楊紅梅，許 飛，鄭皆煒，向 東，虞 茜，曹鎖春△

1．江蘇省常州市中心血站，江蘇常州 213004；2.上海市血液中心，上海 200050

不規(guī)則抗體是指除抗-A、抗-B紅細胞以外的血型抗體。不規(guī)則抗體是導致溶血性輸血反應、新生兒溶血病、疑難配血及血型鑒定困難的主要原因[1-2]。對獻血員和患者進行抗體篩選，可避免因為找不到相合的血液給患者而延誤治療，因此抗體篩查試驗在臨床配血中非常重要。引起臨床疑難交叉配血最常見的抗體是Rh血型系統(tǒng)的相關(guān)不規(guī)則抗體，該系統(tǒng)不規(guī)則抗體可單獨存在，也可以聯(lián)合其他抗體的形式存在。本實驗室在工作中發(fā)現(xiàn)1例抗-E合并抗-Dia引起的交叉配血不合，現(xiàn)將試驗分析過程報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 患者韓某，女，30歲，因“月經(jīng)量多10余年，彩超發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜增厚等”經(jīng)門診收入院，既往有妊娠史、流產(chǎn)史，抗體篩查陽性，特需配懸浮紅細胞4個單位而送常州市中心血站輸血研究室進行相關(guān)檢測。

1.2試劑與儀器 抗-A/B單克隆抗體(上海血液生物，批號：20180818)；抗-D(IgM)單克隆抗體(北京金豪，批號：2018110104)；ABO血型反定型紅細胞(北京金豪，批號：20190601013)；進口譜細胞(匈牙利，批號：731911)；進口譜細胞(Sanquin，批號：8000257144)；國產(chǎn)譜細胞(上海血液生物，批號：20190530)；抗人球蛋白試劑(上海血液生物，批號：20185001);抗-IgG(上海血液生物，批號：20185102);抗-C3d(上海血液生物，批號：20185202);抗-Dia(CE公司，批號：MDiaM024);抗-C(上海血液生物，批號：20183003)；抗-c(上海血液生物，批號：20183102)；抗-E(上海血液生物，批號：20193201)；抗-e(上海血液生物，批號：20183301)；抗體篩選細胞(上海血液生物，批號：20197026)。聚凝胺試劑由臺灣貝索企業(yè)有限公司提供。久保田KA-2200血清學專用離心機；37 ℃恒溫水浴箱；盧湘儀TD4低速自動平衡離心機；博訊抗人球蛋白卡。

1.3試管法鑒定 ABO正反定型、Coombs試驗、抗體鑒定、交叉配血及微柱法進行抗體特異性鑒定及交叉配血。所有試驗均嚴格按照文獻[3]的方法和試劑操作說明書進行操作。

2 結(jié) 果

2.1血型鑒定(試管法) ABO正反定型結(jié)果見表1，血型為A型。

表1 患者ABO正反定型結(jié)果

注：4+表示凝集強度；0表示陰性。

2.2抗體篩選(試管法) 醫(yī)院送檢單顯示抗體篩選試驗陽性，提示有不規(guī)則抗體存在。筆者進一步做不規(guī)則抗體篩查發(fā)現(xiàn)篩選Ⅰ、Ⅲ細胞在鹽水介質(zhì)中無凝集，在聚凝胺和抗人球蛋白介質(zhì)中均凝集，結(jié)果見表2，其中在聚凝胺介質(zhì)下的凝集強度達到2+，提示該抗體對聚凝胺介質(zhì)敏感。

表2 患者血清與抗篩細胞反應格局與結(jié)果(批號：20197026)

