劉 敏 李 濤 吳克軍 劉增虎 羅順高 廖鵬飛 董占鵬

(云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所，云南蒙自 661101)

家蠶是一種經(jīng)過人工馴化并具有重要經(jīng)濟價值的昆蟲，也是鱗翅目昆蟲的模式生物，但其在飼養(yǎng)過程中經(jīng)常面臨病毒、細(xì)菌和真菌等多種病原的威脅。家蠶核型多角體病毒病，俗稱血液型膿病，由家蠶感染核型多角體病毒(Bombyxmorinucleopolyhedro virus，BmNPV)引發(fā)，一直是蠶業(yè)生產(chǎn)上危害最嚴(yán)重的病害之一，引起的蠶繭損失占蠶病損失總量的60%以上，而且其傳染性極強，一旦發(fā)病常給蠶桑生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟損失[1]。培育抗BmNPV蠶品種是應(yīng)對該病威脅最經(jīng)濟有效而又綠色環(huán)保的防病措施。

華康2號是中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所以秋豐、白玉為基礎(chǔ)蠶品種，通過導(dǎo)入對BmNPV具有高度耐受性的基因而育成的夏秋用家蠶新品種[2-3]，該品種對BmNPV多角體的半致死濃度(LC50)值超過109個/mL，比常規(guī)蠶品種對BmNPV多角體的LC50值高3～4個數(shù)量級，現(xiàn)已通過貴州省、廣西壯族自治區(qū)、河南省農(nóng)作物品種審定。華康2號已在浙江省海寧市[4]、陜西省勉縣[5]、貴州省黃平縣[6]、貴州省畢節(jié)市[7]、重慶市涪陵區(qū)[8]、貴州省清鎮(zhèn)市[9]、四川省宜賓縣[10]等地的蠶區(qū)完成了試養(yǎng)試驗，表現(xiàn)出很強的抗血液型膿病能力和地方適應(yīng)性。血液型膿病在云南省大部分蠶區(qū)均不同程度地暴發(fā)過，據(jù)調(diào)查，平均發(fā)病率在5.0%左右[11]，嚴(yán)重的蠶區(qū)發(fā)病率超過12.8%[12]，是導(dǎo)致云南省盒種產(chǎn)繭量偏低的主要原因。為解決這一問題，2014年云南省部分蠶區(qū)開始引進華康2號進行試養(yǎng)。本研究于2015年，對引進的華康2號在實驗室內(nèi)進行了抗性測定，并在陸良縣、鶴慶縣、祥云縣、沾益縣、保山市及元陽縣等蠶區(qū)的農(nóng)村基點進行了比較試驗，旨在進一步分析評價該品種的抗病力和經(jīng)濟性狀表現(xiàn)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試蠶品種 試驗蠶品種華康2號(正反交)，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所提供；對照蠶品種菁松×皓月(正反交)，由云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所提供。

1.1.2 病毒來源 BmNPV為云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所收集于云南省蒙自市草壩鎮(zhèn)蠶區(qū)，病毒原液的病毒多角體濃度為1.21×109個/mL。

1.2 試驗方法

1.2.1 華康2號對BmNPV的抗性檢測 2015年秋季在云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所品種選育實驗室，以華康2號為試驗蠶品種，菁松×皓月為對照蠶品種，進行蠶品種對BmNPV的抗性檢測試驗，每個蠶品種的正反交分別調(diào)查。試驗設(shè)定5級濃度梯度及1個空白對照，各級濃度梯度以6倍依次向下逐級稀釋，華康2號最高病毒多角體添毒濃度為1.21×109個/mL，菁松×皓月最高病毒多角體添毒濃度低于華康2號1個數(shù)量級，為1.21×108個/mL；每個病毒多角體添毒濃度各設(shè)3個重復(fù)試驗小區(qū)，每區(qū)飼養(yǎng)50頭家蠶。2齡起蠶添毒，每區(qū)添食0.2 mL病毒液，將0.2 mL病毒液均勻涂抹在直徑為1 cm的5片桑葉上進行添食，以0.2 mL滅菌水均勻涂抹在直徑為1 cm的5片桑葉上進行添食作為空白對照，待家蠶把帶毒桑葉食盡后再飼喂新鮮的普通無毒桑葉，3齡第3天調(diào)查血液型膿病發(fā)病率，采用SPSS20.0軟件計算LC50[13]。

