一株拮抗水稻條斑病菌的蠟樣芽孢桿菌的分離和鑒定

李生樟　劉昭　楊瑞環(huán)　陳穎　鐘佑寧　陳路生　屈伊凝　陳功友　鄒麗芳

摘要：水稻條斑病菌（Xanthomolias oryzae pv. oryzicola，Xoc）侵染水稻，引起細(xì)菌性條斑?。╞acterial leaf streak，簡(jiǎn)稱(chēng)BLS），嚴(yán)重威脅水稻的安全生產(chǎn)。為篩選防治BLS的生防細(xì)菌，以Xoc的模式菌株RS105為靶標(biāo)菌，采用平板稀釋和抑菌圈法，從大白菜根際土壤中分離篩選到具有拮抗活性的細(xì)菌菌株512。通過(guò)形態(tài)學(xué)、生理生化特征以及16S rDNA和gyrB序列分析，鑒定菌株512為蠟樣芽孢桿菌，命名為Bacillus cereus 512。抑菌試驗(yàn)顯示，B. cereus 512對(duì)黃單胞菌屬不同種細(xì)菌的拮抗活性存在較大差異，其中對(duì)水稻白葉枯病菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzae，簡(jiǎn)稱(chēng)Xoo）的拮抗效果最強(qiáng)。發(fā)酵液的穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，抑菌活性物質(zhì)對(duì)高溫和蛋白酶不敏感，耐強(qiáng)堿不耐強(qiáng)酸。在原豐早水稻品種上，針對(duì)水稻條斑病防治的初步試驗(yàn)結(jié)果顯示，B. cereus 512對(duì)Xoc在水稻葉片上引起的水漬癥狀的擴(kuò)展具有明顯的抑制作用。綜上所述，B. cereus 512能夠拮抗Xoc和Xoo，在BLS的生物防治中將具有較大的應(yīng)用潛力。

關(guān)鍵詞：水稻條斑病菌;水稻白葉枯病菌;蠟樣芽孢桿菌;生物防治;拮抗活性

中圖分類(lèi)號(hào)： S435.111.4+9文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2020）07-0127-09

水稻條斑病菌（Xanthomolias oryzae pv. oryzicola，簡(jiǎn)稱(chēng)Xoc）是水稻黃單胞菌種下的變種，能侵染水稻，引起水稻細(xì)菌性條斑?。╞acterial leaf streak，簡(jiǎn)稱(chēng)BLS）[1]。在我國(guó)南方水稻產(chǎn)區(qū)，條斑病已逐漸成為水稻上的第四大病害，每年造成10%～30%的減產(chǎn)，嚴(yán)重威脅水稻的安全生產(chǎn)[2-3]。Xoc與水稻的互作不符合基因?qū)蜿P(guān)系，一些含有xa5[4]、Xa23[5]和Xa21[6]等抗性基因的水稻品種對(duì)白葉枯病菌（X. oryzae pv. oryzae，簡(jiǎn)稱(chēng)Xoo）具有較好抗性，但對(duì)Xoc均表現(xiàn)為感病。我國(guó)的一些雜交水稻品種對(duì)Xoc表現(xiàn)為感病，其中有些為高度感病[7]。目前，BLS的防治主要依賴(lài)于化學(xué)藥劑，如噻唑類(lèi)殺菌劑等[8]。這些化學(xué)藥劑的使用容易使病原菌產(chǎn)生抗藥性，且可破壞生態(tài)環(huán)境[9]。近年來(lái)，隨著生物防治措施的提倡和推廣，從農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境中篩選拮抗微生物來(lái)防治BLS的研究成為熱點(diǎn)。

