何彥春 ，韓慶彥 ，郭慧琳 ,李旭蓉 ，李 珊 ，

（1.張掖市動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅張掖734000；2.甘肅省動物疫病預(yù)防控制中心，蘭州730046）

雞白痢、雞傷寒、雞毒支原體、雞滑液支原體和禽白血病是目前規(guī)模養(yǎng)雞場的常發(fā)病。為了掌握這5 種病在張掖市的感染情況，2019 年6 月，張掖市動物疫病預(yù)防控制中心對張掖市甘州區(qū)、臨澤縣、高臺縣、山丹縣、民樂縣的部分規(guī)模養(yǎng)雞場進(jìn)行了抽樣檢測，初步掌握了張掖市雞白痢和雞傷寒、雞毒支原體、雞滑液支原體、禽白血病目前的感染狀況，為今后的防控工作提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

在甘州區(qū)、臨澤縣、高臺縣、山丹縣、民樂縣各選擇存欄量在1000 只以上的商品代養(yǎng)雞場10個，每場最少隨機(jī)采集140 日齡以上的臨床健康的雞血樣10 份。經(jīng)實驗室分離血清后符合檢測要求的樣品共785 份，其中甘州區(qū)、高臺縣、民樂縣各155 份，臨澤縣175 份，山丹縣145 份。

1.2 所用試劑

雞白痢雞傷寒多價染色平板凝集抗原、陽性血清、陰性血清由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所生產(chǎn)，批號分別為S062809、201803。雞毒支原體平板凝集試驗抗原、陽性血清、陰性血清, 由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所生產(chǎn)，批號為201801。雞滑液支原體平板凝集試驗抗原、陽性血清、陰性血清, 由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所生產(chǎn)，批號為201807。禽白血病P27抗原ELISA 檢測試劑盒，由深圳真瑞生物科技公司生產(chǎn)，批號：2019053001。

1.3 檢測方法

1.3.1 雞白痢和雞傷寒血清平板凝集試驗操作方法

在室溫下滴加雞白痢雞傷寒多價染色平板凝集抗原50μl 于玻璃板上，再加入被檢血清50μl，用牙簽攪勻至直徑為2 cm，不斷搖動玻璃板，計時判定結(jié)果，同時設(shè)陽性血清、陰性血清對照。在2 min 內(nèi)，抗原與陽性血清應(yīng)呈100%凝集，陰性血清不凝集，判試驗有效。被檢血清與抗原出現(xiàn)50%以上凝集者為陽性，不發(fā)生凝集則為陰性，介于兩者之間為可疑反應(yīng)。

1.3.2 雞毒支原體和滑液支原體平板凝集試驗操作方法

室溫中加30μl 被檢血清于玻板上，再加等量染色抗原，用牙簽棒將其混合，輕輕搖動玻板使之混合均勻。試驗設(shè)陽性血清及陰性血清對照。結(jié)果判定：室溫條件下，雞血清2 min 內(nèi)，發(fā)生完全凝集的，判為陽性。如僅在液滴邊緣部分出現(xiàn)凝集，或超過2 min 在邊緣出現(xiàn)凝集，判為可疑。超過規(guī)定時間無凝集者，判為陰性。

1.3.3 禽白血p27 抗原ELISA 檢測方法

1.3.3.1 取預(yù)包被純化抗禽白血病P27 抗原單抗檢測板，每孔加入50μl 微升樣本稀釋液，將陰性對照、陽性對照和待檢樣品各取50μl 加至相應(yīng)微孔中，陰、陽性對照各設(shè)2 孔，待檢樣品設(shè)1孔，蓋好封板膜，輕輕振蕩酶標(biāo)板，充分混勻，置37℃溫育 60 min。

1.3.3.2 揭開封板膜，甩掉孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液250μL，甩去液體，重復(fù)6 次，在干凈吸水紙上拍打去除殘存洗滌液。每孔加入100μL 酶結(jié)合物，蓋好封板膜，置37℃溫育60 min。

1.3.3.3 揭開封板膜，甩掉孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液250μl，甩去液體，重復(fù)6 次，在干凈吸水紙上拍打去除殘存洗滌液。每孔加入顯色液100μl，蓋上封板膜，37℃避光顯色15min。

1.3.3.4 每孔加入終止液 50μl，10 min 內(nèi)在酶標(biāo)儀上于650 nm 讀各孔吸光度OD 值SC。計算出陰性對照孔OD 均值NC 和陽性對照孔OD 均值PC。當(dāng) NC 值＜0.25 且 PC 值 ＞0.7，試驗結(jié)果成立。

1.3.3.5 陰陽性判斷：按照公式計算出IRPC 值，IRPC 值 =（SC-NC）/（PC-NC）×100。如果 IRPC≥20，說明樣品中有禽白血病病毒P27 蛋白，判斷為陽性；如果IRPC＜20，說明樣品中無禽白血病病毒P27 蛋白，判為陰性。

