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      丹參提取物中有效成分的質(zhì)量

      2020-10-27 05:44:58程相前
      科學(xué)與財(cái)富 2020年23期
      關(guān)鍵詞:丹參提取物

      程相前

      摘? 要:中藥在我國(guó)有著數(shù)千年傳承歷史,是我國(guó)最為重要的文化之一,隨著時(shí)代不斷改變,中藥如今已經(jīng)得到廣大醫(yī)務(wù)人員的認(rèn)可,并在臨床方面得到了廣泛的應(yīng)用。但由于中藥成為較為復(fù)雜,為能夠更好的發(fā)揮其作用,會(huì)對(duì)其成分進(jìn)行檢測(cè)。本文以丹參為例,采用薄層層分析法對(duì)丹參提取物中的有效成分質(zhì)量進(jìn)行鑒定,以便能夠更好的了解其成分和在臨床方面的應(yīng)用,并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果采取相應(yīng)措施控制其質(zhì)量。

      關(guān)鍵詞:丹參;提取物;有效成分質(zhì)量

      丹參主要是由鼠尾草屬植物丹參的根制成,在臨床質(zhì)量方面具有祛瘀止痛,活血通絡(luò),清心除煩的療效,屬于較為常見的中藥之一。丹參中含有的化學(xué)成分可以分為兩類,其一是脂溶性,其二是水溶性。二萜類化合物是脂溶性中主要成分,其中大部分都是丹參酮型的二萜類化合物。本文主要對(duì)丹參提取物中含有的脂溶性成分隱丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIA采取相應(yīng)的方式進(jìn)行鑒定,將這三種成分最終檢測(cè)結(jié)果作為丹參提取物有效成分質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),從而為新藥研發(fā)工作提供科學(xué)性參考資料。

      1 儀器與試藥

      Agilent 1100 Series液相色譜儀,電子天平(十萬分之一)隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮IIA對(duì)照品自制;丹參提取物20050901批、20051102批、20051201批(3批中試產(chǎn)品);硅膠G板(自制);甲醇(分析純、色譜純);水為重蒸餾水;醋酸乙酯為分析純。

      2 薄層鑒別

      2.1 供試品溶液制備

      在丹參提取物中稱量適當(dāng)?shù)乃幤贩勰?,將粉末放置于專用器皿?dāng)中,結(jié)合實(shí)際情況選取5ml醋酸乙酯放入于器皿當(dāng)中,使藥末得到充分溶解,利用醋酸乙酯定容到指定刻度,通過上述操作即可得到適用于本次研究過程的試品溶液。

      2.2 對(duì)照品溶液制備

      在選取的樣品當(dāng)中結(jié)合實(shí)際情況稱量適當(dāng)?shù)碾[丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIA等藥品成分,將它們分別放置于專用檢測(cè)器皿當(dāng)中,分別向每個(gè)器皿當(dāng)中加入酷酸乙醋,使其與藥品成分混合,從而完全溶解于酷酸乙醋當(dāng)中,通過上述操作即可得到適用于本次研究過程的對(duì)照品溶液。

      2.3 測(cè)定方法

      參照我國(guó)有關(guān)醫(yī)療單位編寫的《中國(guó)藥典》中記錄的薄層色譜法開展試驗(yàn),從試品溶液當(dāng)中與對(duì)照品溶液當(dāng)中分別抽取5μL液體,并從中抽取一滴液體放置同一硅膠薄層板之上,以石油醚(60~90℃)一醋酸乙酯(7:3)作為此次研究過程的展開劑,準(zhǔn)備工作完成之后將先前抽取的液體平鋪在薄層板之中,取出,放在通風(fēng)之處將其晾干。之后將薄層板放在陽光下觀察液體變化情況,發(fā)現(xiàn)在丹參提取物供試品色譜當(dāng)中有許多斑點(diǎn)出現(xiàn),在對(duì)照品色譜中同樣有許多斑點(diǎn)出現(xiàn),且兩方斑點(diǎn)位置,顏色均相同。

      3 含量測(cè)定

      3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

      迪馬DiamonsiTM(鉆石)C18(250mm×4.6mm,5μm)柱;甲醇-水(85:15)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。柱溫:25℃;流速:1mL/min;進(jìn)樣量10 uL。在上述色譜條件下隱丹參酮、丹參酮I丹參酮IA與其他組分能得到很好的分離。

      3.2 供試品溶液的制備

      在事先準(zhǔn)備的丹參提取物中稱量大約20mg藥品粉末,使其符合實(shí)驗(yàn)要求,將這些粉末放置在容量瓶當(dāng)中,向其中加入適量的甲醇,放在超聲環(huán)境當(dāng)中,直至溶液溫度與室內(nèi)溫度保持一致,向容量瓶中加入甲醇直至指定刻度,搖晃容器使內(nèi)部藥品混合在一起,當(dāng)藥品粉末充分溶解之后將液體倒入過濾器具當(dāng)中,在過濾之后的藥品溶液當(dāng)中稱量5ml液體,將其注入在25ml容量器皿當(dāng)中,再次向其中加入甲醇直至指定刻度,搖晃過濾之后的藥品溶液即可得到供試品溶液。

      3.3 線性范圍考察

      精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥36h的隱丹參酮9.70mg、丹參酮I11.02mg和丹參酮IIA9.99mg分別于50mL量瓶中,加甲醇溶解,搖勻并用甲醇定容至刻度。分別精密吸取對(duì)照品貯備液各2ml至10mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,即得混合對(duì)照品溶液。分別精密吸取混合對(duì)照品溶液適量,用甲醇配制成系列濃度的對(duì)照品溶液。精密吸取上述溶液各10μL進(jìn)樣,以進(jìn)樣溶液的濃度(μg/mL,x)為橫坐標(biāo)、峰面積(y)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