目前，應(yīng)用最廣泛的生防細(xì)菌主要包括鏈霉菌（Streptomyces spp.）、假單胞桿菌（Pseudomonas spp.）以及芽孢桿菌（Bacillus spp.）等[10]，其中芽孢桿菌因具有良好的抗逆性和抗菌活性物質(zhì)多樣性被廣泛應(yīng)用于植物病害的生物防治。蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）是一種需氧的芽孢桿菌，主要分布于水、土壤、植物根圍、動(dòng)物腸道等環(huán)境中，是引起食物污染和食物中毒的主要病原菌。目前有研究表明，B. cereus是土壤中的優(yōu)勢(shì)菌，能促進(jìn)植物生長(zhǎng)，可作植物根際促生菌（plant growth promoting rhizobacteria，簡(jiǎn)稱(chēng)PGPR）[11-12]。B. cereus能分泌多種拮抗真菌、細(xì)菌和線蟲(chóng)的活性物質(zhì)，被廣泛應(yīng)用于植物病害的生物防治[13]。在真菌病害的防治中發(fā)現(xiàn)，B. cereus具有廣譜的抗菌活性，能夠有效抑制小麥全蝕病菌（Colletotrichum acutatum）[14]、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）[15]、枇杷果實(shí)炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioide）[16]、玉米穗腐病菌（Fusarium verticillioides）[17]、百合葉枯病菌（Botrytis elliptica）[18]、苜蓿腐爛病菌（Phytophthora medicaginis）[19]等多種病原真菌的生長(zhǎng)。在線蟲(chóng)病害的防治中發(fā)現(xiàn)，B. cereus能夠產(chǎn)生2種拮抗南方根結(jié)線蟲(chóng)（Meloidogyne incognita）的活性物質(zhì)，同時(shí)，能夠誘導(dǎo)番茄植株產(chǎn)生系統(tǒng)獲得抗性[20-21]。目前，關(guān)于B. cereus對(duì)水稻黃單胞菌具有拮抗作用的報(bào)道較少。

本研究從大白菜根際土壤中分離篩選對(duì)Xoc具有拮抗作用的生防菌并對(duì)其進(jìn)行鑒定，分析其對(duì)2種水稻黃單胞菌的拮抗作用以及拮抗活性物質(zhì)的穩(wěn)定性，初步確定其在水稻組織中是否能夠抑制Xoc引起的水漬狀病斑的擴(kuò)展，以期為BLS的生物防治以及后續(xù)生物農(nóng)藥的研制提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 菌株

本研究所用的菌株512是從福建省三明市尤溪縣西濱鎮(zhèn)西洋村大白菜根際土壤中分離得到的。供試的Xoo、Xoc菌株由本試驗(yàn)收集或者從各省水稻病樣中分離獲得;其他植物病原黃單胞菌為筆者所在實(shí)驗(yàn)室保存的菌株（表1），這些菌株在營(yíng)養(yǎng)瓊脂（NA）培養(yǎng)基上和營(yíng)養(yǎng)肉湯（NB）培養(yǎng)基中，于溫度為28 ℃條件下培養(yǎng)。

1.2 拮抗細(xì)菌的分離和鑒定

每份土樣稱(chēng)取10 g，置于三角錐形瓶中，加入90 mL滅菌水和少許鋼珠，在28 ℃、200 r/min條件下振蕩培養(yǎng)20 min，室溫靜置10 min，制成土壤菌懸液。吸取1 mL菌懸液，依次稀釋成10-3、10-4、10-5 3個(gè)濃度梯度[22]。吸取100 μL菌液，均勻涂布在已加入200 μL指示菌株RS105的NA培養(yǎng)基平板上，28 ℃培養(yǎng)24 h后，觀察抑菌圈的形成情況，挑出對(duì)RS105具有抑菌活性的菌落，純化為單菌落。吸取50 μL單菌落培養(yǎng)后的菌液，調(diào)整其濃度，使其D600 nm（在600 nm處的吸光度）為2.0，進(jìn)行抑菌活性復(fù)篩試驗(yàn)，保存抑菌圈直徑大于4 cm的菌落，進(jìn)行后續(xù)菌株的鑒定。菌株512是從編號(hào)為51的土樣中獲得的，土樣于2018年2月21日采集自福建省三明市尤溪縣西濱鎮(zhèn)西洋村大白菜根際土壤。

將菌株512送至中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（武漢大學(xué)）進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和生理生化特性測(cè)定。根據(jù)《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》[23]對(duì)其產(chǎn)酸產(chǎn)氣、檸檬酸利用、糖醇類(lèi)發(fā)酵、色氨酸脫氨酶活性等生理生化特性進(jìn)行分析。提取菌株512的基因組DNA，采用細(xì)菌16S rDNA基因的特異性引物27F和1492R以及持家基因gyrB的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物純化后，送至鉑尚生物技術(shù)（上海）有限公司進(jìn)行測(cè)序分析。利用NCBI網(wǎng)站的BLAST功能對(duì)所測(cè)的16S rDNA和gyrB序列進(jìn)行同源性分析，確定親緣關(guān)系，最后使用MEGA（6.0）軟件的近鄰（neighbor_joining）法[24]構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.3 B. cereus 512對(duì)黃單胞菌拮抗活性的分析

