楊艷萍 杜藝玫 秦琳 汪巍 魯艷柳 陸安靜 曾瑤 譚道鵬 何芋岐

摘 要 目的：探討絞股藍(lán)總皂苷（GPs）對高膽固醇血癥模型小鼠肝組織中主要尿蛋白（Mups）基因表達(dá)的影響。方法：將C57BL/6J小鼠按體質(zhì)量（BW）分為對照（ND）組、模型（HFD）組和GPs治療（GP）組，每組11只。除ND組外，其余各組小鼠均給予高脂飼料以復(fù)制高膽固醇血癥模型。于飼養(yǎng)的第17周起時，ND組和HFD組小鼠均灌胃等體積0.1%羧甲基纖維素鈉溶液，GP組小鼠灌胃GPs混懸液（250 mg/kg），每日1次，連續(xù)22周。在檢測各組小鼠BW、血糖（BG）、血脂[總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）]水平的基礎(chǔ)上，提取其肝組織總RNA，構(gòu)建逆轉(zhuǎn)錄文庫并進(jìn)行RNA-seq測序;采用主成分分析（PCA）、火山圖、散點圖等方法篩選差異基因;采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法（RT-qPCR）對差異基因進(jìn)行驗證;通過雙變量分析評價差異基因表達(dá)量與上述藥效學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果：與ND組比較，HFD組小鼠BW和血清BG、TC、LDL-C水平均顯著升高（P<0.05）;與HFD組比較，GP組小鼠除BW外上述指標(biāo)均顯著降低（P<0.05）。PCA結(jié)果顯示，ND組和HFD組數(shù)據(jù)分布于不同象限，GP組數(shù)據(jù)分布介于上述兩組之間。經(jīng)高脂飲食誘導(dǎo)后，小鼠肝組織中Mup4、Mup5、Mup11、Mup15、Mup21基因mRNA均顯著上調(diào)（P<0.05）;經(jīng)GPs干預(yù)后，Mup3、Mup4、Mup5、Mup8、Mup12、Mup21基因mRNA均顯著下調(diào)（P<0.05）。在ND組與HFD組、HFD組與GP組中表達(dá)發(fā)生顯著改變且趨勢相反的基因為Mup4、Mup5、Mup21。RT-qPCR驗證結(jié)果顯示，與ND組比較，HFD組小鼠Mup4、Mup5、Mup21基因mRNA的相對表達(dá)量均顯著升高（P<0.05）。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，小鼠Mup5基因mRNA表達(dá)量與血清TC、BG水平（r分別為0.727 1、0.670 6）以及Mup4、Mup21基因mRNA表達(dá)量與血清BG水平（r分別為0.737 8、0.721 5）均成正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：GPs對高膽固醇血癥模型小鼠肝組織中Mups基因的表達(dá)具有一定的調(diào)控作用，可通過回調(diào)Mup4、Mup5、Mup21基因mRNA的過表達(dá)來降低模型小鼠的糖脂水平。

