黃賽金，尹愛武，高鵬飛

(1.湖南工程學(xué)院 材料與化工學(xué)院，湘潭 411104；2.大理大學(xué) 藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，大理 671000)

“痔”是直腸下端黏膜下和肛管或肛緣皮下的靜脈曲屈、擴(kuò)大所形成的靜脈團(tuán).痔瘡是最常見的肛腸疾病，發(fā)病率增高，有“十人九痔”之說[1].臨床主要表現(xiàn)便血、脫出、分泌粘液、疼痛和貧血等癥狀[2].臨床上,多數(shù)痔瘡人群都會出現(xiàn)不同程度的出血，且多次出血的發(fā)生率也相對較高，長期反復(fù)出血，會導(dǎo)致缺鐵性貧血[3].本研究對臨床報道的芙蓉葉痔瘡栓(黃芪、芙蓉葉、當(dāng)歸、連翹、地榆炭、芒硝、冰片組成)進(jìn)行動物抗炎、止痛、止血及抗?jié)儗嶒灒接懫渌幚砘钚?，為臨床應(yīng)用進(jìn)一步提供理論支持.

1 材料與儀器

昆明種小鼠(20±2)g；SD大鼠(200±20)g.黃芪、芙蓉葉、當(dāng)歸、連翹、地榆炭購于廣州清平藥材大市場；芒硝、冰片均為分析純.GJ-8402熱板測痛儀，浙江寧?？h白石電子醫(yī)藥儀器廠；sartorius BP110S電子天平；SHB-Ⅲ循環(huán)水式真空泵，鄭州長城科工貿(mào)易有限公司；N-1000S-WA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，日本EYELA.

2 方法

2.1 藥物的提取

按處方量將各種藥物(芒硝、冰片除外)，加10倍量水煎煮90 min，過濾，濾渣加8倍量水，煎煮90 min，過濾，合并二次濾液.減壓濃縮成清膏備用.

2.2 栓劑的制備

將30%的聚乙二醇1500和45%的聚乙二醇6000在水浴上加熱至全熔，將清膏、芒硝及冰片傾入并充分?jǐn)嚢杈鶆?，然后趁熱傾入涂有潤滑劑的栓模中至稍溢出模口.冷卻、凝固后，削去溢出部分，開啟栓模，推出栓劑，包裝即得.

2.3 二甲苯所致小鼠耳腫脹實驗

取昆明種雄性小鼠40只，按隨機(jī)分成4組，即空白組(給藥量栓劑基質(zhì)0.10 g/只)、芙蓉葉痔瘡栓高(給藥量0.15 g/只)、中(給藥量0.10 g/只)、低(給藥量0.05 g/只)劑量組.將20 μL二甲苯涂于小鼠右耳前后兩面，30 min后，各鼠右耳再分別涂以空白基質(zhì)或藥物，1 h后拉頸處死動物，以濕棉球?qū)⒍纤幬锊羶?，沿耳廓線剪下兩耳，用9 mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片，稱重，每鼠右耳片質(zhì)量減去左耳片質(zhì)量即為腫脹度，按下式計算腫脹抑制率.

腫脹抑制率(%)=

2.4 大鼠足跖腫脹實驗

SD大鼠40只，雌雄各半，分組同小鼠耳腫脹實驗.各組給藥量，空白組(栓劑基質(zhì)0.3 g/只)，芙蓉葉痔瘡栓高劑量組(0.4 g/只)、中劑量組(0.3 g/只)、低劑量組(0.2 g/只).將基質(zhì)或藥物涂布在小鼠右足跖，包括趾蹼之間，用敷料將足包裹固定，連續(xù)10 d.末次給藥30 min后，排水測量法測定大鼠右后足趾體積一次.于大鼠右后足跖部皮下注射新鮮雞蛋清(0.1 mL)后1、2 、3、4 、5 h分別測量右后足跖體積.致炎后體積減去致炎前體積等于腫脹度，觀察足跖腫脹高峰時間和消退時間，比較各組腫脹度的差異.

2.5 小鼠出血時間的測定(剪尾法)

取小鼠40只，雌雄各半.隨機(jī)分為組，分組與給藥量同小鼠耳腫脹實驗.將基質(zhì)或藥物涂布在小鼠尾部，每天1次，連續(xù)給藥7 d.末次給藥1 h后擦去藥物，小鼠尾3 mm處橫斷，待血液自行流出，每隔30 s用濾紙吸去血滴，直至濾紙吸時無血為止，計算出血時間.

2.6 小鼠鎮(zhèn)痛實驗

利用熱板測痛儀(熱板溫度為 55±0.5 ℃)，取兩次痛閾平均值為基礎(chǔ)痛閾(痛閾值為將小鼠放置熱板上至其舔后足的時間，舔足時間小于5 s或者大于30 s者棄之不用)，基礎(chǔ)痛閾在5～30 s內(nèi)者為合格動物.將100只雌性小鼠隨機(jī)分組，分組與給藥量同大鼠足跖腫脹實驗.將基質(zhì)或藥物涂布在小鼠四肢足跖，包括趾蹼之間，用敷料將足包裹固定，給藥30 min后去除藥物.給藥后15 min、30 min分別測定小鼠痛閾值.如60 s仍無反應(yīng)以60 s作為該小鼠痛閾值.

2.7 大鼠肛門潰瘍實驗

大鼠用乙醚麻醉后，將用99%冰醋酸溶液浸泡過夜的濾紙片(直徑6 mm)，貼于大鼠肛門周圍粘膜處，每0.5 min換一次濾紙片，共貼4次.第2 d觀察潰瘍程度，并按潰瘍程度隨機(jī)將40只SD大鼠分成5組，分組與給藥量同小鼠耳腫脹實驗.將基質(zhì)或藥物涂布在大鼠肛門周圍粘膜處，每天1次，連續(xù)給藥10 d.其間，每間隔1天觀察1次潰瘍愈合情況并根據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分.評分標(biāo)準(zhǔn)：有潰瘍滲液給1分；有少許潰瘍滲液給2分；有焦痂基本愈合給3分；完全愈合給4分.