采用牛津杯法測(cè)定B. cereus 512對(duì)15株Xoc菌株、12株Xoo菌株以及9株其他黃單胞菌屬病菌菌株的拮抗效果。將各供試黃單胞菌單菌落接種于NB培養(yǎng)基中，在溫度為28 ℃條件下培養(yǎng)24 h后，調(diào)節(jié)菌液濃度，使其D600 nm 為2.0，吸取200 μL菌液加入到冷卻至45 ℃ 左右的NA培養(yǎng)基中，充分混合。向牛津杯中加入50 μL B. cereus 512發(fā)酵液，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)，置于溫度為28 ℃條件下培養(yǎng)24 h，測(cè)量和統(tǒng)計(jì)抑菌圈直徑大小。數(shù)據(jù)采用Excel 2010和SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.4 抑菌活性物質(zhì)的穩(wěn)定性分析

將B. cereus 512單菌落接種于3 mL NB中，在28 ℃、180 r/min搖床中培養(yǎng)24 h，得到發(fā)酵液，調(diào)節(jié)菌液濃度，使其D600 nm 為2.0。在檢測(cè)蛋白酶培養(yǎng)基平板中央放置1個(gè)牛津杯，向牛津杯中注入50 μL B. cereus 512發(fā)酵液，在28 ℃培養(yǎng)箱中正向培養(yǎng)2 d后觀察結(jié)果，并測(cè)定酶解圈的直徑，試驗(yàn)重復(fù)3次。

將B. cereus 512單菌落接種于3 mL NB中，在溫度為28 ℃、轉(zhuǎn)速為180 r/min搖床中培養(yǎng)24 h，得到發(fā)酵液。根據(jù)參考文獻(xiàn)[26]、[27]的方法分別檢測(cè)發(fā)酵液經(jīng)過(guò)蛋白酶、酸堿和熱處理后的抑菌活性。向發(fā)酵液中分別加入胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K，使酶的最終濃度為1 mg/mL，37 ℃ 反應(yīng)1 h，測(cè)定不同蛋白酶處理后發(fā)酵液對(duì)RS105的抑菌活性，以不加入酶的發(fā)酵液為空白對(duì)照，測(cè)量抑菌圈直徑。調(diào)節(jié)菌液的pH值為7.0，在此基礎(chǔ)上，用1 mol/L NaOH和1 mol/L HCl調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH值為1、3、5、9、11和13，靜置3 h后測(cè)定不同酸堿處理后發(fā)酵液對(duì)RS105的抑菌活性，測(cè)量抑菌圈直徑。將發(fā)酵液分別在40、50、60、70、80、90、100 ℃等 7個(gè)不同溫度下水浴30 min后立即冷卻至室溫。用牛津杯法測(cè)定不同高溫處理后發(fā)酵液對(duì)RS105的抑菌活性，測(cè)量抑菌圈直徑，空白對(duì)照為未經(jīng)高溫處理（25 ℃）的發(fā)酵液。

1.5 對(duì)病害的抑制活性

將Xoc野生型菌株RS105和B. cereus 512單菌落接種至5 mL NB中，在溫度為28 ℃條件下培養(yǎng)24 h，調(diào)節(jié)RS105的菌液、B. cereus 512菌液濃度使其D600 nm分別為0.3、1.0。采用2種接種方式進(jìn)行接種，治療處理的接種法：利用無(wú)針頭的注射器將RS105菌液（D600 nm=0.3）注射入水稻葉片中，2 h后再注射B. cereus 512菌液（D600 nm=1.0）;預(yù)防處理的接種法：先將B. cereus 512菌液（D600 nm=1.0）注射入水稻葉片中，2 h后再注射接種RS105菌液（D600 nm=0.3）。每種方法接種大約10張葉片，連續(xù)7 d觀察水漬狀病斑的形成情況，7 d后統(tǒng)計(jì)病斑的長(zhǎng)度。其中水稻品種為高感Xoc的原豐早，由湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所肖友倫博士提供，種植于上海交通大學(xué)水稻溫室中，生長(zhǎng)2周左右的水稻苗用于上述接種試驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 水稻條斑病菌拮抗細(xì)菌的分離和鑒定