關(guān)鍵詞 絞股藍(lán)總皂苷;高膽固醇血癥;主要尿蛋白;糖脂代謝;轉(zhuǎn)錄組學(xué);小鼠

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To investigate the effects of gypenosides （GPs） on gene expression of major urinary proteins （Mups） in liver tissue of hypercholesterolemia model mice. METHODS： C57BL/6J mice were divided into control （ND） group， model （HFD） group and GPs therapy （GP） group according to body weight （BW）， with 11 mice in each group. Except for ND group， other groups were given high-lipid diet to induce hypercholesterolemia model. From the 17th week of feeding， ND group and HFD group were given constant volume of 0.1%CMC-Na solution intragastrically; GP group were given GPs suspension （250 mg/kg） intragastrically， once a day， for consecutive 22 weeks. BW， the levels of blood glucose （BG） and blood lipid （TC， LDL-C） were detected in each group. Total RNA of liver tissue was extracted， and reverse transcription library was constructed and RNA-seq sequencing was performed. The differentially expressed genes were screened by PCA， volcano map and scatter plot. RT-qPCR was used for verification for differentially expressed genes. The correlation between the expression of differentially expressed genes and the above pharmacodynamic indexes was analyzed by bivariate analysis. RESULTS： Compared with ND group， BW， the levels of BG， TC and LDL-C in HFD group were increased significantly （P<0.05）. Compared with HFD group， above indexes of GP group were decreased significantly except for BW （P<0.05）. PCA showed that the data of ND group and HFD group distributed in different quadrants， and the data distribution of GP group was between above two groups. mRNA of Mup4， Mup5， Mup11， Mup15 and Mup21 in liver tissue of mice were increased significantly after treated with high-fat diet （P<0.05）. mRNA of Mup3， Mup4， Mup5， Mup8， Mup12 and Mup21 were decreased significantly after treated with GPs （P<0.05）. In ND group vs. HFD group and HFD group vs. GP group， mRNA of Mup4， Mup5 and Mup21 genes changed significantly and the trend was opposite. Results of RT-qPCR verification showed that compared with ND group， relative mRNA expression of Mup4， Mup5 and Mup21 gene were increased significantly in HFD group （P<0.05）. Correlation analysis revealed that mRNA expression of Mup5 was positively correlated with the levels of TC and BG （r=0.727 1， 0.670 6， P<0.05）， mRNA expression of Mup4 and Mup21 were positively correlated with the level of BG （r=0.737 8， 0.721 5， P<0.05）. CONCLUSIONS： GPs can regulate the expression of Mups genes in liver tissue of hypercholesterolemia model mice， and reduce glucose and lipid level through regulating the mRNA over-expression of Mup4， Mup5 and Mup21.

KEYWORDS? ?Gypenosides; Hypercholesterolemia; Major urinary proteins; Glucose and lipid metabolism; Transcriptome; Mice

高膽固醇血癥是冠狀動脈粥樣硬化、心肌梗死、腦卒中等多種高致死性心腦血管疾病的直接誘因，其特征主要是血液中脂質(zhì)水平升高、機(jī)體脂質(zhì)代謝紊亂[1]。脂質(zhì)通過與脂質(zhì)運載蛋白結(jié)合并被運輸至各個器官[2]，可見該運載蛋白可能與高膽固醇血癥的形成密切相關(guān)。主要尿蛋白（Major urinary proteins，Mups）是一類分子量為18～19 kDa的脂質(zhì)運載蛋白家族[3]。作為載體，Mups可結(jié)合并運輸親脂性小分子物質(zhì)（如脂肪酸、視黃醇、類固醇和信息素等）[4-5]，并可獨立于化學(xué)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，直接參與機(jī)體糖脂代謝的調(diào)節(jié)[6]。目前，有關(guān)Mups調(diào)節(jié)糖脂代謝的相關(guān)研究相對較少，尚有待深入挖掘;同時，其編碼基因Mups為具有高度多態(tài)性的多基因家族，由21個Mups基因和21個偽基因組成[7-8]。合成Mups的主要部位為肝臟，當(dāng)肝臟受到損傷時，Mups基因的表達(dá)將發(fā)生改變，從而導(dǎo)致脂質(zhì)代謝異常[9]。有研究表明，高脂飲食可引起部分Mups基因mRNA表達(dá)增加;給予藥物治療后，Mups的表達(dá)受到抑制且高脂飲食引起的相關(guān)癥狀得以緩解[10]。由此可見，高脂飲食引起的高膽固醇血癥可能與Mups基因表達(dá)密切相關(guān)，并且藥物可能通過調(diào)控Mups基因的表達(dá)來發(fā)揮對脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用。

