紅掌無菌系建立及培養(yǎng)技術(shù)

任武婷

紅掌又稱安祖花、花燭等，屬天南星科花燭屬多年生常綠草本植物，性喜溫?zé)岫酀穸峙潘己玫沫h(huán)境，怕干旱和強(qiáng)光暴曬。紅掌也是溫室名貴花卉之一，由于其花色艷麗，花期持久，一年四季紅花綠葉，既能作為盆栽，又能作為切花。隨著人們生活水平的提高，紅掌的需求量也在加大。短期內(nèi)要滿足紅掌的市場需求，用分株方法繁殖時(shí)間太長，用播種繁殖易產(chǎn)生變異，不利于大規(guī)模生產(chǎn)，只有利用組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)，才能滿足人們對(duì)紅掌的大量需求。

1 ? 準(zhǔn)備階段

首先制定出詳細(xì)的培養(yǎng)方案，準(zhǔn)備試驗(yàn)所需的工具器具，制備適宜的培養(yǎng)基，并經(jīng)高溫高壓滅菌備用，然后根據(jù)方案配制出試驗(yàn)用的化學(xué)消毒劑。

2 ? 外植體采集與消毒

2.1 ? 外植體采集 ? 選擇在晴天的中午9：00—10：00采集外植體，以溫室里的“紅國王”品種的健壯無病蟲害的植株上剛長出1～3天的新葉為宜（葉片半卷曲）。

2.2 ? 外植體清洗消毒 ? 用自來水將采集回的葉片沖洗干凈，再用洗潔精清洗，在流水下沖洗2小時(shí)，然后放到無菌操作臺(tái)上進(jìn)行消毒。①先用75%酒精消毒30秒，然后用無菌水沖洗1次，再用0.1%HgCl2浸泡10～15分鐘，浸泡時(shí)用玻璃棒輕輕攪動(dòng)，使外植體與消毒劑充分接觸，最后用無菌水沖洗5次。當(dāng)消毒時(shí)間為10分鐘時(shí)，污染率下降至6%，消毒效果較理想。消毒時(shí)間為15分鐘時(shí)，污染率更低，為3%。綜合考慮選擇消毒15分鐘。

3 ? 接種和培養(yǎng)

3.1 ? 接種 ? 接種整個(gè)過程均需無菌操作，先將消毒好的葉片放到高溫滅菌過的濾紙上，吸干葉片表面的水分，然后用刀片把葉片沿主脈切開，切掉葉片邊緣藥物侵蝕部分，將剩余部分切成1 cm×1 cm的小方塊，再放到培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)。1/2 MS+0.5 mg/L BA+0.2 mg/L 2，4-D，瓊脂4.7 g/L，糖30 g/L，pH=5.8，比較適合作誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基。每瓶放1個(gè)外植體，瓶身標(biāo)注培養(yǎng)基名稱、品種代碼、接種日期、接種員代號(hào)，每天檢查是否有感染，并及時(shí)清理。

3.2 ? 培養(yǎng) ? 接種完畢送到培養(yǎng)室去培養(yǎng)，對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)來說，暗培養(yǎng)比較合適。濕度50%，溫度23～32 ℃，20～26天后葉片開始膨大，等葉片邊緣出現(xiàn)黃色顆粒狀愈傷組織時(shí)，轉(zhuǎn)為光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度800～1 500 lx，每天用光照12小時(shí)，35～50天后葉片邊緣愈傷組織由淡黃色轉(zhuǎn)變?yōu)槟G色。

4 ? 芽誘導(dǎo)

將誘導(dǎo)出的愈傷組織接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。1/2 MS+1.0 mg/L BA+0.3 mg/L IBA，瓊脂4.7 ? g/L，糖30 g/L，pH=5.8，適合作芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

5 ? 芽增殖培養(yǎng)

將長出的叢芽（1～3個(gè)芽）分別接種到如下增殖培養(yǎng)基中：MS+0.5 mg/L BA+0.2 mg/L IBA，瓊脂4.7 g/L，糖30 g/L，pH=5.8。每天光照時(shí)間12～14小時(shí)，光照強(qiáng)度2 000 lx左右，溫度20～25 ℃。增殖率高，苗無畸形和玻璃化現(xiàn)象，30天可以進(jìn)行繼代。在增殖過程中選取最優(yōu)質(zhì)的大苗，淘汰弱苗，9～10次增殖率最高，隨著繼代次數(shù)的增加，增殖率下降。

6 ? 生根培養(yǎng)

選擇健壯且?guī)в?片葉子的芽，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基（1/2 MS+1.0 mg/L IBA +0.5 mg/L IAA +2 g/L碳粉）中進(jìn)行培養(yǎng)。光照2 500～ ? ? ?3 000 lx，每天光照時(shí)間為12小時(shí)，溫度25 ℃，濕度50%。培養(yǎng)15天就可以長出3條根，根長0.2～0.5 cm，培養(yǎng)30天根長1～1.5 cm，就可以移入溫室馴化煉苗。

7 ? 馴化及出瓶移載

從培養(yǎng)室把瓶苗移到溫室苗床上后馴化2周，對(duì)瓶苗適當(dāng)遮陰，白天溫度25～27 ℃，晚間溫度21～23 ℃，濕度60%～70%。出瓶前一天打開瓶蓋，使瓶內(nèi)濕度接近溫室濕度，出瓶時(shí)注意不要弄傷葉片和根，先把苗用純凈水清洗干凈，再放到10%多菌靈溶液中消毒1分鐘，然后再將苗栽到配好的泥炭基質(zhì)中，苗移栽后用噴壺澆水，定期噴施殺菌劑（甲基菌硫靈和多菌靈）防止病蟲危害。