為從植物根際土壤中篩選出能夠拮抗Xoc的細(xì)菌，從全國(guó)各?。ㄊ?、區(qū)）收集了107份土樣，以Xoc的模式菌株RS105為指示菌。按照常規(guī)的篩選流程篩選了50份土樣，獲得66株具有拮抗活性的細(xì)菌，發(fā)現(xiàn)菌株512對(duì)RS105的拮抗效果非常明顯（圖1-A）。為明確菌株512對(duì)Xoc的拮抗活性，選取15株具有代表性的Xoc菌株進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，菌株512對(duì)這些菌株都具有拮抗活性（圖1-B）。

革蘭氏染色反應(yīng)結(jié)果（圖1-C）表明，菌株512為革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，細(xì)胞呈短桿狀，能夠產(chǎn)生橢圓形的芽孢，且能運(yùn)動(dòng)。在NA培養(yǎng)基上，菌株512能形成乳白色的菌落，菌落表面粗糙、邊緣不規(guī)則、不透明（圖1-D）。進(jìn)一步生理生化特征分析結(jié)果（表2）顯示，菌株512能夠利用檸檬酸，且能夠利用硫代硫酸鈉產(chǎn)生H2S、利用丙酮酸鹽產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，能分泌精氨酸雙水解酶、明膠酶;在碳源利用反應(yīng)中，菌株512能夠利用核糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、淀粉、糖原等多種碳源。根據(jù)《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》，這些生理生化特性與芽孢桿菌具有相似性。將菌株512的16S rDNA序列在NCBI網(wǎng)站上進(jìn)行BLAST分析，發(fā)現(xiàn)其與Bacillus cereus、B. wiedmannii、B. albus等菌株的16S rDNA序列具有100%的同源性，系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果（圖2-A）顯示，它們具有較高的親緣關(guān)系。進(jìn)一步選取持家基因gyrB進(jìn)行分析，序列比對(duì)結(jié)果顯示，菌株512的gyrB與蠟樣芽孢桿菌（B. cereus）的gyrB同源性為99%，據(jù)其構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)結(jié)果（圖2-B）顯示，菌株512與蠟樣芽孢桿菌親緣關(guān)系最近。因此，結(jié)合菌株的形態(tài)、生理生化特征及分子鑒定結(jié)果將菌株512確定為蠟樣芽孢桿菌（B. cereus），命名為蠟樣芽孢桿菌512（B. cereus 512）。

2.2 B. cereus 512對(duì)水稻白葉枯病菌及其他黃單脆菌屬病菌的拮抗活性

Xoc和Xoo為水稻黃單胞菌的2個(gè)致病變種，為檢測(cè)B. cereus 512是否對(duì)Xoo也具有拮抗活性，選取12株Xoo菌株進(jìn)行分析，結(jié)果（圖3-A）發(fā)現(xiàn)，B. cereus 512對(duì)Xoo菌株的拮抗活性非常明顯，且明顯強(qiáng)于對(duì)Xoc菌株，其中對(duì)YC7和XZ35的拮抗效果最明顯，平均抑菌圈直徑分別達(dá)到了65、59 mm。這表明B. cereus 512對(duì)Xoo和Xoc都具有抑制活性。

為明確B. cereus 512是否對(duì)其他植物病原黃單胞菌也具有拮抗活性，選取9株代表菌株進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果（圖3-B）發(fā)現(xiàn)，B. cereus 512對(duì)香蕉枯萎病菌（X. campestris pv. musacearum，簡(jiǎn)稱(chēng)Xcm）、豇豆細(xì)菌性疫病菌（X. axonopodis pv. vignicola，簡(jiǎn)稱(chēng)Xav）、[KG*3]辣椒斑點(diǎn)病菌（X.campestrispv.vesicatoria，簡(jiǎn)稱(chēng)Xcv）以及核桃黑斑病菌（X. campestris pv. juglandis，簡(jiǎn)稱(chēng)Xcj）具有明顯的拮抗活性，對(duì)棉花角斑病菌（X. campestris pv. malvacearum）和菜豆細(xì)菌性疫病菌（X. campestris pv. phaseoli）具有微弱的拮抗活性，對(duì)洋蔥細(xì)菌性葉枯病菌（X. axonopodis pv. allii）、甘蔗流膠病菌（X. axonopodis pv. vasculorum）和大豆斑疹病菌（X. axonopodis pv. glycines）不存在拮抗活性。這些結(jié)果表明，B. cereus 512對(duì)黃單胞菌屬不同種細(xì)菌的拮抗活性存在較大差異，其中對(duì)水稻黃單胞菌Xoo和Xoc的效果最為明顯。

