不同產(chǎn)地杭白菊多糖的含量測定

李振 劉偉德 牛文杰 孫紅梅 曹美芳 高群玉

摘 要：目的：建立杭白菊多糖的測定方法，比較不同產(chǎn)地杭白菊多糖含量的差異，為杭白菊的質(zhì)量評價提供科學(xué)依據(jù)。方法：采用高錳酸鉀滴定法測定浙江桐鄉(xiāng)、江蘇射陽等5個產(chǎn)地杭白菊多糖含量，并進(jìn)行方法學(xué)考察。結(jié)果：杭白菊多糖的含量線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性、回收率及穩(wěn)定性測定結(jié)果均符合要求，不同產(chǎn)地杭白菊中多糖含量范圍為5.27%～8.72%。結(jié)論：不同產(chǎn)地的杭白菊中多糖含量有一定差異，在評價的樣本中，山東臨沂地區(qū)杭白菊多糖含量最高。

關(guān)鍵詞：杭白菊;菊花;多糖;高錳酸鉀法

菊花系菊科植物菊的干燥頭狀花序，味甘、性寒，具有散風(fēng)清熱、明目、解毒等功效[1]。作為藥食兩用植物，菊花在我國已有3 000 多年的栽培歷史[2]。菊花的化學(xué)成分較為復(fù)雜，主要有黃酮類、揮發(fā)油類、綠原酸、多糖類等[3-4]。其中，菊花多糖有抗氧化、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、降血糖等多種藥理活性[5-9]，具有良好的預(yù)防保健作用。杭白菊原產(chǎn)于浙江桐鄉(xiāng)地區(qū)，近年來由于市場需求不斷擴(kuò)大，杭白菊已在全國多地引種栽培[10]。但由于各產(chǎn)地的氣候環(huán)境、栽培方式等差異，造成各地杭白菊的質(zhì)量不一。本研究采用高錳酸鉀法對不同產(chǎn)地杭白菊中的多糖含量進(jìn)行測定評價，以期為杭白菊的質(zhì)量控制、引種栽培及綜合開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

杭白菊（產(chǎn)地浙江桐鄉(xiāng)、江蘇射陽、山東臨沂、河南武陟、安徽亳州），購自于市場。試劑：無水乙醇、濃鹽酸、濃硫酸、硫酸鐵銨、硫酸銅、酒石酸鉀鈉、氫氧化鈉、高錳酸鉀、葡萄糖（105℃恒溫烘干至恒重）等，均為分析純。

甲費林氏液：稱取34.91 g分析純CuSO4·5H2O于煮沸過的水中，稀釋至500 mL。乙費林氏液：稱取173g分析純酒石酸鉀鈉及50g分析純氫氧化鈉于煮沸過的水中，稀釋至500 mL。硫酸鐵銨溶液：稱取135 g硫酸鐵銨，加水適量，邊超聲邊攪拌溶解，并稀釋到1 000 mL。高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定液（0.1N）：稱取3.3 g高錳酸鉀于1 000 mL水中，緩緩煮沸20～30min，冷卻后于暗處密閉保存數(shù)日，用耐酸濾過漏斗過濾，保存于棕色瓶中。

1.2 試驗儀器

HH-2 型數(shù)顯恒溫水浴鍋，江蘇金壇市富華儀器有限公司;LXJ-IIB離心機(jī)，上海安亭;BS224S 型電子天平，德國賽多利斯。

1.3 菊花多糖供試液的制備

取菊花粉末（過2號篩）約2.0 g，精密稱定，加40倍水至燒瓶中，100 ℃回流提取2h，提取完畢后，趁熱抽濾，將濾渣和濾紙置燒瓶中，重復(fù)上述提取1次，合并兩次濾液，水浴蒸至約15 mL。轉(zhuǎn)移，稱重，加入3倍重量的95%乙醇，靜置4h以上，離心，再經(jīng)75%乙醇洗滌，沉淀物轉(zhuǎn)移燒瓶中，加入25%鹽酸15 mL，沸水浴中回流水解2h，過濾，定容。

1.4 菊花多糖含量的測定

吸取甲、乙費林氏液各15 mL，置于三角瓶中，加入樣品水解液10 mL，另外量取適量沸水，各加15 mL的甲、乙費林氏液，做空白樣。加熱樣品液，保持沸騰約2min。抽濾，取硫酸鐵銨溶液50 mL，分?jǐn)?shù)次溶解漏斗中紅色沉淀物，收集濾液，加入2 mol/L硫酸20 mL，用0.02mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定液滴定至微紅色并保持30 s不褪色為終點。根據(jù)式（1）計算所得氧化亞銅質(zhì)量：

X1=V-V0×N×71.54 （1）

式（1）中，X1—樣品中還原糖質(zhì)量相當(dāng)于氧化亞銅的質(zhì)量（mg）;V —測定用樣品液消耗高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（mL）; V0—試劑空白消耗高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（mL）;N—高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的當(dāng)量濃度（N）。