      3.4 實(shí)驗(yàn)

      3.4.1 精密度實(shí)驗(yàn)

      依照本次實(shí)驗(yàn)流程,在相同供試品溶液之內(nèi)根據(jù)試驗(yàn)需求稱量合適溶液10μL,將此操作重復(fù)執(zhí)行六次,記錄色譜峰峰面積,并根據(jù)操作流程計(jì)算其平均峰面積。根據(jù)計(jì)算結(jié)果得出隱丹參酮、丹參酮I丹參酮IIA的RSD分別為1.12%、1.00%和0.99%。從而表明本次實(shí)驗(yàn)過程中使用的儀器在精密度方面沒有任何問題。

      3.4.2 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

      依照供試品溶液制作過程再次制作六份相同的藥品溶液,制成之后從各個(gè)樣品當(dāng)中抽取適量的溶液,其重量大約為10μL,并對(duì)其進(jìn)行檢測(cè),根據(jù)此次檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)樣品中隱丹參酮、丹參酮I丹參酮IIA的RSD分別為0.76%、1.33%和0.95%,此項(xiàng)數(shù)據(jù)表明該檢測(cè)方法具有良好的重現(xiàn)性。

      3.4.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

      在同一品供試品溶液中抽取適量的藥液,其重量大約為10μL,將這份溶液分別放置在4個(gè)實(shí)驗(yàn)器皿當(dāng)中放置12小時(shí),并觀察此期間藥品溶液變化情況,重復(fù)精密度實(shí)驗(yàn)操作流程,得到色譜峰峰面積,記錄其面積并計(jì)算得到丹參提取物中含有的隱丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIA的RSD分別為2.67%、2.44%和2.38%,此次結(jié)果表明12小時(shí)之內(nèi)供試品溶液不會(huì)發(fā)生任何變化。

      3.4.4 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

      取已知含量的樣品適量(批號(hào)20050901),精密稱定,分別精密加入80%、100%、120%的對(duì)照品,按照"供試品溶液的制備"項(xiàng)下方法制備,進(jìn)樣測(cè)定,以加入法計(jì)算回收率。結(jié)果樣品中隱丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIA的平均回收率分別為95.44%(RSD=1.75%)、97.59%(RSD=1.03%)、97.07%(RSD=1.60%)。

      3.5 樣品的測(cè)定

      精密吸取供試品溶液10μL,注入液相色譜儀,測(cè)定,記錄峰面積,計(jì)算隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮IIA的含量。

      4 討論

      4.1 薄層色譜展開劑的選擇

      本次實(shí)驗(yàn)采用了不同比例的石油醚一丙酮、氯仿一丙酮及石油醚-醋酸乙酯系統(tǒng)來作為對(duì)照品及樣品的薄層展開劑,最終以石油醚-醋酸乙酯(7:3)展開為最佳。

      4.2 提取溶劑的選擇

      本次實(shí)驗(yàn)考察了不同的溶劑及不同的提取方法處理樣品,分別采用了乙醇回流法、滲漉法、傳統(tǒng)水煎煮法、乙醇和甲醇的超聲提取法,最后確定用甲醇超聲(30min)提取的方法為最佳。藥品溶液制作方法雖然簡(jiǎn)單便捷,但只能夠適用于此次實(shí)驗(yàn),這就意味上述溶液只能用于檢測(cè)丹參提取物中有效成分質(zhì)量,無法用于其他中藥檢測(cè)過程。

      4.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

      經(jīng)在200~400nm范圍內(nèi)光譜掃描確認(rèn)隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮IIA均在200~290nm波段有吸收,隱丹參酮最大吸收波長(zhǎng)為262nm,丹參酮I最大吸收波長(zhǎng)為245nm,丹參酮IIA最大吸收波長(zhǎng)為270nm。為保證各成分都具合適的靈敏度和精密度,選用了3種成分均有較好吸收且吸收曲線平坦處的270nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

      5 結(jié)束語

      綜上所述可以看出,中藥當(dāng)中含有許多化學(xué)成分,正因如此,重要才能夠在臨床治療過程中發(fā)揮出顯著的療效,本文通過實(shí)驗(yàn)對(duì)丹參中提取物中有效成分進(jìn)行分析,實(shí)驗(yàn)表明單種成分含量情況并不能夠真實(shí)表明中藥本身具體療效,實(shí)驗(yàn)根據(jù)丹參本身藥理確定丹參酮IIA、丹參酮I、隱丹參酮和二氫丹參酮為有效成分質(zhì)量測(cè)定指標(biāo),通過多種體系來評(píng)價(jià)藥材本身質(zhì)量情況,將我國(guó)中醫(yī)藥整體情況以及作用體現(xiàn)出來。該方法操作簡(jiǎn)單便捷無需復(fù)雜流程,實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可以反映出丹參提取物中有效成分的質(zhì)量。

      參考文獻(xiàn)

      [1]郭增軍.丹參提取物中有效成分的質(zhì)量控制及藥動(dòng)學(xué)研究[M].沈陽藥科大學(xué),2008.

      [2]楊洋.丹參提取物中有效成分的質(zhì)量控制及藥動(dòng)學(xué)研究[J].科學(xué)與財(cái)富,2019,000(002):120.

      [3]苑宏亮.丹參提取物中有效成分的質(zhì)量控制及藥動(dòng)學(xué)研究[J].東方食療與保健,2015,000(010):193-193.

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