2.3 B. cereus 512抑菌活性物質(zhì)的特性分析

進(jìn)一步分析B. cereus 512抑菌活性物質(zhì)的穩(wěn)定性，結(jié)果（圖4）發(fā)現(xiàn)，B. cereus 512能夠分泌水解牛奶的蛋白酶，將其發(fā)酵液經(jīng)過(guò)蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶處理后，仍具有拮抗Xoc的活性，據(jù)此推測(cè)，B. cereus 512拮抗Xoc的活性物質(zhì)可能不是蛋白類(lèi)物質(zhì)。pH值為7時(shí)，發(fā)酵液具有較好的拮抗活性，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行酸堿調(diào)節(jié)，當(dāng)pH值為1時(shí)，發(fā)酵溶液拮抗Xoc的活性顯著降低，在pH值為3、5的酸性環(huán)境以及pH值為9、11、13等堿性條件下，發(fā)酵溶液仍具有較好的抑制Xoc的活性。將發(fā)酵液進(jìn)行40、50、60、70、80 ℃等5種不同高溫處理后，其拮抗Xoc的活性與室溫（25 ℃）下相比沒(méi)有明顯的變化，在90 ℃和100 ℃ 2種溫度處理下，發(fā)酵液的拮抗活性喪失。綜上所述，B. cereus 512的抑菌活性物質(zhì)能耐堿不耐強(qiáng)酸，具有熱穩(wěn)定性，能耐90 ℃以下的高溫。

2.4 B. cereus 512對(duì)BLS水漬癥狀的抑制作用分析

為測(cè)定B. cereus 512對(duì)Xoc的抑制效果，利用高感Xoc的原豐早水稻品種，采用苗期注射接種法，在水稻葉片中同時(shí)接種B. cereus 512和RS105菌株。接種5 d后發(fā)現(xiàn)，野生型RS105、B. cereus 512治療處理（RS105/512）和預(yù)處理（512/RS105）的水稻葉片出現(xiàn)水漬狀病斑（圖5-A）;接種7 d后，與野生型RS105處理相比，預(yù)防接種（512/RS105）引起的水漬狀病斑長(zhǎng)度顯著變短（圖5-A和圖5-B）。這表明B. cereus 512含有的抑菌活性物質(zhì)在水稻組織中能夠有效抑制Xoc引起的水漬狀病斑的擴(kuò)展。

3 討論

本研究從大白菜根際土壤中篩選得到1株蠟樣芽孢桿菌B. cereus 512，該菌株對(duì)Xoc和Xoo具有明顯的拮抗活性，其發(fā)酵液能夠耐高溫和蛋白酶降解，為水稻黃單胞菌的生物防治提供了新的微生物資源。

根據(jù)形態(tài)、生理生化特征將菌株512鑒定為芽孢桿菌。利用16S rDNA序列進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，其與B. cereus、B. wiedmannii和B. albus等菌株16S rDNA的序列具有100%的同源性，無(wú)法有效確定其分類(lèi)地位。進(jìn)一步選取持家基因gyrB進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，菌株512和B. cereus gyrB基因的同源性為99%;系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析結(jié)果表明，兩者親緣關(guān)系最近。因此，結(jié)合形態(tài)、生理生化特征及分子鑒定將512確定為B. cereus，命名為蠟樣芽孢桿菌512（B. cereus 512）。很多芽孢桿菌如B. velezensis很容易被鑒定為B. subtilis或者B. amyloliquefaciens[28]。在利用分子技術(shù)進(jìn)行鑒定時(shí)，除了考慮16S rDNA序列之外，也需要結(jié)合一些持家基因（例如gyrA或者gyrB）進(jìn)行同源性分析。

