王 莉，許 飛，杜文清，朱 蓉

原發(fā)性干燥綜合征（pSS）是以外分泌腺受累為主的慢性自身免疫性疾病，其特征是唾液腺和淚腺導(dǎo)管周圍單核細(xì)胞浸潤，引發(fā)自身免疫反應(yīng)，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷及凋亡。同時，pSS 還可累及腺體外器官，包括關(guān)節(jié)、肝臟、肺臟，腦和腎臟等［1］。pSS 的發(fā)病機(jī)制目前仍不十分清楚。已有文獻(xiàn)報道女性雌激素（E2）可能在pSS 中具有保護(hù)性作用［2］，且pSS 的發(fā)病年齡通常在女性雌激素急劇下降的更年期前后，進(jìn)一步提示女性雌激素水平可能在pSS 發(fā)病中具有重要作用。同時在pSS 動物模型中已發(fā)現(xiàn)效應(yīng)性T 細(xì)胞與調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞存在明顯失衡，尤其效應(yīng)性Th17 細(xì)胞在pSS 中發(fā)揮了重要的致病作用［3］，而Th17 的特征性及致炎性細(xì)胞因子為白細(xì)胞介素-17A（IL-17A）。本研究旨在進(jìn)一步探討E2及IL-17A在原發(fā)性干燥綜合征中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院風(fēng)濕免疫科2017 年6 月-2018 年12 月收治的pSS 患者26例為研究對象，其中女性24 例，男性2 例；年齡26～64 歲，平均（49.72±12.65）歲；病程3 個月～21 年，平均病程43.23 個月。選取同期與年齡、性別相匹配的健康志愿者26 例作為對照組。pSS 納入標(biāo)準(zhǔn)：符合原發(fā)性干燥綜合征分類診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其它風(fēng)濕性疾病，內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病；既往有卵巢手術(shù)史，多臟器功能衰竭。所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 ELISA 法檢測血清雌激素和IL-17A 水平：取外周靜脈血5 mL，室溫放置2 h，以1 000 g 離心20 min，取上清液血清置于-80 ℃超低溫冰箱儲存。檢測前將標(biāo)準(zhǔn)品震蕩混勻，洗滌液按1∶20 稀釋為洗滌緩沖液，分別往預(yù)先包被人雌二醇和IL-17A 抗體的包被微孔中依次加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 μl，樣本孔中加待測樣本50 μl，空白孔加樣本稀釋液50 μl。之后每孔加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體100 μl，用封板膜封住反應(yīng)孔，37 ℃水浴鍋溫育60 min，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液350 μl，靜置1 min。甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此反復(fù)4 次，然后每孔加入底物100 μl，37 ℃避光孵育15 min，每孔加入終止液50 μl，用酶標(biāo)儀在450 nm 波長處測定各孔的OD 值。

1.2.2 其他免疫學(xué)指標(biāo)檢測：包括dsDNA、免疫球蛋白、補(bǔ)體C3、C4 由我院實驗中心進(jìn)行檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料用±s 表示，2 組間比較若符合正態(tài)分布采用t 檢驗，非正態(tài)分布采用Mann-Whitney U檢驗。相關(guān)性分析用Spearman 檢驗，檢測指標(biāo)的特異性和敏感性用ROC 曲線分析，應(yīng)用GraphPad 5進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和作圖，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2 組患者血清雌激素水平的比較：血清雌激素水平在pSS 患者與對照組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。然而由于血清雌激素水平受月經(jīng)期影響，因此根據(jù)是否絕經(jīng)進(jìn)行分層分析發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)后女性pSS 患者血清雌激素水平低于對照組（P＜0.05），見圖1。

2.2 2 組患者血清IL-17A 水平的比較及與臨床指標(biāo)的相關(guān)性：血清IL-17A 水平在pSS 患者中顯著高于正常對照（P＜0.05）。同時與免疫性指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析顯示，血清IL-17A 水平與免疫球蛋白IgG 呈正相關(guān)性（r=0.403 8，P＜0.05），見圖2。