根據(jù)式（2）計算樣品中還原糖含量：

粗多糖含量X2%=

m1m2×（100%-X）×V×1000×100×0.9×100%（2）

式（2）中，m1—查表得還原糖質(zhì)量（mg）;m2—原料質(zhì)量（g）;V—測定用樣品溶液的體積（mL）;X—樣品水分含量（%）;0.9—還原糖折算成多糖的換算系數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取同一批菊花粉末按照“1.3”項下制備樣品溶液，分別取1、2、4、6、8、10、15、20 mL于費林氏液甲乙混合液中，按照“1.4”項下試驗，以減去空白后樣液消耗的高錳酸鉀滴定液的體積為縱坐標(biāo)，取樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸得：y=0.388 8x+0.059 2，R2=0.999 1。附圖結(jié)果表明，高錳酸鉀滴定法檢測菊花多糖具有良好的線性關(guān)系。

2.2 回收率試驗

取同一批菊花粉末按照“1.3”項下制備樣品溶液，量取5 mL樣品溶液至錐形瓶中，分別加入2、4、6、8、10 mL的 1 mg/mL葡萄糖溶液，測定還原糖的量。由表1可知，該試驗方法的平均回收率為102.5%，RSD值為4.5%，表明方法準(zhǔn)確性良好。

2.3 精密度試驗

取同一批菊花樣品，按照“1.3”項下方法平行制備并測定6份平行樣中的粗多糖含量。由表2可見，多糖含量的RSD為3.8%，表明方法準(zhǔn)確性良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗

將菊花多糖水解液，分別放置0、12、24、48h后再按照 “1.4”項下方法測定。由表3可見，多糖含量的 RSD值為3.6%，表明樣品溶液在48 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5 樣品含量測定

稱取不同產(chǎn)地菊花，每個產(chǎn)地測定5個批次，每批次處理1份樣品，按照上述“1.3”項下制備方法，制備樣品溶液，按照“1.4”項下方法進(jìn)行測定，計算不同產(chǎn)地菊花多糖的含量。由表4可知，不同產(chǎn)地杭白菊中多糖含量差異較明顯，其中山東臨沂產(chǎn)的多糖含量最高，為8.10%。

3 結(jié)論

因多糖組成和結(jié)構(gòu)本身比較復(fù)雜，不同來源的多糖理化性質(zhì)差異較大，目前還沒有統(tǒng)一的測定方法。菊花多糖的測定方法目前研究較多的為苯酚-硫酸法，而其他測定方法研究的較少。苯酚-硫酸法雖準(zhǔn)確性高、重復(fù)性良好，但需用到高濃度硫酸和有一定毒性的苯酚，致操作安全性相對較低。本研究采用高錳酸鉀法首次對杭白菊多糖進(jìn)行了測定，結(jié)果表明，該方法的線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性、回收率及穩(wěn)定性均較好。另外，鑒于方法簡單、易掌握、安全性好、無需使用高級儀器等優(yōu)點，便于藥材種植戶和生產(chǎn)企業(yè)等對菊花進(jìn)行質(zhì)控，可行性和實用性較好。

通過對5個地區(qū)所產(chǎn)杭白菊的多糖含量進(jìn)行檢測分析，結(jié)果顯示其多糖含量分布范圍為5.27% ～ 8.72%，差異較明顯，其中以山東臨沂為最高、江蘇射陽最低。

整體來看，地理位置偏北的產(chǎn)區(qū)比偏南的產(chǎn)區(qū)出產(chǎn)的杭白菊多糖含量高。對于這一現(xiàn)象，可研究杭白菊的地理位置、環(huán)境氣候、栽培技術(shù)等因素對多糖含量的影響來進(jìn)一步分析闡明。

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Abstract：ObjectiveTo establish a method for the determination of polysaccharides in Hangzhou white chrysanthemum and to compare the differences in polysaccharides content of Hangzhou white chrysanthemum from different habitats to provide scientific evidence for its quality evaluation.MethodThe potassium permanganate method was used to determine the polysaccharides content of Hangzhou white chrysanthemum from 5 habitats and the methodology was investigated.ResultThe linear relationship，precision，repeatability，recovery and stability of the method were consistent with requirements.The polysaccharides content in Hangzhou white chrysanthemums from different habitats was 5.27%～8.72%.ConclusionThe content of polysaccharides in Hangzhou white chrysanthemum from different habitats is different.Among the samples evaluated，the polysaccharide content of Hangzhou white chrysanthemum from Linyi area in Shandong province is the highest.

Keywords：Hangzhou white chrysanthemum;Chrysanthemum morifolium;polysaccharides;Potassium Permanganate Method

（責(zé)任編輯 唐建敏）