注：+表示極小的細胞凝集混合眾多游離紅細胞；0表示陰性；1+、2+表示凝集強度。

2.3鑒定抗體其特異性(試管法——抗人球蛋白和聚凝胺介質(zhì)) 從篩選試驗格局中初步推斷血清中存在Rh系統(tǒng)血型抗體，進一步鑒定抗體特異性。國產(chǎn)譜細胞和進口譜細胞在鹽水介質(zhì)均出現(xiàn)凝集。進口譜細胞在聚凝胺介質(zhì)2、4、9號出現(xiàn)凝集，在抗人球蛋白介質(zhì)中2、4、7、9號出現(xiàn)凝集。國產(chǎn)譜細胞在聚凝胺介質(zhì)2、4、5、6號出現(xiàn)凝集，在抗人球蛋白介質(zhì)中2、3、4、5、6號出現(xiàn)凝集。對照進口譜細胞格局表和國產(chǎn)譜細胞初步判斷為抗-E合并抗-Dia不能排除抗-Cw；試驗結(jié)果見表3、4。進一步做Rh系統(tǒng)和Diego系統(tǒng)抗原表型分型試驗，結(jié)果見表5。該患者Rh分型為CCee，Diego系統(tǒng)分型為Di(a-)，與血清中相應抗體基本吻合，仍需采用吸收放散試驗來進一步排除是否存在抗-Cw。

表3 患者血清與進口譜細胞反應格局及結(jié)果(REAGENS，批號：731911)

注：+表示極小的細胞凝集混合眾多游離紅細胞；0表示陰性；1+、2+表示凝集強度；s表示稍強；w表示稍弱。

表4 患者血清與國產(chǎn)譜細胞反應格局及結(jié)果(批號：20190530)

注：+表示極小的細胞凝集混合眾多游離紅細胞；0表示陰性；/表示未檢測；1+表示凝集強度；s表示稍強；w表示稍弱。

表5 患者Rh抗原分型和Diego抗原分型結(jié)果

注：1+、2+、3+、4+表示凝集強度；0表示陰性。陽性對照S3細胞為篩選細胞中的Ⅲ號細胞；Diego系統(tǒng)陽性對照細胞為國產(chǎn)譜細胞3號細胞。

2.4吸收放散試驗 該患者Rh基因分型為CCDee，Diego系統(tǒng)分型為Di(a-)。不同血型系統(tǒng)抗體在譜細胞試驗中可能會有干擾而影響反應格局，為了進一步確定抗體特異性，于是對患者標本進行吸收放散試驗，挑選E抗原陽性、Dia抗原陰性的細胞混合液(進口譜細胞2號和4號)與患者血清采用熱吸收酸放散方法(37 ℃ 30 min),將放散液與吸收后的血清進一步進行譜細胞試驗，見表6，試驗結(jié)果表明患者血清中確實存在抗-E和抗-Dia。為排除抗-Cw，選擇了Sanquin譜細胞中的1、2、6號細胞檢測，發(fā)現(xiàn)1、2號譜細胞均為陰性，6號陽性；說明血清中未檢出抗-Cw，試驗結(jié)果見表7。

2.5抗-Dia和抗-E效價測定 采用試管法對血清倍比稀釋(準備2排試管)，第1管血清50 μL，第2管為血清50 μL與50 μL生理鹽水混合液，將第2管中的50 μL混合液移置第3管，以此類推。第1排試管效價測定所用細胞為進口譜細胞7號與國產(chǎn)譜細胞3號細胞混合液；第2排效價測定所用細胞為進口譜細胞2號與國產(chǎn)譜細胞4號細胞混合液。向相應的試管中加入混合細胞量50 μL，整個體系為100 μL，分別做室溫、37 ℃抗人球蛋白介質(zhì)下抗-E和抗-Dia的抗體效價。結(jié)果在抗人球蛋白介質(zhì)中抗-E、抗-Dia效價分別為2、4；試驗結(jié)果見表8。本實驗室以出現(xiàn)±的最高稀釋倍數(shù)為最終效價。

表6 吸收放散譜細胞試驗結(jié)果(進口譜2號和4號)

