李東超　樊平　郭玉峰　蘇斌　王麗

摘要：本試驗(yàn)在秀珍菇栽培料配方中添加不同比例的棉柴屑替代部分棉籽殼進(jìn)行栽培，測定不同配方的秀珍菇菌絲生長速度、原基形成時(shí)間、產(chǎn)量及其在不同時(shí)期的漆酶活性。結(jié)果表明：配方4（棉柴屑40%、棉籽殼40%、麥麩18%、石膏1%、糖1%）的菌絲生長速度最快，原基形成天數(shù)最短，產(chǎn)量最高。不同栽培料配方的漆酶活性差異較大，但均表現(xiàn)為營養(yǎng)生長階段較高，隨菌齡的增長至子實(shí)體成熟，總體呈下降趨勢。綜合分析得出，配方4是棉柴屑替代棉籽殼栽培的最佳配方，漆酶活性的高低在一定程度上可以反映秀珍菇菌絲的活力。

關(guān)鍵詞：秀珍菇;棉柴秸稈;栽培;漆酶活性

中圖分類號：S646.1+4文獻(xiàn)標(biāo)識號：A文章編號：1001-4942（2019）11-0060-04

Study on Formula of Cultivating Pleurotus pulmonarius by

Replacing Cotton Seed Hull with Cotton Wood Straw

Li Dongchao1， Fan Ping2， Guo Yufeng1， Su Bin1， Wang Li1

（1. College of Plant Protection， Shandong Agricultural University， Taian 271018， China;

2. Binzhou Agriculture and Rural Bureau， Binzhou 256600， China）

Abstract The cotton wood straw was used to replace some of cotton seed hull in different proportions for Pleurotus pulmonarius cultivation. The mycelial growth rate， primordial formation time， yield and laccase activity of P. pulmonarius in different period were measured. The results showed that under the formula 4 （cotton wood straw 40%， cotton seed hull 40%， wheat bran 18%， gypsum 1% and sugar 1%），the mycelia had the fastest growth rate， the days of primordium formation were the fewest and the yield was the highest. The laccase activity of different formula was different， but it was higher in growth stage， and decreased with the increase of bacteria age to the maturity of fruiting body. Comprehensive analysis showed that formula 4 was the best， and the activity of laccase could reflect the activity of P. pulmonarius mycelium to a certain extent.

Keywords Pleurotus pulmonarius; Cotton wood straw; Cultivation; Laccase activity

秀珍菇（Pleurotus pulmonarius），學(xué)名為肺形側(cè)耳，又名小平菇、袖珍菇等，隸屬擔(dān)子菌綱真菌門傘菌目側(cè)耳科側(cè)耳屬[1，2]。秀珍菇風(fēng)味鮮美，質(zhì)地脆嫩，口感爽滑，且富含蛋白質(zhì)、多糖、維生素和礦物質(zhì)等營養(yǎng)成分，具有抗腫瘤、降血脂、降低膽固醇和增強(qiáng)免疫力等功效[3-6]。自20世紀(jì)90年代末商業(yè)化開發(fā)栽培以來，秀珍菇一直深受人們喜愛，不斷增大的消費(fèi)需求使得栽培規(guī)模迅速擴(kuò)大。但近年來隨著食用菌產(chǎn)業(yè)的迅猛發(fā)展，培養(yǎng)基原料日趨緊張，以雜木屑和棉籽殼為主料栽培的傳統(tǒng)栽培模式嚴(yán)重制約了秀珍菇的大規(guī)模生產(chǎn)。秀珍菇是一種生命力很強(qiáng)的木腐菌，生產(chǎn)上可利用農(nóng)林業(yè)的副產(chǎn)品及下腳料作為栽培原料[7，8]，因此，因地制宜研究和開發(fā)可替代的培養(yǎng)料是秀珍菇栽培中亟待解決的問題。