絞股藍(lán)為葫蘆科植物絞股藍(lán)[Gynostemma pentaphyllum（Thunb.） Makino]的干燥地上部分，在傣、苗、壯族等多種民族藥中均有應(yīng)用。如《中藥本草·傣藥卷》記載，其能“清火解毒、生肌收斂、降脂減肥，主要用于皮膚瘙癢、高血脂、肥胖病”[11];《中華本草·苗藥卷》記載，其能“清熱解毒、益氣養(yǎng)陰、生津、安神，用于體虛乏力、疲勞失津、慢性支氣管炎”[12]。皂苷類成分是絞股藍(lán)的主要有效成分之一，有文獻(xiàn)報道，絞股藍(lán)總皂苷（Gypenosides，GPs）可顯著降低實驗動物血漿中總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、三酰甘油（TG）水平，并可顯著升高高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平，從而有效改善脂質(zhì)代謝紊亂[13-15]。有研究表明，給予高脂模型大鼠GPs（250 mg/kg）治療12 d后，其血清TC、TG水平均明顯降低[16]。本課題組前期研究也已證實了GPs（250 mg/kg）可通過調(diào)控膽汁酸代謝通路將高脂飲食誘導(dǎo)的高膽固醇血癥模型小鼠血清中TC、LDL-C水平回調(diào)至正常狀態(tài)，有效改善其脂質(zhì)代謝紊亂，使小鼠相關(guān)癥狀得以緩解[17-18]。然而，上述脂質(zhì)水平調(diào)節(jié)作用是否與Mups基因相關(guān)尚未見相關(guān)報道。為此，本研究擬采用轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)（RNA-Seq測序技術(shù)）探討GPs對高膽固醇血脂模型小鼠肝組織中的21個Mups基因表達(dá)的影響，并采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法（RT-qPCR）進(jìn)行驗證，為探討絞股藍(lán)總皂苷降糖降脂的作用機(jī)制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Multiskan GO型全波長酶標(biāo)儀、Nanodrop型超微量分光光度計（美國Thermo Fisher Scientific公司）;2100型生物分析儀、1260型高效液相色譜（HPLC）儀（美國Agilent公司）;Y10型超細(xì)勻漿機(jī)（上海翼控機(jī)電有限公司）;ME204E型電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司;TGL16M型臺式高速冷凍離心機(jī)（長沙邁佳森儀器設(shè)備有限公司）;BGISEQ-500RS基因測序儀（華大基因公司）;Accu-Chek?活力型血糖（BG）儀及配套試紙（德國Roche公司）;C1000 Touch型多功能梯度PCR儀（德國Eppendorf公司）;CFX96 Touch型實時熒光定量PCR儀（美國Bio-Rad公司）。

1.2 藥品與試劑

GPs（陜西中鑫生物技術(shù)有限公司，批號：150522，含量：98.16%）;羧甲基纖維鈉（CMC-Na，成都市科龍化工試劑廠）;TC、LDL-C檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號分別為20160311、20160309）;TRIzol試劑（美國Invitrogen公司）;焦碳酸二乙酯（DEPC）水（北京索萊寶科技有限公司）;PrimeScpiptTM RT Reagent Kit逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（日本Takara公司）;SYBR? Green Super Mix試劑（美國Bio-Rad公司）;異丙醇、氯仿和無水乙醇等均為分析級，水為超純水。

1.3 動物與飼料

SPF級雄性C57BL/6J小鼠，體質(zhì)量為（23±2） g，購自北京華阜康生物科技有限公司，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2014-0004。普通飼料（含23.2%蛋白質(zhì)、12.1%脂肪、64.7%碳水化合物）由江蘇協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司提供，高脂飼料（含20.0%蛋白質(zhì)、60.0%脂肪、20.0%碳水化合物）由美國Research Diets公司提供。

2 方法

2.1 GPs檢測

稱取GPs約100 mg，精密加入80%甲醇10 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率：40 W，頻率：45 kHz）處理40 min后，冷卻至室溫，再次稱定質(zhì)量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，經(jīng)0.22 ?m濾膜濾過后，取續(xù)濾液，即得供試品溶液，按本課題組前期所建HPLC法[17]進(jìn)行定性分析。

2.2 分組、造模與給藥

所有小鼠均適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體質(zhì)量（BW）分為對照（ND）組、高膽固醇血脂癥模型（HFD）組、GPs治療（GP）組，每組11只。按本課題組前期研究方法[18]操作：ND組小鼠給予普通飼料，HFD組和GP組小鼠均給予高脂飼料，共飼養(yǎng)38周。于飼養(yǎng)的第17周起，GP組小鼠灌胃GPs混懸液[250 mg/kg，溶劑為0.1%CMC-Na溶液]，ND組和HFD組小鼠均灌胃等體積0.1%CMC-Na溶液，灌胃體積均為0.1 mL/10 g，每日1次，連續(xù)22周。