已有研究顯示，B. cereus能夠促進(jìn)植物生長(zhǎng)、抗真菌[18]和線蟲(chóng)[20-21]，且能夠產(chǎn)生超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，簡(jiǎn)稱(chēng)SOD），誘導(dǎo)植物的系統(tǒng)抗病性[16]，對(duì)于病原真菌如輪枝鐮刀菌（Fusarium verticillioides）[17]、葡萄炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）[29]以及引起花生仁產(chǎn)后腐爛的曲霉真菌（Aspergillus flavus）[30]等具有明顯的抑制作用，已成功應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐。但關(guān)于B. cereus對(duì)植物病原黃單胞菌具有拮抗活性的報(bào)道較少。本研究發(fā)現(xiàn)，B. cereus 512可以抑制Xcm、Xav、Xcv和Xcj的生長(zhǎng)，對(duì)于Xoo和Xoc的抑制效果最明顯。張榮勝等曾利用解淀粉芽孢桿菌（B. amyloliquefaciens）LX-11菌株來(lái)防治BLS，防治效果可達(dá)60.2%[31]。本研究發(fā)現(xiàn)，B. cereus 512在水稻葉片中能夠抑制Xoc的生長(zhǎng)，限制條斑病癥狀的擴(kuò)展。這預(yù)示著B(niǎo). cereus 512也具有防治BLS的潛力，但是在田間是否具有生防潛力，還需要進(jìn)一步的試驗(yàn)論證。

菌株512的發(fā)酵液雖具有蛋白酶活性，但抑制Xoc的活性物質(zhì)能耐蛋白酶解和高溫，在pH值為3～13之間都能夠維持穩(wěn)定的抑菌活性。這表明，B. cereus 512拮抗Xoc的活性物質(zhì)不是蛋白類(lèi)和常見(jiàn)的脂肽類(lèi)化合物，是否為新的化合物還有待于進(jìn)一步分析。

參考文獻(xiàn)：

[1]Ou S H. Rice diseases[M]. 2nd ed. Kew：Commonwealth Mycological Institute，1985.

[2]裴俊國(guó)，鄒麗芳，鄒華松，等. 水稻條斑病菌xopQ1_（Xoc）在病程中功能的初步研究[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，43（17）：3538-3546.

[3]Nio-Liu D O，Ronald P C，Bogdanove A J. Xanthomonas oryzae pathovars：model pathogens of a model crop[J]. Molecular Plant Pathology，2006，7（5）：303-324.

[4]Suh J P，Jeung J U，Noh T H，et al. Development of breeding lines with three pyramided resistance genes that confer broad-spectrum bacterial blight resistance and their molecular analysis in rice[J]. Rice，2013，6（1）：5.

[5]Wang C L，F(xiàn)an Y L，Zheng C K，et al. High-resolution genetic mapping of rice bacterial blight resistance gene Xa23[J]. Molecular Genetics and Genomics，2014，289（5）：745-753.

[6]Chen S，Lin X，Xu C J，et al. Improvement of bacterial blight resistance of ‘Minghui 63，an elite restorer line of hybrid rice，by molecular marker-assisted selection[J]. Crop Sci，2000，40：239-244.

[7]岑貞陸，黃思良，李容柏，等. 稻種材料抗細(xì)菌性條斑病性鑒定[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（22）：6850-6851，6853.

[8]邢家華，何榮林，張純標(biāo)，等. 20%噻森銅懸浮劑對(duì)水稻白葉枯病和細(xì)菌性條斑病的田間防效[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007（5）：567-568.

[9]周明國(guó)，馬忠華，黨香亮，等. 對(duì)噻枯唑具有抗性的水稻白葉枯病菌菌株的性質(zhì)[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào)，1997，24（2）：155-158.

[10]程 亮，游春平，肖愛(ài)萍. 拮抗細(xì)菌的研究進(jìn)展[J]. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，25（5）：732-737.

[11]Chauhan A K，Maheshwari D K，Kim K，et al. Termitarium-inhabiting Bacillus endophyticus TSH42 and Bacillus cereus TSH77 colonizing Curcuma longa L.：isolation，characterization，and evaluation of their biocontrol and plant-growth-promoting activities[J]. Canadian Journal of Microbiology，2016，62（10）：880-892.

[12]Zhao L F，Xu Y J，Sun R，et al. Identification and characterization of the endophytic plant growth prompter Bacillus cereus strain mq23 isolated from Sophora Alopecuroides root nodules[J]. Brazilian Journal of Microbiology，2011，42（2）：567-575.