2.8 統(tǒng)計學(xué)方法

3 結(jié)果與討論

3.1 二甲苯所致小鼠耳腫脹實驗

結(jié)果表明，與空白組相比，芙蓉葉痔瘡栓高、中、低劑量組均能夠顯著減輕二甲苯所致小鼠耳廓腫脹程度(P<0.01).高劑量組小鼠耳廓腫脹抑制率達(dá)64.8%，結(jié)果如表1所示.痔瘡是人類所特有的疾病，由于其解剖、生理的原因，難于用四肢行走的動物制造痔瘡的理想模型.因此痔瘡在藥效學(xué)上沒有固定的動物模型，本實驗根據(jù)痔瘡臨床癥狀即紅腫、出血，疼痛應(yīng)用抗炎、止血、鎮(zhèn)痛、抗肛門潰瘍的實驗研究其藥理學(xué)作用.

組別腫脹度/mg抑制率/%空白12.8±4.2-高劑量4.50±1.21)64.8中劑量 8.20±1.31)35.9低劑量9.10±1.91)28.9

注：與空白組比較1)P﹤0.01.

3.2 大鼠足跖腫脹實驗

結(jié)果表明，與空白組相比，從1 h至5 h，芙蓉葉痔瘡栓高劑量組大鼠足跖腫脹度顯著降低(P<0.01)，在第5 h，該組大鼠足跖腫脹度是空白組的48%.2 h至5 h，芙蓉葉痔瘡栓中、低劑量組與空白組均有顯著性差異(P<0.05)，在第5 h，中、低劑量組大鼠足跖腫脹度分別是空白組的69.6%、74.3%.復(fù)方芙蓉葉痔瘡栓高劑量組與中、低劑量組比較均有顯著性差異(P<0.05)，表明給藥后大鼠足跖腫脹度與劑量有關(guān).結(jié)果如表2所示.

3.3 小鼠出血時間的測定

空白組小鼠出血時間為6.34±2.09 min；芙蓉葉痔瘡栓高、中、低劑量組小鼠出血時間分別為3.63±1.47，4.22±1.56，4.79±1.31 min.結(jié)果表明，與空白組相比，芙蓉葉痔瘡栓高、中、低組有明顯的止血作用(P<0.05).

3.4 小鼠鎮(zhèn)痛實驗

結(jié)果表明，芙蓉葉痔瘡栓各劑量組有明顯著的鎮(zhèn)痛作用，與空白組相比有顯著性差異(P<0.01).給藥15 min后芙蓉葉痔瘡栓高、中、低劑量組小鼠的痛閾值分別為36.4 s、28.5 s、26.7 s，給藥30 min后，各組的痛閾值分別降至32.8 s、27.3 s、25.2 s.給藥30 min后小鼠的痛閾值較給藥15 min后要低，其可能的原因是藥物在體內(nèi)代謝，降低了體內(nèi)的藥物濃度.在給藥15 min、30 min后，高劑量組小鼠的痛閾值要顯著低于中、小劑量組(P<0.01)，表明給藥后小鼠的痛閾值與劑量有關(guān).結(jié)果如表3所示.

表2 痔瘡栓對雞蛋清所致大鼠足跖腫脹的影響

注：與空白組比較1)P<0.01，2)P<0.05；與中、低劑量組比較3)P<0.05.

表3 痔瘡栓對小鼠的鎮(zhèn)痛作用

注：與空白組比較1)P<0.01；與給藥前比較2)P<0.01；與中、低劑量組比較3)P<0.01.

3.5 大鼠肛門潰瘍實驗

結(jié)果表明，各給藥組在不同時間分別同空白組相比，對醋酸所致的大鼠肛門潰瘍，在給藥的3～7 d對潰瘍積分無統(tǒng)計學(xué)差異；在給藥后第9 d、11 d，痔瘡栓高、中劑量組與空白組比較有顯著差異(P<0.05).在給藥第9 d、11 d，芙蓉葉痔瘡栓高劑量組抗大鼠肛門潰瘍的積分顯著高于中、低劑量組(P<0.01).表明芙蓉葉痔瘡栓對冰醋酸所致大鼠肛門潰瘍的修復(fù)作用與劑量有關(guān).結(jié)果如表4所示.

表4 痔瘡栓對冰醋酸所致大鼠肛門潰瘍的影響

注：與空白組比較1)P<0.05；與中、低劑量組比較2)P<0.01.

4 結(jié)論

發(fā)生痔瘡的主要原因有：便秘，久坐少動，飲食習(xí)慣不良等[4].中醫(yī)學(xué)認(rèn)為痔瘡的發(fā)病主要與風(fēng)、濕、熱、燥、氣虛、血虛等有關(guān)，劉俊等研究結(jié)果顯示，臟腑積熱、濕熱下注以及熱毒郁結(jié)等是引起痔瘡的重要因素[5-6].芙蓉葉痔瘡栓是純中藥復(fù)方制劑，由黃芪、芙蓉葉、當(dāng)歸、連翹、芒硝、冰片等組成，其中冰片可涼血止血，對痔瘡熱癥便血治療效果顯著[7].

本研究結(jié)果表明，芙蓉葉痔瘡栓有抗炎、止血、鎮(zhèn)痛及抗?jié)冏饔?栓劑是一種給藥方便，副作用小的治療痔瘡的理想劑型，該復(fù)方有望開發(fā)成為一種臨床栓劑用藥.