2.3 小鼠BW以及BG、血脂水平檢測

于末次給藥后，稱量并記錄小鼠BW。于小鼠尾靜脈取血適量，使用BG儀及配套試紙測定其BG水平。于小鼠眼眶取血適量至1.5 mL離心管中，在4 ℃下以? ?4 500×g離心10 min，分離血清，分別采用單試劑比色法和直接測定法以酶標(biāo)儀檢測小鼠血清TC和LDL-C水平，嚴(yán)格按照相應(yīng)試劑盒說明書操作。

2.4 小鼠肝組織RNA提取

根據(jù)“2.3”項下檢測結(jié)果，每組各隨機(jī)篩選5只小鼠，取其肝組織進(jìn)行RNA提取。取肝組織樣品，加入TRIzol試劑適量，冰上渦旋勻漿;取勻漿液用氯仿200? ?μL萃取，在4 ℃下以12 000×g離心15 min;取上清液，用異丙醇500 μL萃取以富集RNA，在4 ℃下以12 000×g離心15 min;取沉淀（即總RNA），用75%乙醇清洗，在4 ℃下以12 000×g離心15 min;沉淀以適量DEPC水溶解，使用超微量分光光度計檢測總RNA樣品的濃度和純度[以光密度比值（OD260 nm/OD280 nm）表示]。

2.5 cDNA建庫與RNA-Seq測序

選擇“2.4”項下質(zhì)量合格[即經(jīng)生物分析檢測，RNA完整性（RIN）≥7.0、28S/18S≥1.5][19]的總RNA為模板，逆轉(zhuǎn)為cDNA以構(gòu)建文庫，運用BGISEQ-500RS RNA-Seq測序平臺（https：//www.mgitech.cn/product/detail/BGISEQ-500.html）進(jìn)行測序。參照GRCm38/mm10小鼠基因組進(jìn)行比對和注釋，用FPKM（Fragments per kilobase milliom，即在每百萬個Reads值中，來自某基因每千個堿基長度的Reads值）作為Reads值的標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)值輸出矩陣，采用R語言中“MixOmics”工具包對該矩陣進(jìn)行主成分分析（PCA）。從矩陣中提取21個Mups的FPKM值，運用GraphPad Prism 8.0.2軟件繪制火山圖、散點圖以篩選出表達(dá)量（以經(jīng)FRKM進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的Reads值表示）顯著變化的差異基因（P<0.05）。

2.6 差異基因的RT-qPCR驗證

隨機(jī)選取ND、HFD組小鼠各4只，取其肝組織適量，按“2.4”方法提取RNA后，再按照PrimeScpiptTM RT Reagent Kit逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作，將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。逆轉(zhuǎn)錄條件：25 ℃預(yù)熱10 min，37 ℃逆轉(zhuǎn)錄2 h，85 ℃逆轉(zhuǎn)錄酶失活5 min。以上述cDNA為模板，進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)體系（共10 ?L）：cDNA模板2 ?L，上、下游引物（引物序列見表1）各0.06 ?L，2×SYBR? Green Super Mix 5 ?L，DEPC水2.88 ?L;反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性3 min;94 ℃變性10 s，60 ℃延伸45 s，共39個循環(huán)。以GAPDH基因為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法以Bio-Rad CFX Manager v3.1軟件計算各目標(biāo)mRNA的相對表達(dá)量。

2.7 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料均以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），兩組間比較采用t檢驗;對差異基因和相關(guān)藥效學(xué)指標(biāo)進(jìn)行雙變量相關(guān)性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 GPs定性分析結(jié)果

以信噪比>10為基準(zhǔn)，本研究共確定色譜峰35個（見圖1A），與本課題組前期研究[17]所得色譜圖（見圖1B）基本一致，兩者成分大多均為皂苷類化合物。

3.2 GPs對高膽固醇血癥模型小鼠BW和糖脂代謝的影響

與ND組比較，HFD組小鼠BW以及血清BG、TC、LDL-C水平均顯著升高（P<0.05）;與HFD組比較，GP組小鼠血清BG、TC、LDL-C水平均顯著降低（P<0.05）[17-18]，詳見表2。

3.3 小鼠肝組織中Mups基因的表達(dá)差異

3.3.1 PCA結(jié)果 取3個主成分（PC1～PC3）繪制三維得分圖，見圖2。由圖2可見，ND組和HFD組的數(shù)據(jù)基本分布于不同象限，在PC2、PC3方向上有所區(qū)分;GP組在上述區(qū)分作用上具有一定的回調(diào)趨勢，其數(shù)據(jù)分布介于ND組和HFD組之間。