[13]管 珺，胡永紅，楊文革，等. 蠟樣芽孢桿菌防治植物病蟲(chóng)害的研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代農(nóng)藥，2007，6（4）：7-10.

[14]王 剛，沈永紅，王俊芳，等. 蠟樣芽孢桿菌B3-7菌株對(duì)小麥全蝕病菌的抑制作用[J]. 河南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2005，35（1）：62-64.

[15]唐容容，楊文革，胡永紅，等. 蠟樣芽孢桿菌CGMCC4348菌株防治番茄灰霉病的效果及機(jī)理研究[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，52（8）：1817-1820.

[16]Wang X L，Wang L，Wang J，et al. Bacillus cereus AR156-induced resistance to Colletotrichum acutatum is associated with priming of defense responses in loquat fruit[J]. PLoS One，2014，9（11）：e112494.

[17]Martínez-lvarez J C，Castro-Martínez C，Sánchez-Pea P，et al. Development of a powder formulation based on Bacillus cereus sensu lato strain B25 spores for biological control of Fusarium verticillioides in maize plants[J]. World Journal of Microbiology & Biotechnology，2016，32（5）：75.

[18]Huang C J，Wang T K，Chung S C，et al. Identification of an antifungal chitinase from a potential biocontrol agent，Bacillus cereus 28-9[J]. Journal of Biochemistry and Molecular Biology，2005，38（1）：82-88.

[19]Silo-Suh L A，Lethbridge B J，Raffel S J，et al. Biological activities of two fungistatic antibiotics produced by Bacillus cereus UW85[J]. Applied and Environmental Microbiology，1994，60（6）：2023-2030.

[20]Gao H J，Qi G F，Yin R，et al. Bacillus cereus strain S2 shows high nematicidal activity against Meloidogyne incognita by producing sphingosine[J]. Scientific Reports，2016，6：28756.

[21]Xiao L，Wan J W，Yao J H，et al. Effects of Bacillus cereus strain Jdm1 on Meloidogyne incognita and the Bacterial community in tomato rhizosphere soil[J]. 3 Biotech，2018，8：319.

[22]陳思宇，張志誼，張榮盛，等. 水稻紋枯病拮抗細(xì)菌的篩選及鑒定[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2013，40（3）：211-218.

[23]東秀珠，蔡妙英. 常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)[M]. 北京：科學(xué)出版社，2001：364-398.

[24]Saitou N，Nei M. The neighbor-joining method：a new method for reconstructing phylogenetic trees[J]. Molecular Biology and Evolution，1987，4（4）：406-425.

[25]Salzberg S L，Sommer D D，Schatz M C，et al. Erratum to：genome sequence and rapid evolution of the rice pathogen Xanthomonas oryzae pv.oryzae PXO99A[J]. BMC Genomics，2008，9（1）：534.

[26]葛平華，馬桂珍，付泓潤(rùn)，等. 海洋解淀粉芽孢桿菌GM-1菌株發(fā)酵液抗菌譜及穩(wěn)定性測(cè)定[J]. 農(nóng)藥，2012，51（10）：730-732，741.

[27]Kilanifeki[KG*2/3]O，Khedher[KG*2/3]S[KG*2/3]B，DammakM，etal.Improvementof

[HT8.][KG2]antifungal metabolites production by Bacillus subtilis V26 for biocontrol of tomato postharvest disease：theory and applications in pest management[J]. Biological Control，2016，95（5）：73-82.

[28]Dunlap C A，Kim S J，Kwon S W，et al. Phylogenomic analysis shows that Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum is a later heterotypic synonym of Bacillus methylotrophicus[J]. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology，2015，65（7）：2104-2109.

[29]Aoki T，Aoki Y，Ishiai S，et al. Impact of Bacillus cereus NRKT on grape ripe rot disease through resveratrol synthesis in berry skin[J]. Pest Management Science，2017，73（1）：174-180.

[30]Kumar S N，Sreekala S R，Chandrasekaran D，et al. Biocontrol of Aspergillus species on peanut kernels by antifungal diketopiperazine producing Bacillus cereus associated with entomopathogenic nematode[J]. PLoS One，2014，9（8）：e106041.

[31]張榮勝，陳思宇，王曉宇，等. 解淀粉芽胞桿菌Lx-11防治水稻細(xì)菌性條斑病應(yīng)用技術(shù)研究[J]. 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)，2013，29（4）：595-600.