夏珍珍*，鄭丹，胡西洲，夏虹

湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所/農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（武漢）（武漢 430064）

氟蟲腈是一種苯基吡唑類廣譜殺蟲劑[1-2]，長期攝取可能會(huì)損害肝臟、甲狀腺和腎臟，已被世界衛(wèi)生組織列為“對(duì)人類有中等毒性”化學(xué)品。氟蟲腈在動(dòng)物、植物、環(huán)境中會(huì)代謝為氟甲腈、氟蟲腈硫醚、氟蟲腈砜，其代謝物毒性甚至高于母體[3]。歐盟、美國、日本、中國明確規(guī)定禁限用氟蟲腈。因此，開發(fā)畜禽類產(chǎn)品中氟蟲腈及其代謝物的檢測(cè)方法具有重要意義。氟蟲腈的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法[6]、氣相色譜質(zhì)譜法[7-13]、液質(zhì)聯(lián)用法[14-15]等。這些檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)物也只針對(duì)氟蟲腈原藥，尚無針對(duì)氟蟲腈及其代謝物的檢測(cè)方法，多適用于一些植物源性產(chǎn)品或蜜蜂產(chǎn)品，針對(duì)氣相色譜質(zhì)譜法檢測(cè)禽蛋中氟蟲腈及其代謝物的方法相關(guān)報(bào)道較少。

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）是農(nóng)獸藥殘留分析的常規(guī)分析技術(shù)[16-17]，具有檢出限低、分析速度快、分析精度高、分辨率高、選擇性高、特異性強(qiáng)、能同時(shí)測(cè)定多組分化合物等特點(diǎn)。QuEChERS技術(shù)，具有操作簡單、快速、分析種類多等特點(diǎn)。將二者結(jié)合應(yīng)用于蛋類產(chǎn)品中氟蟲腈及其代謝物的測(cè)定，一方面，其可以提高檢測(cè)效率，拓寬檢測(cè)范圍；另一方面，該法儀器設(shè)備要求低，前處理方法簡單，易于推廣。因此，結(jié)合QuECHERS法和氣相色譜-質(zhì)譜法，建立了一種禽蛋類樣品中的氟蟲腈及其代謝物的檢測(cè)方法。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

GC-MS Agilent 6890-5973型氣相色譜-質(zhì)譜儀，配備電子轟擊源EI；Sartorius萬分之一型分析天平；Milli-Q型純水儀；Gilson移液器；離心機(jī)（德國Sigma）。

色譜純乙腈（J. T. Baker）；N-丙基乙二胺（Primary secondary amine，PSA，天津博納艾杰爾科技有限公司）；填料，粒度40 μm；氟蟲腈、氟甲腈、氟蟲腈硫醚、氟蟲腈砜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（國家農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科學(xué)研究檢測(cè)所）。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱取適量（精確至0.000 1 g）氟蟲腈及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用丙酮溶解配制質(zhì)量濃度為80 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，保存于-18 ℃冰箱內(nèi)。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確移取一定量的單個(gè)農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于100 mL容量瓶中，用丙酮稀釋配制成質(zhì)量濃度為1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間液，保存于4 ℃冰箱內(nèi)。

基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液：根據(jù)需要準(zhǔn)確移取適量氟蟲腈及其代謝物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用樣品空白溶液稀釋至適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2 儀器工作條件

色譜條件：色譜柱，DB-5MS毛細(xì)管柱，30 m× 0.25 mm×0.25 m；色譜柱溫度程序：100 ℃保持1 min，然后以10 ℃程序升溫至270 ℃，保持15 min；進(jìn)樣口溫度280 ℃；色譜-質(zhì)譜接口溫度280 ℃；載氣，氦氣，純度≥99.999%，流速1.0 mL；進(jìn)樣量1 μL；進(jìn)樣方式，不分流進(jìn)樣，溶劑延遲，5.0 min。

質(zhì)譜條件：電子轟擊源，70 eV；離子源溫度，250 ℃。選擇離子監(jiān)測(cè)：每個(gè)化合物選擇1個(gè)定量離子及2個(gè)定性離子，每種化合物保留時(shí)間離子、定性、定量離子見表1。

表1 化合物保留時(shí)間、定性、定量離子及定性定量離子豐度比值

1.3 試驗(yàn)方法

提取：稱取20.00 g試樣（精確至0.01 g）于100 mL離心管中，加入20 mL冰乙酸-乙腈溶液，渦旋振蕩1 min，水浴超聲提取15 min，加入6 g無水硫酸鎂和1.5 g無水乙酸鈉，渦旋混勻30 s后以4 000 r/min離心5 min。

凈化：稱取0.25 g PSA、0.75 g無水硫酸鎂置于15 mL塑料離心管中，準(zhǔn)確吸取5.0 mL上清液至此離心管中，渦旋振蕩1 min，以5 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min。取1 mL上清液，過0.22 μm有機(jī)微孔濾膜后，供氣相色譜-質(zhì)譜測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 儀器條件

