已初步應(yīng)用于動物樣品藥物殘留的檢測工作中，對磺胺類藥物的檢測表現(xiàn)了較高的靈敏度[6]。黃志勇等[7]發(fā)明了一種水產(chǎn)品中孔雀石綠分子印跡膜仿生ELISA的快速檢測法，該方法將MG-MIPs作為仿生抗體，建立直接競爭的ELISA快速檢測法。總之，ELISA方法已廣泛應(yīng)用于食品安全檢測中。

大亞灣地區(qū)作為廣東省惠州市的重要海灣，水產(chǎn)資源極其豐富，具有大規(guī)模的貝類養(yǎng)殖場和發(fā)展成熟的魚類網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)，并設(shè)有大亞灣水產(chǎn)資源保護區(qū)。鑒于大亞灣水產(chǎn)養(yǎng)殖的發(fā)展現(xiàn)狀和水產(chǎn)資源特征，了解該地區(qū)水產(chǎn)品的安全性和藥物殘留現(xiàn)狀具有重要意義。為了調(diào)查大亞灣水產(chǎn)品違禁漁藥殘留情況，對該地區(qū)7個水產(chǎn)品品類中磺胺類、呋喃唑酮、氯霉素和孔雀石綠4種藥物的殘留情況進行了酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）快速檢測，了解這4種藥物的殘留現(xiàn)狀，為大亞灣區(qū)水產(chǎn)品安全規(guī)范檢測提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，為水產(chǎn)養(yǎng)殖管理、水產(chǎn)漁藥使用規(guī)范提供科學(xué)的參考依據(jù)，讓居民可以篩選出健康的水產(chǎn)食品。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

從大亞灣地區(qū)自漁民手中購買7種常見的海水經(jīng)濟種類作為檢測對象，分別為刀額新對蝦（海捕）、黑鯛（海捕）、紅斑（工廠化養(yǎng)殖）、青紅斑（工廠化養(yǎng)殖）、云龍斑（網(wǎng)箱養(yǎng)殖）、虎龍斑（網(wǎng)箱養(yǎng)殖）和黑鯛（網(wǎng)箱養(yǎng)殖）。取這些水產(chǎn)品的肌肉組織，用絞肉機將其絞成肉糜，取定量進行樣本提取和復(fù)溶，所得溶液備用檢測。呋喃唑酮、氯霉素、孔雀石綠和磺胺類藥殘檢測試劑盒采購自深圳市易瑞生物技術(shù)股份有限公司，樣品處理及檢測按照各試劑盒說明書進行。

1.2 數(shù)據(jù)處理與分析

以lgC為橫坐標(biāo)、ln為縱坐標(biāo)，構(gòu)建線性回歸方程。其中，C為標(biāo)準(zhǔn)品濃度;B為標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值;B0為0 μg·L-1標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值。

將樣品的平均吸光度值代入上述回歸方程，求得的值乘以樣本稀釋倍數(shù)（呋喃唑酮倍數(shù)為2，氯霉素倍數(shù)為1，孔雀石綠倍數(shù)為10，磺胺類倍數(shù)為2），即為樣本中藥物殘留含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 4種藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線

呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)曲線由5個標(biāo)準(zhǔn)樣品測得數(shù)據(jù)繪制而成，回歸方程為Y=-2.393 1X-2.023 0，R2=0.971 7（圖1）。氯霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線由4個標(biāo)準(zhǔn)品測得數(shù)據(jù)繪制而成，回歸方程為Y=-2.946 6X+6.2381，R2=0.994 4（圖2）。孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)曲線5個標(biāo)準(zhǔn)品測得數(shù)據(jù)繪制而成，回歸方程為Y=-2.889 7X+6.421 8，R2=0.976 1（圖3）?；前奉悩?biāo)準(zhǔn)曲線由5個標(biāo)準(zhǔn)品測得數(shù)據(jù)繪制而成，回歸方程為Y=-2.025 6X+1.043 4，R2=0.997 1（圖4）。

