前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1-2009 給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)輕工業(yè)聯(lián)合會(huì)提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)口腔護(hù)理用品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)牙膏分技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC492/SC1)歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：上海美加凈日化有限公司、納諾神蜂(福建)個(gè)人護(hù)理用品有限公司、蘇州市金茂日用化學(xué)品有限公司、云南白藥集團(tuán)股份有限公司、廣州薇美姿實(shí)業(yè)有限公司、廣州質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)研究院、國(guó)家輕工業(yè)牙膏蠟制品質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)中心。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人： 施裔磊、林澤鴻、陳健芬、高鷹、陳敏珊、郭長(zhǎng)虹、李林、陶麗、劉文玉。

本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。

1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了高效液相色譜法測(cè)定牙膏中3-甲基-4-異丙基苯酚含量的方法要點(diǎn)、試劑與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、儀器、分析步驟、結(jié)果計(jì)算、回收率、標(biāo)準(zhǔn)偏差和允許差。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于牙膏、漱口水等口腔護(hù)理用品中3-甲基-4-異丙基苯酚含量的測(cè)定。

本標(biāo)準(zhǔn)3-甲基-4-異丙基苯酚的檢出濃度為0.20μg/mL，定量濃度為0.60μg/mL。若取1.0g樣品，3-甲基-4-異丙基苯酚的檢出限為20mg/kg，定量限為60mg/kg。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3 方法要點(diǎn)

將牙膏用50%甲醇水溶液分散，超聲波提取其中的3-甲基-4-異丙基苯酚成分，然后離心分離并過(guò)濾處理，濾液用帶紫外檢測(cè)器的高效液相色譜儀分析測(cè)定，外標(biāo)法通過(guò)峰面積進(jìn)行定量計(jì)算。

4 試劑與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

4.1 一般規(guī)定

除非另有說(shuō)明，所用試劑均為分析純的試劑，水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。

4.2 3-甲基-4-異丙基苯酚對(duì)照品

純度不小于99%。

4.3 甲醇

HPLC級(jí)。

4.4 乙腈

HPLC級(jí)。

4.5 磷酸二氫鉀

4.6 有機(jī)相濾膜

0.45μm。

4.7 水相濾膜

0.45μm。

4.8 50%甲醇水溶液

甲醇和水按1∶1(V/V)混合后，經(jīng)0.45μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾，并超聲脫氣10min。

4.9 10mmol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液

稱(chēng)取磷酸二氫鉀1.36g(精確至0.000 1g)，用水溶解并定容至1 000mL，經(jīng)0.45μm水相濾膜過(guò)濾，并超聲脫氣10min。

4.10 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

稱(chēng)取3-甲基-4-異丙基苯酚對(duì)照品100mg(精確至0.0001g)，用50%甲醇水溶解并定容至100mL，搖勻，配制成1.0mg/mL的溶液。準(zhǔn)確吸取5mL上述溶液，用50%甲醇水溶解并定容至100mL，搖勻，作為含3-甲基-4-異丙基苯酚50.0μg /mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

4.11 標(biāo)準(zhǔn)工作液

將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用水逐級(jí)稀釋?zhuān)渲瞥蓾舛葹?.0μg/mL，2.5μg/mL，5.0μg/mL，7.5μg/mL，10.0μg/mL，12.5μg/mL，15.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

5 儀器

5.1 高效液相色譜儀：配紫外檢測(cè)器。

5.2 C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)及配套保護(hù)柱(4.0mm×10mm，5μm)。

5.3 磁力攪拌器。

5.4 超聲波清洗器：工作頻率≥35kHz，功率≥200W。

5.5 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4 000r/min。

5.6 分析天平：精度0.0001g。

6 分析步驟

6.1 試樣處理

牙膏試樣：先擠去大約20mm，再稱(chēng)取1g(精確至0.000 1g)試樣于100mL燒杯中，用50%甲醇水溶液約80mL溶解，磁力攪拌至分散均勻，超聲提取10min后，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液定容至刻度。搖勻后，將試樣溶液轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，以4000r/min以上離心分離10min。冷卻至室溫后，上清液經(jīng)0.45μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾，備用。

漱口水試樣：稱(chēng)取1g(精確至0.0001g)試樣于100mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液溶解并定容至刻度。搖勻后，上清液經(jīng)0.45μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾，備用。

6.2 測(cè)定

6.2.1 色譜條件參考

按照表1設(shè)定液相色譜條件。

表1 液相色譜條件

3-甲基-4-異丙基苯酚對(duì)照品用等度洗脫方式分析，洗脫程序見(jiàn)表2。

表2 對(duì)照品參考程序

牙膏試樣用梯度洗脫方式分析，洗脫程序見(jiàn)表3。

表3 牙膏試樣參考程序

6.2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

準(zhǔn)確吸取4.11制備的標(biāo)準(zhǔn)工作液20μL，分別注入高效液相色譜儀，按照6.2.1的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以3-甲基-4-異丙基苯酚的濃度為x軸，其相應(yīng)的峰面積為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

3-甲基-4-異丙基苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖，參照附錄中的圖A.1。

6.2.3 測(cè)定

準(zhǔn)確吸取20μL經(jīng)6.1處理的試樣溶液，注入高效液相色譜儀測(cè)定3-甲基-4-異丙基苯酚的峰面積，由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線找出試樣溶液中3-甲基-4-異丙基苯酚的濃度。

試樣溶液的液相色譜圖，參照附錄A中的圖A.2。

7 結(jié)果計(jì)算

樣品中3-甲基-4-異丙基苯酚的含量X(mg/kg)按式(1)計(jì)算：

(1)

式中：X——試樣中3-甲基-4-異丙基苯酚的含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；

c——試樣溶液中對(duì)應(yīng)的3-甲基-4-異丙基苯酚的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL)；

V——試樣定容體積，單位為毫升(mL)；

m——試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；

N——稀釋倍數(shù)；

K——對(duì)照品中3-甲基-4-異丙基苯酚的純度。

8 回收率

3-甲基-4-異丙基苯酚在添加濃度100mg/kg～400mg/kg范圍內(nèi)，本標(biāo)準(zhǔn)方法的回收率為96.3%～100.9%。

9 標(biāo)準(zhǔn)偏差

本標(biāo)準(zhǔn)方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%(n=6)。

10 允許差

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過(guò)算數(shù)平均值的10%，取其算數(shù)平均值作為測(cè)定結(jié)果。

附錄A

(資料性附錄)

液相色譜參考譜圖

圖A.1 對(duì)照品液相色譜圖

圖A.2 牙膏試樣液相色譜圖