3.3.2 Mups基因表達(dá)顯著變化的分析結(jié)果 在高脂飲食壓力下，小鼠肝組織中Mup4、Mup5、Mup11、Mup15、Mup21基因mRNA均顯著上調(diào)（P<0.05，見圖3A），且上述顯著上調(diào)的基因占基因總數(shù)的24%（5/21）（見圖3B）。經(jīng)GPs干預(yù)后，Mup3、Mup4、Mup5、Mup8、Mup12、Mup21基因mRNA均顯著下調(diào)（P<0.05，見圖3C），且上述顯著下調(diào)基因占基因總數(shù)的29%（6/21）（見圖3D）。

3.3.3 高脂飲食與GPs對Mups基因表達(dá)影響的差異分析結(jié)果 以HFD組與ND組表達(dá)量差異倍數(shù)的對數(shù)值（log2FC）為橫坐標(biāo)、GP組與HFD組的log2FC為縱坐標(biāo)繪制散點圖，對21個Mups基因進(jìn)行分析，詳見圖4[圖中，表示在ND組與HFD組、HFD組與GP組中表達(dá)變化趨勢相反且差異顯著的mRNA（P<0.05），表示僅在ND組與HFD組表達(dá)顯著變化的mRNA（P<0.05），表示僅在HFD組與GP組表達(dá)顯著變化的mRNA（P<0.05），表示變化無統(tǒng)計學(xué)意義的mRNA（P>0.05）]。由圖4可見，Mups基因主要分布于第4象限內(nèi)，提示高脂飲食可上調(diào)Mups基因mRNA的表達(dá);經(jīng)GPs干預(yù)后，Mups基因mRNA的表達(dá)被顯著回調(diào)。同時，該散點圖顯示，在ND組與HFD組、HFD組與GP組中表達(dá)發(fā)生顯著改變且趨勢相反的基因為Mup4、Mup5、Mup21，即高脂飲食可顯著上調(diào)Mup4、Mup5、Mup21基因mRNA的表達(dá)，而GPs可顯著回調(diào)上述基因mRNA的表達(dá)。此外，以mRNA表達(dá)量（即經(jīng)FPKM進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的Reads值）為指標(biāo)的分析也得出了相同的結(jié)果：與對照組比較，HFD組小鼠肝組織中Mup4、Mup5、Mup21基因mRNA的表達(dá)被顯著上調(diào)（P<0.05）;給予GPs干預(yù)后，Mup4、Mup5、Mup21基因mRNA的表達(dá)均被顯著下調(diào)（P<0.05），詳見表3。

3.4 RT-qPCR驗證結(jié)果

采用RT-qPCR法對RNA-seq數(shù)據(jù)進(jìn)行驗證，結(jié)果見表4。由表4可見，與ND組比較，HFD組小鼠肝組織中Mup4、Mup5、Mup21基因mRNA的相對表達(dá)量均顯著升高（P<0.05），與前文結(jié)果基本一致。

3.5 差異基因與藥效學(xué)指標(biāo)相關(guān)性分析結(jié)果

相關(guān)性分析結(jié)果顯示，小鼠Mup5基因mRNA表達(dá)量與血清TC、BG水平（r分別為0.727 1、0.670 6）以及Mup4、Mup21基因mRNA表達(dá)量與血清BG水平（r分別為0.737 8、0.721 5）均成正相關(guān)（P<0.05），詳見圖5。