2 結(jié)果

共檢測雞白痢和雞傷寒785 份，檢出陽性76份，陽性率9.7%；檢測雞毒支原體785 份，檢出陽性319 份，陽性率40.6%；檢測雞滑液囊支原體785 份，檢出陽性 213 份，陽性率 27.1%；檢測雞白血病184 份，檢出陽性20 份，陽性率10.9%。詳見表1：檢測結(jié)果匯總表。

表1 ：檢測結(jié)果匯總

3 討論

3.1 雞白痢和雞傷寒是由雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌引起的可經(jīng)種蛋垂直傳播的傳染病，各種日齡的雞均可發(fā)生。董永毅等[1]采用血清平板凝集試驗對江蘇省8 個縣市送檢的21274份血清樣品進(jìn)行雞白痢抗體檢測，結(jié)果表明：8 個縣市均存在不同程度的雞白痢感染情況, 平均陽性率達(dá)25.5%。本次檢測采集的均是140 日齡以上成年商品雞的血樣，且無明顯臨床癥狀。經(jīng)檢測雞白痢和雞傷寒陽性率為9.7%，其中民樂縣陽性檢出率最高，為 15.5%（24/155），高臺縣最低，為3.2%(5/155)。本次檢測中各檢測縣均從無臨床癥狀的雞群中檢出一定比例的雞白痢和雞傷寒陽性病例，說明部分病雞處于隱形感染狀態(tài)，或?qū)儆陔r雞階段感染后的耐過病例。由于用雞白痢雞傷寒多價染色平板凝集抗原無法區(qū)分雞白痢和雞傷寒各自的陽性率，故本次的檢測結(jié)果是雞白痢和雞傷寒兩種病的綜合結(jié)果。對這兩種病的具體感染情況有待于今后進(jìn)一步做細(xì)菌學(xué)檢驗并結(jié)合臨床表現(xiàn)確定。

3.2 雞毒支原體可通過種蛋垂直傳播和直接接觸病雞傳播，主要引起雞群慢性呼吸道疾病，容易繼發(fā)其他疫病造成死亡、飼料轉(zhuǎn)化率降低、產(chǎn)蛋下降等。雞毒支原體在張掖市的規(guī)模養(yǎng)雞場中多發(fā)多見。魏玉明[2]報道，1992 年對 1062 份血樣進(jìn)行檢測，檢出陽性585 份，陽性率為55.1%。本次檢測785 份，檢出陽性319 份，陽性率40.6%,其中民樂縣檢出率最高，為43.9%（68/155）,甘州區(qū)檢出率最低，為32.9%（51/155）。從檢測數(shù)據(jù)初步說明，從1992 年至2019 年，張掖市的雞毒支原體的感染率并未明顯減輕，防控形勢依然很嚴(yán)峻。

3.3 雞滑液囊支原體主要引起雞的關(guān)節(jié)腫大，滑液囊和腱鞘發(fā)炎。該病病程長，經(jīng)常給養(yǎng)雞生產(chǎn)造成難于彌補的損失。冀錫霖等[3]報道，我國雞滑

液囊支原體在國內(nèi)的很多地區(qū)雞群中普遍存在，陽性感染率為20.7%。馬爽等[4]采集來自華北、華中、華南、東北、西北、華東6 個地區(qū)11 個省份無MS 疫苗免疫背景雞場的雞群血樣應(yīng)用平板凝集檢測方法進(jìn)行檢測，平均陽性率為41.42%。近年來，該病的臨床發(fā)病率在張掖市有逐漸增多趨勢。本次共檢測785 份，檢出陽性213 份，陽性率37.1%。其中高臺縣檢出率最高，為 32.9%（51/155）,民樂縣檢出率最低，為 18.7%（29/155）。今后應(yīng)加強對滑液囊支原體的防控力度。

3.4 禽白血病主要要引起感染雞在性成熟前后發(fā)生腫瘤死亡。根據(jù)《禽白血病診斷技術(shù)》（GB／T 26436—2010）[5]，采用禽白血 p27 抗原 ELISA 檢測時，當(dāng)樣本中檢測出禽白血p27 抗原時，判為禽白血陽性，否則判為陰性。本次檢測中利用禽白血p27 抗原ELISA 檢測方法共檢測184 份，檢出陽性20 份，陽性率10.9%。其中高臺縣檢出率最高，為30.60%（51/155）,山丹縣和民樂縣未檢出。臨床檢查健康的雞群中檢出較高比例的禽白血病，說明張掖市部分養(yǎng)雞場中有較高比例的禽白血病隱形感染情況，要引起高度重視，并采取綜合措施加以防控。