1.2.2 華康2號農(nóng)村基點飼養(yǎng)比較試驗 2015年春季分別在云南省陸良縣、鶴慶縣、祥云縣、沾益縣、保山市及元陽縣等地以菁松×皓月為對照蠶品種，開展華康2號的飼養(yǎng)比較試驗。在相同環(huán)境條件下飼養(yǎng)試驗蠶品種華康2號和對照蠶品種菁松×皓月，每個品種正反交分開飼養(yǎng)，4齡時每個品種正反交各設(shè)置4個重復(fù)試驗小區(qū)，每區(qū)飼養(yǎng)400頭家蠶。飼養(yǎng)過程中調(diào)查4齡、5齡期病死蠶頭數(shù)。分區(qū)上蔟，采繭后調(diào)查每區(qū)蔟中病死蠶、不結(jié)繭蠶、薄皮繭、上繭、下繭、雙宮繭數(shù)以及產(chǎn)繭量和盒種產(chǎn)繭量，削繭調(diào)查全繭量、繭層量并計算繭層率。調(diào)查結(jié)束后每個品種正反交混合抽樣1.6 kg，送蒙自市鴻雁繭絲綢有限公司進行絲質(zhì)檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 “華康2號”對BmNPV的抗性檢測情況

從圖1可以看出，BmNPV多角體添毒濃度為1.21×109個/mL時，試驗蠶品種華康2號正交、反交的發(fā)病率分別為41.33%、37.33%，都低于50%；對照蠶品種菁松×皓月和皓月×菁松在BmNPV多角體添毒濃度為3.35×106個/mL時，發(fā)病率就分別達(dá)到了72.00%和74.00%，遠(yuǎn)高于50%。對調(diào)查的數(shù)據(jù)進行LC50分析，從表1可以看出，華康2號正交、反交對BmNPV多角體的LC50值都達(dá)到了109數(shù)量級，菁松×皓月和皓月×菁松對BmNPV多角體的LC50值只有105數(shù)量級，華康2號(正反交)對BmNPV多角體的LC50值比菁松×皓月(正反交)對BmNPV多角體的LC50值高出4個數(shù)量級，表明華康2號對BmNPV多角體的抗性遠(yuǎn)強于菁松×皓月。

圖1 華康2號不同BmNPV多角體添食濃度的發(fā)病率

表1 華康2號對BmNPV多角體的半致死濃度(LC50)

2.2 華康2號農(nóng)村基點試驗的飼養(yǎng)成績

試驗蠶品種華康2號在陸良縣、鶴慶縣、祥云縣、沾益縣、保山市及元陽縣6個農(nóng)村基點飼養(yǎng)。從表2可以看出，與對照蠶品種菁松×皓月相比，試驗蠶品種華康2號在陸良縣、鶴慶縣、祥云縣、沾益縣4個基點飼養(yǎng)時5齡經(jīng)過及全齡經(jīng)過都比菁松×皓月短；全繭量在陸良縣、鶴慶縣、祥云縣3個基點都比菁松×皓月高，在沾益縣比菁松×皓月稍低，最高為2.190 g(鶴慶縣)，最低為1.561 g(沾益縣)；繭層量和繭層率除了陸良縣的稍高于菁松×皓月外，其余地方均略低于菁松×皓月；蟲蛹率普遍比菁松×皓月高(沾益縣華康2號因為發(fā)生少量細(xì)菌病，導(dǎo)致其蟲蛹率只有95.98%，比菁松×皓月的99.17%低)；萬蠶收繭量在陸良縣、鶴慶縣、祥云縣都比菁松×皓月高，在鶴慶縣最高，為22.12 kg，在沾益縣比菁松×皓月稍低。從農(nóng)村基點的飼養(yǎng)成績可以看出，華康2號在各試驗基點的產(chǎn)繭量和強健性都表現(xiàn)出了一定的優(yōu)勢，但由于試驗農(nóng)戶都沒遇到血液型膿病暴發(fā)的情況，所以華康2號抗BmNPV的特性和優(yōu)勢在這4個試驗基點表現(xiàn)得不明顯。