4 討論

脂質(zhì)代謝紊亂是高膽固醇血癥的主要病理因素，也是引起機(jī)體糖脂代謝紊亂的關(guān)鍵因素之一。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，GPs可顯著降低高膽固醇血癥模型小鼠血清TC、LDL-C、BG水平，具有降低血脂和血糖的作用[17-18]。Mups是脂質(zhì)運載蛋白家族成員，在嚙齒動物肝臟中表達(dá)并通過尿液排泄到體外，可通過結(jié)合的方式運輸脂肪酸、視黃醇、類固醇等脂質(zhì)，從而參與調(diào)節(jié)機(jī)體糖脂代謝[4-5，20]。研究表明，脂質(zhì)運載蛋白家族成員Lcn2在妊娠期糖尿病患者體內(nèi)的表達(dá)增加，可導(dǎo)致其血脂代謝紊亂[21]。因此，筆者推測調(diào)控脂質(zhì)運載家族Mups基因的表達(dá)可能與血脂水平調(diào)節(jié)有關(guān)。已有研究表明，GPs可調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，具有良好的降血糖、降血脂、保肝和抗炎等藥理作用[22-24]。本研究在前期藥效學(xué)研究的基礎(chǔ)上，借助RNA-Seq測序技術(shù)初步探討了GPs對小鼠肝組織中Mups基因表達(dá)的影響，旨在挖掘GPs通過調(diào)控Mups基因表達(dá)從而降低血脂的可能機(jī)制。

本研究從整體層面分析發(fā)現(xiàn)，GPs對高膽固醇血癥模型小鼠肝組織中Mups基因mRNA的表達(dá)具有顯著的回調(diào)作用，表明GPs改善高膽固醇血癥的作用可能與Mups基因有關(guān)。有研究報道指出，胰島素與Mups基因有密切的聯(lián)系，在1型糖尿病模型大鼠肝組織中，Mups基因的表達(dá)水平顯著降低;給予胰島素后，肝組織中Mups基因的表達(dá)水平顯著升高，且有隨胰島素水平升高而上升的趨勢[25-26]。由此可見，長期高脂飲食導(dǎo)致的高血糖和胰島素抵抗可使機(jī)體代償性分泌過量的胰島素，從而引起Mups基因表達(dá)水平升高[27]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高脂飲食誘導(dǎo)可導(dǎo)致小鼠BW和血清BG、TC、LDL-C水平以及肝組織中Mup4、Mup5、Mup21基因mRNA的表達(dá)顯著升高，且RT-qPCR驗證試驗結(jié)果與之一致。這提示Mup4、Mup5、Mup21基因表達(dá)異常升高可能與小鼠體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂有關(guān)，Mups基因的過表達(dá)可能參與了高膽固醇血癥的發(fā)生，與相關(guān)研究[10]結(jié)果基本一致。給予GPs干預(yù)后，小鼠血清BG、TC、LDL-C水平以及肝組織中Mup4、Mup5、Mup21基因mRNA的表達(dá)均顯著降低;相關(guān)性分析結(jié)果顯示，小鼠Mup5基因mRNA表達(dá)量與血清TC、BG水平以及Mup4、Mup21基因mRNA表達(dá)量與血清BG水平均成正相關(guān)。這提示小鼠體內(nèi)糖脂代謝紊亂的改善可能與GPs下調(diào)上述基因mRNA的表達(dá)有關(guān)。

肝臟Mups可能作為與能量代謝有關(guān)的分子開關(guān)，參與小鼠機(jī)體營養(yǎng)狀況的調(diào)節(jié);在經(jīng)長時間飲食控制后，其Mup4、Mup5、Mup21基因表達(dá)降低[28]。本課題組前期研究表明，GPs可以顯著調(diào)控膽汁酸相關(guān)基因（Cyp7a1、Cyp8b1）的表達(dá)，促進(jìn)肝臟膽固醇轉(zhuǎn)化成膽汁酸[18]。膽汁酸能夠通過激活鞘氨醇-1-磷酸（S1P）受體來上調(diào)鞘氨醇激酶2，從而升高S1P的表達(dá)水平[29]，而S1P與Mups基因的表達(dá)水平成負(fù)相關(guān)[30]。由此筆者推測，GPs可能通過促進(jìn)膽汁酸合成、上調(diào)S1P表達(dá)、下調(diào)Mups基因表達(dá)進(jìn)而調(diào)節(jié)機(jī)體血脂水平，但具體機(jī)制有待后續(xù)研究進(jìn)一步探討。

綜上所述，GPs對高膽固醇血癥小鼠肝組織中Mups基因過表達(dá)有顯著回調(diào)作用，可能是其降低糖脂水平的作用機(jī)制之一。此外，本研究未涉及GPs對Mups蛋白表達(dá)的影響，將對此進(jìn)一步進(jìn)行后續(xù)研究。

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（收稿日期：2020-03-08 修回日期：2020-06-19）

（編輯：張元媛）