正交試驗法研究果糖二磷酸鈉注射液的制備工藝

張寬才，李晨，陳程

（1.江蘇九旭藥業(yè)有限公司，江蘇徐州 221200；2.兆科藥業(yè)（廣州）有限公司，廣東廣州 511462）

果糖二磷酸鈉注射液主要成分為1,6-二磷酸果糖三鈉鹽，臨床上主要用于改善冠心病的心絞痛、急性心肌梗死、心率失常以及心力衰竭的心肌缺血。在制劑的制備過程中發(fā)現(xiàn)，由于制備工藝的不同，成品含量存在一定的差異，極大地影響了臨床安全用藥。因此采用正交試驗法對果糖二磷酸鈉注射液制備工藝的影響因素進行研究，以解決其含量不穩(wěn)定的問題。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

PHS型酸度計，上海精密科學儀器有限公司；UV-1800型紫外可見分光光度計，上海精密科學儀器有限公司；YB-2澄明度檢測儀，天津市光學儀器有限公司；微孔濾芯，杭州科百特過濾器有限公司。

1.2 試藥

果糖二磷酸鈉，自制，批號為181215；果糖二磷酸鈉對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100539-201703）、焦亞硫酸鈉、鹽酸，藥用，湖南爾康制藥股份有限公司；氯化鈉，注射用，湖南爾康制藥股份有限公司；活性炭，針用，上?；钚蕴坑邢薰尽?/p>

1.3 試驗方法

1.3.1 正交試驗設計[1～3]

果糖二磷酸鈉注射液以果糖二磷酸鈉為原料，如表1所示，考察其制備工藝中，中間品pH值、活性炭量、抗氧劑量3個因素，每個因素取3個水平，選用L9（34）表設計正交試驗方案。

表1 果糖二磷酸鈉注射液制備工藝的因素-水平表

1.3.2 制備工藝過程

取注射用水適量，依次加入處方量的果糖二磷酸鈉、焦亞硫酸鈉、氯化鈉，攪拌30 min使之完全溶解，然后加入活性炭，定容、用HCl調(diào)節(jié)pH后，加熱至煮沸并保溫20 min，然后冷卻，依次通過0.45 μm、0.22 μm的濾器過濾，然后扎蓋、滅菌。

3.3 果糖二磷酸鈉含量測定

對照品溶液的制備，精密稱取果糖二磷酸鈉對照品適量（約相當于無水二磷酸鈉20 mg）,置100 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備，精密量取本品適量，加水稀釋制成每1 ml中含C6H11Na3O12P2約0.2 mg的溶液，搖勻，即得。

測定法，精密量取對照品溶液與供試品溶液各1 ml,分別置于10ml量瓶中，各加8 mol/L鹽酸溶液5 ml與2.5%二苯胺乙醇溶液2 ml搖勻，置于96±1 ℃水浴中加熱30 min，并時時振搖，取出，冷卻至室溫，以70%乙醇稀釋至刻度，照紫外可見分光光度法于638 nm波長處測定吸收度，按外標法計算果糖二磷酸鈉含量。

3.4 游離磷酸鹽含量測定

游離磷酸鹽線性溶液的制備，分別取標準磷酸鹽溶液 5ml、10 ml、15 ml、20 ml、25 ml、30 ml置50 ml量瓶中，各精密加入鉬酸銨硫酸試液5.0 ml與1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液2 ml,加水至刻度，搖勻，在20 ℃左右放置30～50 min，照紫外可見分光光度法于740 nm處測定吸光度，并以吸光度為縱坐標，溶液濃度為橫坐標，既得標準曲線，如圖1所示

圖1 游離磷酸鹽的標準曲線

經(jīng)線性回歸，得游離磷酸鹽的回歸方程為A=0.565X-0.011，A為吸光度，X為游離磷酸鹽濃度，相關(guān)系數(shù)r2=0.998,方法的線性范圍為0.25 mg/L～1.50 mg/L。,供試品溶液的制備，精密量取本品0.2 ml（約相當于果糖二磷酸鈉20 mg）,置50 ml量瓶中，加水15 ml,混合均勻，測定吸光度，另依據(jù)線性回歸方程計算游離磷酸鹽濃度。

3.5 結(jié)果與分析[3～5]

如表2正交試驗結(jié)果可以判斷出，3個因素主次順序為A＞C＞B，最優(yōu)組合為A2B1C3。

表2 正交試驗篩選方案及結(jié)果

根據(jù)本試驗研究目的，確定以果糖二磷酸鈉含量作為考察指標值。如表3所示，對試驗結(jié)果進行方差分析，結(jié)果顯示因素B為主要影響因素。

表3 方差分析表

研究發(fā)現(xiàn)在制備果糖二磷酸鈉注射液過程中，活性炭對果糖二磷酸鈉有一定的吸附作用，其加入量影響成品的含量，因此在制備產(chǎn)品時，可以適當增加果糖二磷酸鈉的投料量；果糖二磷酸鈉在酸性條件下較為穩(wěn)定，在配制藥液時，注意使中間品pH值控制在酸性條件下；抗氧劑焦亞硫酸鈉添加對果糖二磷酸鈉的含量起到一定的穩(wěn)定作用，但是由于其對皮膚、粘膜有明顯的刺激作用，可引起結(jié)膜、支氣管炎癥狀，有過敏體質(zhì)或哮喘的人對此非常敏感，因此其加入量需要嚴格控制，鑒于3個水平無顯著性差異，因此選擇抗氧劑量為0.2%。

3 結(jié)論

控制果糖二磷酸鈉注射液制備工藝關(guān)鍵點，可以有效地解決制劑的含量穩(wěn)定性問題。當中間品pH值保持在4.0，抗氧劑加入量為0.2%，活性炭加入量為0.4%時，能有效地維持制劑含量穩(wěn)定性。