分析對(duì)象氟蟲腈及其代謝物的極性為弱極性化合物，選擇DB-5MS色譜柱。氟蟲腈及其代謝物選擇離子模式下的色譜保留時(shí)間分別為：氟甲腈12.91 min，氟蟲腈硫醚14.32 min，氟蟲腈14.53 min，氟蟲腈砜15.68 min。結(jié)果表明，氟蟲腈及其代謝物分離良好，各農(nóng)藥的出峰順序見圖1和圖2。

2.2 樣品前處理

氟蟲腈屬于弱極性的化合物，在提取過程中易溶于有機(jī)溶劑，乙腈的極性強(qiáng)，具有沉淀樣品中蛋白質(zhì)和脂肪的作用，因而采用酸化乙腈作為萃取劑。采用經(jīng)典的QuECHERS法進(jìn)行樣品的提取，需要對(duì)吸附劑PSA的含量進(jìn)行優(yōu)化。試驗(yàn)考察了吸附劑用量為50，100，150，200，250和300 mg時(shí)的氟蟲腈及其代謝物的回收率，結(jié)果見圖3。

吸附劑用量在50～200 mg范圍內(nèi)，隨著吸附劑用量的增加，氟蟲腈及其代謝物的回收率逐漸提高。當(dāng)吸附劑用量為200～300 mg時(shí)，樣品的回收率逐漸穩(wěn)定。通過對(duì)比回收率，確定吸附劑的用量為250 mg。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

采用丙酮作為溶劑配置得到的標(biāo)準(zhǔn)溶液在0.01～ 0.50 mg/L內(nèi)，氟蟲腈及其代謝物線性關(guān)系良好，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)系數(shù)見圖4～圖7。0.01 mg/L連續(xù)進(jìn)樣6次，以信噪比3倍設(shè)定最低檢出限，氟蟲腈及其代謝物氟甲腈、氟蟲腈硫醚、氟蟲腈砜的GC-MS方法檢出限分別為0.004，0.005，0.004和0.004 mg/kg。

圖1 氟蟲腈及其代謝物混合標(biāo)樣色譜圖

圖2 雞蛋樣品中氟蟲腈及其代謝物色譜圖

圖3 PSA用量考察

圖4 GC-MS法測(cè)定氟蟲腈的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖5 GC-MS法測(cè)定氟甲腈的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖6 GC-MS法測(cè)定氟蟲腈砜的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖7 GC-MS法測(cè)定氟蟲腈硫醚的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.3.2 方法的準(zhǔn)確度和精密度

以雞蛋作為試樣，添加一定量的氟蟲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈硫醚、氟甲腈標(biāo)準(zhǔn)溶液，使添加回收濃度水平分別為0.01，0.10和0.5 mg/kg，每個(gè)添加平行6次測(cè)定，回收率結(jié)果和RSD結(jié)果見表2。加標(biāo)回收率在73%～120%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.7%～5.8%之間，表明該方法的準(zhǔn)確度和精密度均能滿足農(nóng)藥殘留測(cè)定技術(shù)的要求。

表2 添加回收結(jié)果

2.3.3 基質(zhì)效應(yīng)

為了考察基質(zhì)成分對(duì)目標(biāo)分析物的干擾，即方法的基質(zhì)效應(yīng)，試驗(yàn)測(cè)定了0.010～0.50 mg/L標(biāo)準(zhǔn)曲線（溶劑為100%丙酮）和雞蛋基質(zhì)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線，平行測(cè)定3次，通過它們的斜率計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)強(qiáng)度，按式（1）計(jì)算，以此作為考察基質(zhì)效應(yīng)的依據(jù)。

基質(zhì)效應(yīng)強(qiáng)度=（基質(zhì)標(biāo)曲斜率/溶劑標(biāo)曲斜率- 1）×100% （1）

氟甲腈、氟蟲腈硫醚、氟蟲腈、氟蟲腈砜的基質(zhì)效應(yīng)分別為128%，125%，129%和75%。

2.4 回收率試驗(yàn)

采用QuEChERS提取法，結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜法快速測(cè)定禽蛋中的氟蟲腈及其代謝物的含量。由表3可知，該方法具有快速、簡便、靈敏的特點(diǎn)，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法的靈敏度、穩(wěn)定性、回收率滿足禽蛋類產(chǎn)品中氟蟲腈及其代謝物的檢測(cè)。

表3 雞蛋和鵪鶉蛋樣品中的添加回收率

3 結(jié)論

建立了一種基于QuEChERS提取法結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜儀快速測(cè)定氟蟲腈及其代謝物氟甲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈硫醚殘留量的方法。此方法能夠?qū)Σ煌莸胺N類的樣品中氟蟲腈及其代謝物殘留進(jìn)行快速掃描、定性、定量分析。且該方法前處理步驟簡單，省時(shí)，低溶劑消耗，滿足禽蛋樣品中氟蟲腈及其代謝物殘留的快速篩查，為提高禽蛋產(chǎn)品質(zhì)量安全提供參考。