周建峰 朱小嬌

溫州市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢測(cè)院 浙江溫州 325000

目前食品中甲醛次硫酸氫鈉的測(cè)定，至今都還沒(méi)有制定適用范圍廣的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法。本實(shí)驗(yàn)選用高效液相色譜法對(duì)甲醛次硫酸氫鈉的含量進(jìn)行檢測(cè)。主要參照標(biāo)準(zhǔn)為GB/T 21126-2007。

1 方法確認(rèn)

1.1 樣品前處理

依據(jù)GB/T 21126-2007，稱取均勻樣品約5g于150mL具塞三角瓶中，加入50mL鹽酸-氯化鈉溶液，置于振蕩機(jī)振蕩提取40min。將提取液倒入20mL離心管中，于10000r/min離心15min，上清液備用。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制

分別量取具有曲線線性的不同濃度的甲醛標(biāo)準(zhǔn)使用液于25mL比色管中，分別加入2mL鹽酸-氯化鈉溶液、1mL磷酸氫二鈉溶液、0．5mL衍生劑，補(bǔ)水至10mL，蓋上塞子，搖勻。置于50℃水浴中加熱40min后，取出用流水冷卻至室溫。準(zhǔn)確加入5．0mL正己烷，將比色管橫置，水平方向輕輕振搖3-5次，將比色管傾斜放置，增加正己烷與水溶液的接觸面積。在一個(gè)小時(shí)內(nèi)，每隔5min輕輕振搖3-5次，然后再靜置30min，取10μL正己烷萃取液進(jìn)樣。

1.3 樣品測(cè)定

取2．0mL樣品上清液于25mL比色管中，加入1mL磷酸氫二鈉溶液、0．5mL衍生劑，補(bǔ)水至10mL，蓋上塞子，搖勻。以下同1．2步驟一致。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以所取萃取液中甲醛的濃度（以μg/mL為單位）為橫坐標(biāo)，甲醛衍生物苯腙的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，相關(guān)系數(shù)＞0．999，在測(cè)定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.5 計(jì)算方法，確認(rèn)數(shù)據(jù)

該標(biāo)準(zhǔn)的檢出限為0．08μg/g。分別以一倍檢出限、五倍檢出限、十倍檢出限作為添加量，每個(gè)水平進(jìn)行6次平行實(shí)驗(yàn)。計(jì)算一倍檢出限的標(biāo)樣峰的信噪比s/n的值。根據(jù)所得數(shù)據(jù)我們可以得到檢出限值6次平行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)信噪比s/n均大于5，即該目標(biāo)峰具有很好的分離度。相同水平的獲得的任意兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值均不超過(guò)算數(shù)平均值的15%。任意水平下6次平行實(shí)驗(yàn)的變異系數(shù)均符合要求[1]。因此，我們可以確定本實(shí)驗(yàn)室各方面條件均符合規(guī)定，具有進(jìn)行本標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)的能力。

2 實(shí)驗(yàn)部分

分別以藕芋粉、木薯淀粉、玉米粉絲、紅薯粉絲、綠豆粉絲、土豆粉、腐竹、油豆皮、魔芋絲、銀耳、蘑菇干、黃花菜、蜜棗、白砂糖、冰糖為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。每種類別選取兩種及以上的樣品，分別以GB/T 21126-2007為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，進(jìn)行處理，得到實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。根據(jù)兩次平行實(shí)驗(yàn)可以看到，利用該方法對(duì)以上除香菇干外的幾種物質(zhì)進(jìn)行甲醛次硫酸氫鈉含量的測(cè)定結(jié)果是穩(wěn)定的。對(duì)樣品以十倍檢出限的加標(biāo)量進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，并計(jì)算其平行兩次的回收率。從整理可以總結(jié)得出：利用該方法均可以得到＞85%的回收率，且平行兩次加標(biāo)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性良好。

3 優(yōu)化前處理實(shí)驗(yàn)