2.3 血清IL-17A 在pSS 診斷中的特異性和敏感性：通過ROC 其曲線下面積顯示AUC 值為0.690 8，見圖3-圖4。

3 討論

pSS 主要發(fā)生在女性絕經(jīng)期前后，而絕經(jīng)期最為重要的特征是體內(nèi)雌激素水平的變化。本研究顯示絕經(jīng)后女性pSS 患者血清雌激素水平低于健康對照組，這與國外Sara 等學(xué)者的研究結(jié)果一致，他們發(fā)現(xiàn)女性pSS 患者的雌激素補(bǔ)充水平低于對照組，并且增加雌激素水平與pSS 的病情進(jìn)展呈負(fù)相關(guān)性［2］。雌激素主要通過其受體ERα 和ERβ 在人體中發(fā)揮著重要的免疫調(diào)節(jié)作用［5］。已有研究發(fā)現(xiàn)人唾液腺上皮細(xì)胞（SGEC）同樣有雌激素受體的表達(dá)，然而在體外培養(yǎng)pSS 患者的SGEC 發(fā)現(xiàn)，給予雌激素刺激后pSS 患者的SGEC 與對照組相比，其對雌激素反應(yīng)明顯減低［6］。此外，高雌激素水平通過抑制NF-KB 等免疫炎癥通路，從而發(fā)揮抗炎癥作用［7］。因此，本研究結(jié)果進(jìn)一步提示絕經(jīng)后雌激素水平減低可能參與了pSS 的發(fā)病。

IL-17A 主要是由Th17 細(xì)胞產(chǎn)生的促炎因子，在T 細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病中具有重要意義［8］。在pSS 小鼠模型中已觀察到IL-17A 與炎癥細(xì)胞浸潤具有相關(guān)性，Lin 等人研究表明，IL-17A 基因缺陷小鼠的外分泌腺中無淋巴細(xì)胞浸潤［9］。另一項研究表明，IL-17A 水平的增加與DNA 損傷誘導(dǎo)蛋白153（GADD153）的上調(diào)和白細(xì)胞黏附抑制劑Del-1 下調(diào)有關(guān)［10］。此外，IL-17A 也可以進(jìn)一步上調(diào)其他致炎因子及炎癥細(xì)胞的產(chǎn)生［11］。本研究結(jié)果顯示血清IL-17A 在pSS 患者中高于健康對照組（P＜0.05），與Katsififis 的研究結(jié)果相一致［12］。同時本研究發(fā)現(xiàn)IL-17A 與免疫球蛋白IgG 水平呈正相關(guān)性。在pSS中，由于B 細(xì)胞功能亢進(jìn)，導(dǎo)致大量免疫球蛋白的產(chǎn)生，并以免疫球蛋白IgG 增高最為多見，且已有文獻(xiàn)報道免疫球蛋白IgG 水平與pSS 病情活動明顯相關(guān)。因此，本研究結(jié)果也進(jìn)一步提示IL-17A 可能通過增強(qiáng)B 細(xì)胞活性導(dǎo)致免疫球蛋白及自身抗體產(chǎn)生而參與pSS 的發(fā)病。而最新研究的結(jié)果也支持這一推測，Brinda 等學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)IL-17 可以增強(qiáng)干眼病小鼠的B 細(xì)胞增殖和生發(fā)中心的形成。此外，IL-17 還促進(jìn)B 細(xì)胞向漿細(xì)胞的分化［13］。本研究結(jié)果進(jìn)一步說明IL-17A 是pSS 發(fā)病中重要的致炎因子。

ROC 是通過ROC 曲線下面積（即AUC 值）反映檢測指標(biāo)在疾病診斷中的特異性和敏感性，其AUC值介于0～1，AUC 值越大說明診斷特異性和敏感性越高［14］。本研究結(jié)果提示IL-17A 在pSS 診斷中具有一定的意義。