注：0表示陰性；1+、2+表示凝集強度；w表示稍弱。

表7 患者血清與部分譜細胞反應結(jié)果

注：+表示極小的細胞凝集混合眾多游離紅細胞；0表示陰性；/表示未檢測；1+表示凝集強度。

表8 抗-E和抗-Dia效價測定

注：J7+G3為匈牙利譜7號+國產(chǎn)譜細胞3號紅細胞混合液；G4+J2為國產(chǎn)譜細胞4號與匈牙利譜2號紅細胞混合液；0表示陰性；±表示弱陽性；1+、2+表示凝集強度；w表示稍弱。

2.6交叉配血試驗 根據(jù)疑難配血申請單篩選2袋獻血者條碼為9001819233675/9001819233675、A型、RhD陽性、其他血型為“CCee且Di(a-)”的血樣做主次側(cè)交叉配血試驗，在鹽水、聚凝胺、抗人球蛋白3種介質(zhì)中均無凝集、無溶血，可輸注上述懸浮紅細胞4個單位。跟蹤該患者，血紅蛋白上升了25 g/L左右，輸血效果良好。

3 討 論

臨床上交叉配血不合的原因眾多，在進行血液篩查的每個環(huán)節(jié)都可能導致配血不合。在輸血前的血液檢測中，不規(guī)則抗體篩選陽性是導致不合的常見現(xiàn)象。Rh血型系統(tǒng)在輸血工作中的重要性僅次于ABO血型系統(tǒng)。當抗體性質(zhì)為IgG類，優(yōu)先考慮Rh血型系統(tǒng)抗體，這是因為Rh血型系統(tǒng)抗原性強度僅次于ABO血型系統(tǒng)?？?E是RhD陽性者最易產(chǎn)生的抗體，往往抗-c會伴隨著抗-E同時出現(xiàn)。該患者Rh抗原分型為CCDee，缺乏E和c抗原，妊娠、流產(chǎn)等過程受免疫刺激導致產(chǎn)生了免疫性抗-E和抗-c，當再次輸血時就可能會出現(xiàn)交叉配血不合[4-6]。Diego血型系統(tǒng)包含21個抗原，其中Dia和Dib、Wra和Wrb兩對等位基因是最具有臨床意義的抗原[7]。在Diego血型系統(tǒng)中，Dia抗原是相對低頻抗原，Dib抗原是相對高頻抗原。有文獻報道中國漢族Dia抗原頻率約為10%且大多數(shù)人表型為Di(a-b+)。Diego血型抗體都是免疫產(chǎn)生，屬于IgG性質(zhì)，只能借助抗人球蛋白介質(zhì)試驗才能檢出，酶法和補體均不能增強反應；一般抗-Dia引起的輸血反應多為遲發(fā)型和溫和型。本案例在試驗過程中發(fā)現(xiàn)，抗-Dia在聚凝胺介質(zhì)中未見凝集，抗人球蛋白介質(zhì)中出現(xiàn)2+凝集強度；而抗-E在聚凝胺介質(zhì)中格局清晰。當血清中出現(xiàn)Diego血型抗體時，往往會伴隨1種或2種以上的抗體，此時混合抗體使得紅細胞破壞程度增加，導致出現(xiàn)溶血性輸血反應臨床癥狀。因此應根據(jù)抗體性質(zhì)采用靈敏度和特異度相適宜的檢測方法，對于兩種及以上的混合抗體要結(jié)合吸收放散試驗等方法鑒定清楚以確保結(jié)果準確、快速，最大限度避免輸血反應，保障臨床輸血安全。不規(guī)則抗體陽性的患者一旦輸注含有相應抗原的紅細胞，抗原抗體在補體的參與下發(fā)生免疫反應，導致輸注的紅細胞溶解破壞，嚴重時甚至危及生命。因此輸血前應盡可能了解患者輸血史、妊娠史、用藥史，及時發(fā)現(xiàn)有臨床意義的抗體，以選擇其抗原陰性的血液，保證輸血安全有效[8-10]。

(志謝：在此感謝上海市血液中心血型參比實驗室老師們的遠程指導！)