3.1 沉淀劑

通過(guò)對(duì)GB/T 21126-2007前處理實(shí)驗(yàn)部分的解讀和實(shí)際操作經(jīng)驗(yàn)，當(dāng)被測(cè)樣品中含有大量蛋白質(zhì)或者油脂物質(zhì)時(shí)，過(guò)濾液非常渾濁，用正己烷進(jìn)行萃取時(shí)易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，影響樣品的提取。因此，考慮對(duì)樣品進(jìn)行去蛋白質(zhì)的處理。本實(shí)驗(yàn)選擇加入乙酸鋅和亞鐵氰化鉀溶液作為蛋白沉淀劑。

在原實(shí)驗(yàn)步驟加入50mL鹽酸-氯化鈉溶液后，加入2．5mL亞鐵氰化鉀溶液和2．5mL乙酸鋅溶液后，再置于振蕩機(jī)振蕩提取。以肉包、腐竹、油豆皮等為基質(zhì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中濾液呈澄清狀，正己烷萃取液不易乳化，且平行數(shù)據(jù)良好。

3.2 縮短萃取時(shí)間

按照GB/T 21126-2007的正規(guī)操作，整個(gè)正己烷萃取過(guò)程需要將近90分鐘。本實(shí)驗(yàn)選擇在正己烷提取步驟中，用漩渦代替振蕩和靜置，可以明顯縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間。數(shù)據(jù)證明，漩渦三分鐘即可達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)操作中萃取的要求。利用漩渦的方法可以明顯提高了該實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)效率[2]。

4 優(yōu)化液相儀器條件

4.1 色譜柱的選擇

根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有條件，分別用安捷倫Eclipse XDB-C18、ZORBAX SB-C18、Extend-C18色譜柱進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)試。根據(jù)數(shù)據(jù)結(jié)果判斷，Extend-C18柱對(duì)甲醛衍生物和雜質(zhì)的分離效果最好，且目標(biāo)峰的分離度良好。

4.2 流動(dòng)相配比

改變流動(dòng)相配比可以改變雜質(zhì)峰與甲醛衍生物的分離度。根據(jù)雜質(zhì)峰與目標(biāo)峰的分離程度，當(dāng)乙腈與水的比例為70：30時(shí)，其分離效果最好。

5 結(jié)果與分析

在GB/T 21126-2007中，規(guī)定甲醛含量計(jì)算結(jié)果不超過(guò)10μg/g時(shí)，報(bào)告結(jié)果視為未檢出。該標(biāo)準(zhǔn)是將甲醛次硫酸氫鈉分解成甲醛后，利用檢測(cè)甲醛衍生物來(lái)進(jìn)行定量，若食品中含有甲醛，同樣會(huì)被檢出，因此標(biāo)準(zhǔn)中結(jié)果以甲醛計(jì)較為準(zhǔn)確。鑒于我國(guó)目前尚無(wú)食品中甲醛的限量標(biāo)準(zhǔn)及甲醛的本底資料，在本底含量就很高的樣品測(cè)定中如果甲醛呈陽(yáng)性，不足以判定在產(chǎn)品中人為地加入甲醛或甲醛次硫酸氫鈉[3]。

6 技術(shù)關(guān)鍵問(wèn)題的解決

通過(guò)本次項(xiàng)目的研究我們發(fā)現(xiàn)，甲醛次硫酸氫鈉的測(cè)定依據(jù)均是根據(jù)甲醛次硫酸氫鈉可分解為甲醛和亞硫酸，通過(guò)對(duì)甲醛含量的檢測(cè)來(lái)判斷甲醛次硫酸氫鈉的含量。實(shí)際上測(cè)定得到的甲醛含量應(yīng)該再乘以換算系數(shù)才是吊白塊的含量。如若食品生產(chǎn)過(guò)程中不加吊白塊而加的是甲醛，以吊白塊的結(jié)果報(bào)告就不符合實(shí)際情況，因此以甲醛實(shí)測(cè)值報(bào)告更符合要求。若需要檢驗(yàn)是否為吊白塊，則應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行亞硫酸（測(cè)定結(jié)果以二氧化硫計(jì)）含量的測(cè)定。