表2 華康2號在陸良縣、鶴慶縣、祥云縣、沾益縣農(nóng)村基點試驗的飼養(yǎng)成績

祥云縣由于實驗戶及調(diào)查人員疏忽實驗區(qū)片遺失，未調(diào)查死籠率及蟲蛹率。

在保山市和元陽縣開展品種農(nóng)村基點飼養(yǎng)試驗時不同程度地遇到了血液型膿病，從表3可以看出，在保山市試驗蠶品種華康2號的盒種產(chǎn)繭量達(dá)到55.0 kg， 而對照蠶品種菁松×皓月只有38.6 kg，華康2號比菁松×皓月的盒種產(chǎn)繭量增加了42.5%；在元陽縣華康2號的盒種產(chǎn)繭量為31.5 kg，而菁松×皓月只有22.3 kg，華康2號的盒種產(chǎn)繭量比菁松×皓月增加了41.3%，所以在血液型膿病暴發(fā)的地區(qū)飼養(yǎng)華康2號其抗病增產(chǎn)優(yōu)勢更為明顯。

表3 華康2號在保山市及元陽縣農(nóng)村基點試驗的飼養(yǎng)成績

蠶繭價格為39元/kg。元陽縣只調(diào)查了2個品種的產(chǎn)量及產(chǎn)值，未調(diào)查全齡經(jīng)過和公斤繭顆數(shù)等數(shù)據(jù)。

2.3 華康2號農(nóng)村基點試驗蠶繭的繅絲成績

試驗蠶品種華康2號在云南省陸良縣、鶴慶縣、祥云縣、沾益縣、保山市及元陽縣等農(nóng)村基點開展了試驗示范并收集樣繭進行絲質(zhì)檢測(其中沾益縣的樣繭遺失，元陽縣未收集樣繭，故沾益縣和元陽縣未進行絲質(zhì)檢測)。從表4可以看出，華康2號的上車?yán)O率在幾個農(nóng)村基點都比對照蠶品種菁松×皓月高，在保山市的上車?yán)O率為97.02%，比菁松×皓月的93.81%高3.21個百分點；從陸良縣的蠶繭絲質(zhì)成績可以看出，華康2號的繭層率、粒繭質(zhì)量、繭絲長、解舒絲長、解舒率都比菁松×皓月高，只是繭絲纖度比菁松×皓月稍粗，表現(xiàn)出一定的優(yōu)勢；從鶴慶縣、祥云縣和保山市的蠶繭絲質(zhì)成績可以看出，華康2號的繭層率、粒繭質(zhì)量、繭絲長、解舒絲長、解舒率與菁松×皓月相差不大，繭絲質(zhì)相當(dāng)。

表4 華康2號在陸良縣、鶴慶縣、祥云縣、保山市農(nóng)村基點試驗蠶繭的絲質(zhì)鑒定成績

由于祥云縣及保山市樣繭為當(dāng)?shù)乜壗z廠檢查，有些數(shù)據(jù)未進行調(diào)查。

3 小結(jié)與討論

實驗室內(nèi)的抗性測定結(jié)果表明，試驗蠶品種華康2號(正反交)對BmNPV多角體的LC50值均達(dá)到109數(shù)量級，較對照蠶品種菁松×皓月高出4個數(shù)量級，這與徐安英等[1]的試驗結(jié)果一致，說明華康2號具有較強的抗血液型膿病能力。在保山市等地試養(yǎng)，剛好遇到血液型膿病暴發(fā)，華康2號較少發(fā)生血液型膿病，產(chǎn)量穩(wěn)定，盒種產(chǎn)繭量最高，比菁松×皓月高出40%以上，抗血液型膿病優(yōu)勢非常明顯。在沒有血液型膿病發(fā)生的地區(qū)試養(yǎng)，與菁松×皓月相比，華康2號蠶繭偏小，產(chǎn)量略低，未能表現(xiàn)出其抗血液型膿病的優(yōu)勢。但是為了整個蠶區(qū)的穩(wěn)產(chǎn)，保山市蠶區(qū)自2016年開始已經(jīng)全面推廣華康2號；陸良縣也于2017年引進了華康2號原種，加大了該品種在陸良縣的推廣力度，2017年生產(chǎn)的幾萬盒華康2號蠶種在當(dāng)?shù)爻霈F(xiàn)了供不應(yīng)求的局面，可見在血液型膿病多發(fā)、華康2號表現(xiàn)明顯抗病增產(chǎn)優(yōu)勢的地區(qū)，華康2號受到了廣大蠶農(nóng)的普遍歡迎。本研究結(jié)果表明，華康2號抗血液型膿病能力強，經(jīng)濟性狀總體表現(xiàn)較好，在血液型膿病發(fā)生較多的季節(jié)和蠶區(qū)推廣應(yīng)用，其品種的抗病增產(chǎn)優(yōu)勢更為明顯，建議擴大其在云南省的推廣應(yīng)用。