因棉柴秸稈富含纖維素和木質(zhì)素等食用菌生長發(fā)育所需的木質(zhì)纖維材料[9，10]，本研究擬用其替代棉籽殼，設(shè)計(jì)不同的栽培料配方培養(yǎng)秀珍菇，通過對菌絲生長速度、原基形成時(shí)間、產(chǎn)量和漆酶活性等指標(biāo)的測定進(jìn)行最佳配方的篩選，旨在為高效、低成本栽培秀珍菇提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試秀珍菇菌株由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)菌物實(shí)驗(yàn)室提供;棉柴取自濱州鹽堿地區(qū);麥麩、石膏粉、糖等其它材料均為市購。

1.2 培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，硫酸鎂0.5 g，磷酸二氫鉀2 g，加蒸餾水定容到1 L，pH自然。

原種培養(yǎng)基：麥粒98%，石膏粉1%，糖1%。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 配方設(shè)計(jì)及出菇管理 根據(jù)秀珍菇的營養(yǎng)需求和棉柴秸稈等栽培主料的理化特性，設(shè)計(jì)8個配方（表1）。采用熟料栽培，常規(guī)方法拌料、裝袋，每個配方30袋。121℃高壓滅菌2 h，待料溫降至室溫接種，之后置于25℃、空氣相對濕度為60%～65%的人工氣候培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每4 d觀察記錄菌絲生長速度，檢查菌絲長勢、污染、滿袋等情況。菌絲滿袋后置于20～25℃、空氣濕度為90%～95%、有一定散射光的出菇房中進(jìn)行催蕾和出菇管理，待菌蓋邊緣內(nèi)卷，孢子尚未彈射采收，此階段記錄原基形成時(shí)間和前三潮菇的產(chǎn)量。

1.3.2 粗酶液的提取及酶活性測定 分別在接種后第10 d、原基出現(xiàn)時(shí)、第一潮菇采收前1 d及采收后第7 d、第二潮菇采收前1 d及采收后第7 d取樣測定。具體方法：于料面下1 cm處均勻取樣并充分混勻，精確稱取10 g于50 mL燒杯中，加入40 mL蒸餾水，25℃、150 r/min浸提2 h，將上述溶液置于50 mL離心管，9 000 r/min離心15 min，取上清液進(jìn)行漆酶活性測定。

參照文獻(xiàn)[11，12]的方法：取5 μL漆酶樣品于195 μL ABTS溶液（pH=4.6）中混合均勻，置于25℃水浴鍋中反應(yīng)10 min，加入300 μL 5%的TCA溶液終止反應(yīng)，于405 nm測定吸光值。對照組用5 μL去離子水代替5 μL漆酶樣品，其余條件相同。1個酶活力單位定義為405 nm處每分鐘使吸光值增加0.1所需的酶量。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行處理，單因素方差分析法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

[HT5H]2.1 不同栽培料配方對秀珍菇菌絲生長情況的影響

由表2可以看出，與對照（配方8）相比，栽培料中加入棉柴屑后的秀珍菇菌絲生長速度均有不同程度的提升。其中配方4的菌絲生長速度最快，而且菌絲邊緣整齊、濃密;配方3、配方5、配方7的菌絲生長速度較快，菌絲邊緣分別為整齊、整齊、較整齊，菌絲濃密度表現(xiàn)為較濃密、濃密、濃密;配方1、配方2、配方6的菌絲生長速度較慢，菌絲邊緣分別表現(xiàn)為不整齊、較整齊、較整齊，菌絲濃密度則為較濃密、較濃密、濃密。綜合分析可知，添加較高棉柴秸稈的配方3、4、5、6、7利于秀珍菇的菌絲生長發(fā)育，推測可能是棉柴秸稈含有較多的木質(zhì)纖維素，而秀珍菇是木腐菌的緣故。

