肖廣慶,李新月,劉欣偉
(1.洛陽(yáng)市畜牧良種繁育推廣中心,河南 洛陽(yáng)471013;2.河南科技大學(xué))
1.1.1 器材
采精器材(假陰道、水浴鍋、集精杯、保定架),精液檢測(cè)(顯微鏡、密度儀、水浴鍋),酸堿滴定(酸度儀、定量滴定管、定量瓶),凍精生產(chǎn)(細(xì)管灌裝機(jī)、冷凍儀、冰箱、冰柜)。
1.1.2 種羊
洛陽(yáng)市畜牧良種繁育推廣中心種羊場(chǎng)肉用種公羊。
1.1.3 稀釋液
羊凍精稀釋液配方主要成分:三羥甲基氨基甲烷、糖類(lèi)、檸檬酸鈉、檸檬酸、卵黃、甘油、抗生素。經(jīng)測(cè)基礎(chǔ)液pH值為6.42,稀釋液pH值為6.45。
1.1.4 標(biāo)準(zhǔn)pH值溶液
氫氧化鈉(pH值為13)。
先用氫氧化鈉溶液滴定10 ml 基礎(chǔ)液,滴定時(shí)記錄每次滴定量(用0.2 ml滴定管或移液槍?zhuān)?,滴定后搖勻用酸度儀測(cè)量pH,測(cè)3 次記錄平均值,直至較理想pH 值(6.6~6.9),計(jì)算滴定量,超過(guò)2 ml,則用較高濃度氫氧化鈉溶液替代,換算滴定量直接滴定。調(diào)好pH值后的基礎(chǔ)液加甘油、卵黃配制成品稀釋液,安排采精、冷凍,觀察活力情況,并與滴定前配方稀釋液進(jìn)行對(duì)比。
酸度儀使用前要用標(biāo)準(zhǔn)液校準(zhǔn),誤差在規(guī)定范圍方可測(cè)定。測(cè)定時(shí)待測(cè)液最好放水浴鍋中,水浴鍋溫度與室溫一致,在酸度計(jì)允許范圍即可,記錄時(shí)3 次測(cè)定取平均值。具體滴定情況見(jiàn)表1:
表1 10 ml基礎(chǔ)液用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉液滴定情況
由表1 可知:10 ml 基礎(chǔ)液滴定0.1 ml NaOH 溶液pH值為6.83,為較理想中性偏酸環(huán)境。配制100 ml基礎(chǔ)液可用1 ml NaOH溶液校準(zhǔn)。
試驗(yàn)組稀釋液用滴定后基礎(chǔ)液(100 ml 原基礎(chǔ)液加1 ml NaOH)加卵黃、甘油配制。對(duì)照組用滴定前基礎(chǔ)液加卵黃、甘油配制。配好后放冰箱(0~4 ℃)保存。
試驗(yàn)組卵黃沉淀較少,對(duì)照組出現(xiàn)大量卵黃沉淀,沉淀均為乳白色顆粒沉淀。搖勻后鏡檢試驗(yàn)組卵黃滴布滿視野,對(duì)照組有少量卵黃滴但不影響視野清晰度。
表2 羊精液稀釋、平衡、冷凍后活力情況
羊鮮精用兩種稀釋液稀釋后放0~4 ℃冰柜平衡4 h、用細(xì)管灌裝冷凍后觀察活力情況。
由表2 可知:對(duì)照組平衡后活力高于試驗(yàn)組,冷凍后卻低于對(duì)照組。說(shuō)明,酸堿滴定雖然可以改變卵黃沉淀,但精子活力下降,并且在顯微鏡下放置10 多分鐘后出現(xiàn)大量聚集死亡現(xiàn)象。[1-2]
羊凍精稀釋液pH 值是導(dǎo)致卵黃沉淀的因素之一,但調(diào)整pH值后仍有少量沉淀,說(shuō)明導(dǎo)致卵黃沉淀的因素除基礎(chǔ)液pH值外還有其他因素存在。
單純用酸堿滴定方法調(diào)整基礎(chǔ)液pH值可能改變稀釋液電離平衡,導(dǎo)致精子產(chǎn)生凝聚反應(yīng)而大量死亡。
稀釋液中加有三羥甲基氨基甲烷等緩沖物質(zhì),酸堿滴定降低稀釋液的緩沖性,導(dǎo)致精子凍傷或死亡,降低凍后活力。如果改用三羥甲基氨基甲烷滴定校準(zhǔn)基礎(chǔ)液酸堿度可能更為合適。