2.2 樣品檢測結(jié)果

如表1所示，7個品類的4種藥物殘留項目中，只有網(wǎng)箱養(yǎng)殖的虎龍斑和黑鯛存在氯霉素殘留（高于檢測限濃度0.025 μg·L-1），呋喃唑酮、孔雀石綠、磺胺類均低于檢測限含量（檢測限濃度分別為0.04 μg·L-1、0.375 μg·L-1、2 μg·L-1）。

3 討論

盡管大亞灣養(yǎng)殖業(yè)已經(jīng)發(fā)展多年，但對于該地區(qū)水產(chǎn)品中藥物殘留的相關(guān)調(diào)查鮮有報道。目前少數(shù)的調(diào)查結(jié)果表明該地區(qū)有部分水產(chǎn)品出現(xiàn)了藥物殘留超標(biāo)情況。例如何秀婷等[8-9]人在對大亞灣或陽江地區(qū)的養(yǎng)殖區(qū)進行調(diào)查時，發(fā)現(xiàn)幾個養(yǎng)殖區(qū)域均出現(xiàn)養(yǎng)殖水體中磺胺類藥物和喹諾酮類藥物含量過高的情況。這一情況說明大亞灣地區(qū)的魚類養(yǎng)殖中存在使用禁用抗生素類藥物的情況。本次調(diào)查結(jié)果顯示網(wǎng)箱養(yǎng)殖的虎龍斑和黑鯛中氯霉素殘留量過高，更說明了部分抗生素類藥物的使用已經(jīng)影響了水產(chǎn)品的安全性。同時海捕品種及工廠化養(yǎng)殖品種中均未檢測到4種藥物殘留，說明工廠化養(yǎng)殖由于管理到位所生產(chǎn)的產(chǎn)品安全性要高于網(wǎng)箱養(yǎng)殖。

參考文獻：

[1] 胡昌勤.酶聯(lián)免疫吸附法新進展[J].生物化學(xué)與生物物理進展，1993，20（2）：85-88.

[2] Pimpitak U， Putong S， Komolpis K， et al. Development of a monoclonal antibody-based enzyme-linked immunosorbent assay for detection of the furaltadone metabolite， AMOZ， in fortified shrimp samples[J].Food Chemistry，2009，116（3）：785-791.

[3] Yan XD， Hu XZ， Zhang HC， et al. Direct determination of furaltadone metabolite，3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone，in meats by a simple immunoassay[J].Food and Agricultural Immunology，2011，23（3）：1-13.

[4] 譚慧，麥琦.酶聯(lián)免疫分析法測定水產(chǎn)品中氯霉素殘留量[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2010，20（7）：1649-1650.

[5] 王瑋.氯霉素殘留快速檢測膠體金試紙條的研究[D].天津：天津科技大學(xué)，2008.

[6] 鄭志高，江紅星，呂芳，等.磺胺類藥物的多殘留酶聯(lián)免疫法檢測[J].檢驗檢疫學(xué)刊，2006，16（1）：19-22.

[7] 黃志勇，林鄭忠，李璐，等.一種水產(chǎn)品孔雀石綠分子印跡膜仿生ELISA的快速檢測方法：中國，CN105242

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[8] 何秀婷，王奇，聶湘平，等.廣東典型海水養(yǎng)殖區(qū)沉積物及魚體中磺胺類藥物的殘留及其對人體的健康風(fēng)險評價[J].環(huán)境科學(xué)，2014，35（7）：2728-2735.

[9] 何秀婷.廣東沿海典型養(yǎng)殖區(qū)喹諾酮類藥物的監(jiān)測分析及其生物標(biāo)記物研究[D].廣州：暨南大學(xué)，2009.

（責(zé)任編輯：劉昀）

收稿日期：2019-07-17

基金項目：2018年廣東省促進經(jīng)濟發(fā)展專項資金“現(xiàn)代漁業(yè)發(fā)展用途”（SDYY-2018-04）;廣東省海洋和漁業(yè)發(fā)展專項資金（2017A0002）;2017年海洋和漁業(yè)發(fā)展專項資金。

作者簡介：林佩玲（1972—），女，廣東惠州人，大專，研究方向為海洋生物健康養(yǎng)殖。E-mail： 991493893@qq.com。