2.2 不同栽培料配方對秀珍菇原基形成時(shí)間和產(chǎn)量的影響

不同配方的秀珍菇原基形成時(shí)間和產(chǎn)量結(jié)果如表3所示，配方3、4、5、6、7的秀珍菇原基形成時(shí)間均短于對照，其中配方4的原基形成時(shí)間最短，比對照（配方8）提前7 d，而配方1、2的則長于對照。結(jié)合表2進(jìn)行分析得出，配方4中菌絲的生長速度和原基形成時(shí)間均優(yōu)于其它配方。平均產(chǎn)量方面，添加棉柴屑的配方中秀珍菇產(chǎn)量均有不同程度的增加，配方4的產(chǎn)量最高，菇形較好。

2.3 秀珍菇在不同栽培料配方和不同生長時(shí)期的漆酶活性

由表4可以看出，不同栽培料配方的秀珍菇漆酶活性在不同生長時(shí)期的變化趨于一致：即營養(yǎng)生長階段較高;隨著菌齡的增長至子實(shí)體成熟，漆酶活性總體呈下降趨勢。

不同栽培料配方的秀珍菇在同一發(fā)育時(shí)期，漆酶活性大小存在較大差異。結(jié)合表2發(fā)現(xiàn)菌絲生長速度較快的配方3、4、5中，菌絲生長第10 d和原基期的漆酶活性也較其它配方高。由此得出，漆酶活性的高低在一定程度上可以反映秀珍菇菌絲的活力。

3 討論與結(jié)論

通過試驗(yàn)得出，秀珍菇栽培料中添加一定比例的棉柴屑后，菌絲生長速度、原基形成時(shí)間與產(chǎn)量均不同程度地優(yōu)于對照，這表明棉柴秸稈較利于秀珍菇的生長發(fā)育。綜合來看，配方4（棉柴屑40%，棉籽殼40%，麥麩18%，石膏1%，糖1%）為棉柴替代棉籽殼栽培秀珍菇的最優(yōu)配方，該配方不僅可以降低生產(chǎn)成本，而且可以提高菌絲活力和菌菇產(chǎn)量。

漆酶具有降解木質(zhì)素、氧化降解酚類物質(zhì)、抑制雜菌等功能，在秀珍菇菌絲的木質(zhì)纖維素降解和后期出菇品質(zhì)方面起到關(guān)鍵作用。本試驗(yàn)通過對不同配方、不同時(shí)期內(nèi)的秀珍菇漆酶活性的測定發(fā)現(xiàn)，添加一定比例的棉柴屑后，菌絲營養(yǎng)生長階段和原基期的漆酶活性比對照均有不同程度的提高，這可能與棉柴秸稈中木質(zhì)素含量較高有關(guān)，需要誘導(dǎo)出更多的漆酶來進(jìn)行降解。不同配方中漆酶活性變化的總體趨勢相似，均表現(xiàn)為栽培前期營養(yǎng)生長階段較高，栽培后期較低，這與側(cè)耳屬其它食用菌相似[13，14]。推測原因是木質(zhì)纖維素復(fù)合體中，木質(zhì)素和半纖維素將纖維素包裹在其中，使得菌絲在生長過程中有優(yōu)先利用木質(zhì)素的生理特性，培養(yǎng)基中木質(zhì)素的降解可能隨栽培時(shí)間的延長逐漸減少，導(dǎo)致生長后期漆酶活性降低[15-17]。本研究還發(fā)現(xiàn)，漆酶活性的高低在一定程度上可以反映秀珍菇菌絲的活力，這預(yù)示或許可以將漆酶活性的檢測用于秀珍菇高效栽培配方的初篩中，但關(guān)于兩者的具體對應(yīng)關(guān)系還需進(jìn)一步試驗(yàn)確定。

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收稿日期：2019-09-05

基金項(xiàng)目：山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2017CXGC0308）;山東省高等學(xué)校科技計(jì)劃項(xiàng)目（J16LE06）

作者簡介：李東超（1980—），男，博士，主要從事食用菌病蟲害防治研究。E-mail： 68261808@qq.com

通訊作者：王麗（1985—），女，博士，副教授，主要從事食用菌栽培育種及保鮮加工研究。E-mail： haoyou0102@163.com